Ligature permanente de l'artère interventriculaire antérieure coronaire chez la souris: Un modèle de post-infarctus du myocarde et de remodelage de l'insuffisance cardiaque

L’objectif général des expériences suivantes est de présenter la technique de ligature permanente de l’artère coronaire descendante antérieure gauche chez la souris. Ce modèle est appliqué pour étudier le remodelage cardiaque et le développement de l’insuffisance cardiaque après un infarctus du myocarde. Dans la première partie de la vidéo, la procédure de ligature permanente sera démontrée, tandis que dans la deuxième partie, l’évaluation de la fonction cardiaque, à l’aide de mesures hémodynamiques invasives in vivo chez la souris, sera présentée.

Le modèle de ligature permanente de l’artère coronaire descendante antérieure gauche sera démontré par Marlin Locks, technicien animalier principal du centre de biologie vasculaire moléculaire. Eja, doctorant du micro groupe, présentera une technique de mesures hémodynamiques invasives chez la souris. Commencez par concentrer une lumière sur la région du cou d’une souris sous sédation.

Ensuite, soulevez la langue de l’animal à l’aide d’une épingle émoussée afin que l’entrée du larynx puisse être clairement visualisée. Passez une aiguille émoussée de calibre 20 préparée par vous-même à travers le larynx jusqu’à la trachée, puis connectez la souris au ventilateur pour évaluer que l’intubation a été placée correctement. Fixez la souris à un coussin chauffant pour éviter l’hypothermie.

Veiller à ce que le membre postérieur gauche croise le membre postérieur droit pour une meilleure vue du ventricule gauche lors de l’intervention. Faites ensuite une petite incision cutanée transversale jusqu’au sternum et séparez la peau et les muscles sous-jacents. Utilisez une suture en soie à cinq zéros pour écarter les muscles pectoraux, puis insérez un ensemble de broches émoussées pour faire une incision dans le troisième espace intercostal.

Déplacez la goupille placée sous les muscles intercostaux du côté latéral vers le côté médial jusqu’à ce que le sternum soit atteint. Ensuite, poussez la goupille de l’intérieur vers la peau pour percer la paroi thoracique. Enfin, coupez soigneusement le muscle intercostal juste au-dessus de la goupille pour compléter la thoracotomie.

En prenant soin d’éviter de perforer les poumons, placez une éponge imbibée de chlorure de sodium à 0,9 % dans la cavité pour protéger les poumons, puis introduisez un écarteur thoracique dans l’espace intercostal pour exposer l’oreillette gauche, le ventricule gauche et l’artère coronaire descendante antérieure gauche. Maintenant, ligaturez l’artère coronaire descendante antérieure gauche avec une seule ligature proline six zéros à environ un millimètre sous l’extrémité de l’oreillette gauche et distale à la première branche diagonale. Une ligature réussie induira une décoloration immédiate entraînant une apparence pâle du myocarde dans le territoire affecté.

Placez maintenant 3 6 0 sutures tron autour de l’espace intercostal et retirez l’éponge de la cavité thoracique. Dilatez à nouveau les poumons en bloquant l’écoulement du ventilateur, puis tirez sur les sutures et appuyez sur la poitrine pour répéter la réexpansion. Utilisez une petite quantité de solution saline pour confirmer l’absence de bulles d’air et la fermeture réussie du thorax.

Ensuite, regardez à travers le muscle intercostal pour confirmer l’expansion normale des poumons. Repositionnez les deux muscles pectoraux pour servir de barrière supplémentaire pour la prévention d’un pneumothorax et utilisez cinq sutures en soie zéro pour fermer la peau. Débranchez ensuite la souris du ventilateur, réchauffant l’animal sur le coussin chauffant jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli.

Avant de commencer les mesures hémodynamiques, immergez un cathéter de pression French Miller 1.0 dans de l’eau stérile à 37 degrés Celsius pour minimiser la dérive du signal. Après au moins 30 minutes, par voie électronique, étalonnez le capteur de pression à zéro et 100 millimètres de mercure et enregistrez les données de référence à 2000 hertz. Fixez ensuite la souris anesthésiée en position couchée sur un coussin chauffant, en surveillant la température de l’animal avec une sonde rectale. Rasez la région du cou, puis faites une incision médiane pour exposer la glande thyroïde.

