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DOI: 10.3791/55148-v
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De nombreuses protéines remplissent leur fonction lorsqu’elles sont attachées à des surfaces membranaires. La liaison des protéines extrinsèques sur les membranes des nanodisques peut être imagée indirectement par microscopie électronique à transmission. Nous montrons que l’empilement caractéristique (rouleau) des nanodisques induit par la coloration négative phosphotungstate de sodium est empêché par la liaison de protéines extrinsèques.
L’objectif global de cette procédure est de visualiser la liaison d’une protéine membranaire extrinsèque à la surface d’une membrane de nanodisque par microscopie électronique à transmission de coloration négative comme première étape vers la détermination de la structure à haute résolution de la protéine. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans plusieurs domaines de recherche en ce qui concerne les activités protéiques qui se produisent dans et sur les membranes cellulaires. Le principal avantage de cette technique est l’empilement caractéristique des formes de nanodisques si la protéine ne peut pas se lier aux membranes.
Ces piles sont clairement visibles par microscopie électronique à transmission. L’implication de cette technique s’étend au développement de médicaments, car les composés peuvent être facilement criblés pour leur capacité à bloquer ou à permettre les interactions entre les protéines membranaires. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu des conditions optimales pour la liaison des protéines monotopiques à votre membrane, elle fournit également une structure à faible résolution du complexe de nanodisques de protéines.
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