Un protocole efficace pour évaluer la modulation de l’activité ERK dans des modèles précoces de poisson zèbre du syndrome de Noonan via la microscopie FRET en direct et l’immunofluorescence

Nous générons un modèle de poisson-zèbre pour des maladies complexes du développement, en reliant le séquençage des patients à la génomique fonctionnelle, afin de soutenir l’interprétation des variants ainsi que les tests précliniques de médicaments. Malgré l’amélioration des capteurs FRET, un test robuste in vivo détectant des changements pathogènes subtils de la signalisation Ras-MAPK avec une sensibilité spatiotemporale suffisante reste insuffisant. Pour commencer, placez la plaque d’injection personnalisée contenant du 2 % d’agarose moulé dans un milieu E3 sur une plateforme de travail.

Disposez et alignez les œufs fécondés des poissons-zèbres adolescents dans la plaque sur les voies appropriées afin de restreindre le mouvement des œufs lors de la microinjection. Rechargez l’aiguille avec deux microlitres de matériau injectable à l’aide d’une pipette micro-chargeuse. Ajustez les réglages de pression et de temps pour calibrer chaque injection en fonction de l’aiguille et de la qualité de l’embryon sur le dispositif de microinjection.