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DOI: 10.3791/52467-v
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Le but de ce document sur les méthodes est de décrire l'utilisation d'un système microfluidique pour le développement de biofilms multi-espèces qui contiennent généralement des espèces identifiées dans la plaque dentaire supra-gingival humain. Méthodes pour décrire l'architecture du biofilm, biofilm viabilité, et une approche de la récolte biofilm pour les analyses de culture-dépendante ou indépendante de la culture sont mis en évidence.
L’objectif général de cette procédure est de créer des biofilms de plaque dentaire multi-espèces représentatifs de la composition. Parallèlement à l’analyse, cela se fait en créant d’abord un média et un inoculum représentatifs. L’inoculum est ensuite introduit dans la puce microfluidique après une nuit d’incubation, un biofilm se forme à l’intérieur du micro-canal.
Enfin, le biofilm est lavé et coloré pour une microscopie à balayage laser confocale in situ ou une microscopie à fluorescence épi. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes comme les cellules à flux est qu’il s’agit d’un système à haut débit qui permet de réaliser plusieurs expériences en parallèle tout en utilisant moins de matériaux et en ne nécessitant pas de milieux de laboratoire artificiels. Pour commencer, prélevez des échantillons de salive d’une cohorte de cinq volontaires ou plus dans des tubes en plastique individuels de 50 millilitres.
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