Fixez ensuite le cou avec des aiguilles pliées et écartez la glande salivaire pour exposer l’artère carotide commune droite. Identifiez maintenant le nerf vague, qui ressemble à un fil blanc et se trouve le long de l’artère, et utilisez une pince incurvée pour séparer soigneusement l’artère du nerf. Passez la pince incurvée sous l’artère carotide commune droite pour la séparer des autres tissus, en retirant tout tissu conjonctif autour de l’artère.

Ensuite, passez 2 6 0 fils de soie sous l’artère carotide commune droite et faites un nœud serré sur le fil supérieur. Placez le fil vers la tête, fermez-le et fixez-le avec une ligature distale. Ensuite, passez deux fois le fil proximal de gauche à droite et fixez-le avec deux fils proximaux non occlusifs à ce moment également.

Gardez l’artère carotide humide en faisant couler du chlorure de sodium stérile à 0,9 % sur l’artère. Ensuite, à l’aide d’une aiguille de calibre 26, faites une incision dans l’artère carotide commune droite entre la ligature distale et le fil non occlusif proximal. Introduisez le capteur de pression dans l’artère.

Ensuite, poussez doucement le cathéter de pression vers l’avant et ajustez le fil non occlusif proximal de manière à ce que le cathéter puisse passer soigneusement à travers le fil, sous la clavicule, et que le vaisseau reste rempli de sang. Commencez maintenant à enregistrer le signal de pression. Chez une souris en bonne santé, le signal de pression artérielle fluctue entre une pression diastolique de 60 à 70 millimètres de mercure et une pression systolique de 100 à 120 millimètres de mercure.

Dirigez le cathéter via l’artère innominée et l’aorte dans le ventricule gauche. La pression ventriculaire fluctuera entre zéro et 100 à 120 millimètres de mercure. Enfin, après avoir laissé le cathéter se stabiliser à l’intérieur du ventricule gauche, enregistrez le signal pendant 30 à 60 minutes.

En fonction des exigences expérimentales, l’étendue de l’infarctus du myocarde peut être évaluée par la double coloration Bleu TTC d’Evan. Ici, des coupes représentatives du cœur 24 heures après la ligature de l’artère coronaire descendante antérieure gauche sont montrées. Les zones marquées en bleu indiquent les régions normales non ischémiques.

Les zones marquées d’un rouge profond indiquent les régions ischémiques mais viables. C’est-à-dire les zones non infarctus à risque. Alors que les zones rouge pâle, les taches négatives indiquent les régions infarctuses, qui représentent généralement entre 50 et 60 % de la surface totale de la paroi ventriculaire gauche.

L’expansion de l’infarctus peut être quantifiée en évaluant l’évolution temporelle de la longueur et de l’épaisseur de l’infarctus. Ici, une coupe transversale représentative et gravement colorée en rouge d’un cœur au jour 28 après une ligature permanente de l’artère coronaire descendante antérieure gauche est montrée dans cette coupe transversale. L’expansion de l’infarctus considérablement étiré correspond à une augmentation de la longueur absolue de l’infarctus et à une diminution de l’épaisseur de l’infarctus.

Dans ces graphiques, un registre représentatif de la pression artérielle et ventriculaire est présenté. La différence évidente entre les signaux artériels et les signaux ventriculaires est que le signal de l’échelle tombe à environ zéro millimètre de mercure pendant la diastole. À l’aide de ce modèle, il est important de noter que la fonction cardiaque dépendra non seulement de la perte de tissu myocardique, mais aussi du processus d’expansion de l’infarctus, de la cicatrisation des pets et de la formation de cicatrices, ainsi que du développement concomitant de la dilatation ventriculaire gauche, de l’hypertrophie cardiaque et du remodelage ventriculaire.