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DOI: 10.3791/4350-v
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Ici, nous présentons une méthode pour l’interrupteur photoactivé des protéines fluorescentes photoconvertibles (PCFP) dans l’embryon de poisson-zèbre vivant et un suivi ultérieur de la protéine photoconvertie à des moments spécifiques du développement. Cette méthodologie permet de surveiller les événements biologiques cellulaires sous-jacents à différents processus de développement chez un organisme vertébré vivant.
L’objectif global de cette procédure est de suivre les cellules photocommutées dans un embryon de poisson zèbre vivant. Ceci est accompli en intégrant d’abord un embryon, exprimant une photoprotéine fluorescente convertible spécifique au tissu dans des aros à basse température de fusion. Ensuite, la protéine dans la région d’intérêt est complètement photoconvertie.
Ensuite, l’embryon est soigneusement retiré de l’aros et maintenu dans de l’eau d’œuf à 28,5 degrés Celsius jusqu’aux stades ultérieurs. Enfin, l’embryon photoconverti est à nouveau encastré dans des aros à basse température de fusion. En fin de compte, on peut obtenir des résultats qui montrent que les cellules photoconverties peuvent être détectées avec précision à des stades ultérieurs en raison de la présence stable de la protéine photoconvertie par microscopie confocale.
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