Isolation des protéines de filament intermédiaires à partir de tissus de souris multiples pour étudier les modifications post-traductionnelles associées au vieillissement

L’objectif global de cette procédure biochimique est d’isoler des fractions enrichies en filaments intermédiaires de plusieurs tissus de souris afin d’étudier les modifications post-traductionnelles des différentes protéines de filaments intermédiaires spécifiques aux tissus. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des filaments intermédiaires, telles que la façon dont la fonction et la régulation de ces importantes protéines cytosquelettiques protectrices du stress sont affectées au cours du vieillissement des mammifères. Le principal avantage de cette technique est que l’intégration d’une étape automatisée de lyse tissulaire permet aux utilisateurs de traiter plusieurs échantillons de tissus de manière rapide et efficace.

Pour commencer, ajoutez un millilitre de tampon Triton X-100 glacé complété par des inhibiteurs de protéase dans un homogénéisateur en tube de verre et placez-le sur de la glace. Retirez un petit morceau de tissu du stockage d’azote liquide et placez-le directement dans l’homogénéisateur en verre. Ensuite, tout en gardant l’homogénéisateur et l’échantillon sur de la glace en tout temps, utilisez environ 50 coups d’une pastille de polytétrafluoroéthylène pour homogénéiser l’échantillon tout en minimisant la formation de bulles.