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DOI: 10.3791/52266-v
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This study investigates the stability of proteins in living zebrafish embryos using a photo convertible fluorescent protein. The decay of fluorescence intensity is monitored to determine the half-lives of the proteins in both intracellular and extracellular environments.
Les teneurs en protéines dans les cellules et les tissus sont souvent étroitement réglementées par l'équilibre de la production de protéines et de dégagement. En utilisant la fluorescence Decay Après Photoconversion (FDAP), la cinétique de dégagement de protéines peuvent être mesurées expérimentalement in vivo.
L’objectif général de l’expérience suivante est de mesurer la stabilité des protéines intracellulaires et extracellulaires dans des embryons de poissons-zèbres vivants. Ceci est réalisé en marquant une protéine d’intérêt avec une protéine fluorescente photoconvertible, et en injectant de l’ARNm, codant pour la fusion ainsi qu’un colorant fluorescent dans des embryons de poisson-zèbre. Ensuite, la protéine de fusion photoconvertible est photoconvertie, ce qui marque la protéine par impulsion.
Dans cet exemple, la protéine de fusion est sécrétée, puis la décroissance de l’intensité de fluorescence photoconvertie intra et extracellulaire est surveillée au fil du temps et équipée d’une fonction décroissante exponentielle afin de déterminer les demi-vies intracellulaires et extracellulaires de la protéine de fusion. Les résultats montrent la stabilité in vivo des protéines de fusion photoconvertibles basée sur la décroissance du signal fluorescent au fil du temps. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les domaines de la biologie cellulaire et du développement.
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