Name: Suivi en temps réel de la séparation des fragments dADN par téléphone intelligent (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: Découvrez l'électrophorèse SNAP pour la séparation d'ADN en temps réel par smartphone. Cette méthode réduit la consommation chimique et le temps d'expérience. Elle offre une visualisation claire des fragments d'ADN de 50 à 1000 paires de bases.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nous reconnaissons le soutien de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n ° 21205078) et du Fonds de recherche pour le programme de doctorat de l&#39;enseignement supérieur de la Chine (n ° 0031 3120110002). Ce travail a été partiellement soutenu par le Programme national de recherche et de développement clé de Chine (2016YFB1102303), le Programme national de recherche fondamentale de Chine (973Program, 2015CB352001) et la National Natural Science Foundation of China (61378060).

1. Conception de base de la puce SGE <ol><li> Utilisez n&#39;importe quel plastique transparent, tel que le polyméthylméthacrylate (PMMA) ou le polycarbonate. Remarque: La puce SGE est démontrée à la figure 1B . La puce SGE comprend des trous cylindriques pour le tampon TBE, des canaux pour la séparation de l&#39;ADN et deux voies intégrées le long des trous de l&#39;électrode. </li><li> Fabriquer des réseaux de chaînes SGE dans le bloc PMMA à l&#39;aide d&#39;une machine à gravure laser. Remarque: Les paramètres géométriques de la puce dépendent de la taille de l&#39;ADN à séparer. Par exemple, les paramètres de canal optimum pour la puce SGE sont de 2,5 mm x 4,0 mm x 90 mm (largeur x profondeur x longueur) si le fragment d&#39;ADN est inférieur à 1000 pb. </li><li> Basé sur la conception SGE, fabriquer des peignes pour créer les puits dans la puce pour charger l&#39;échantillon d&#39;ADN. </li></ol> 2. Préparation du gel d&#39;agarose <ol><li> Préparer 0,5 x TBE en mélangeant 10 × TBE (1 × TBE =89 mM de Tris, 89 mM d&#39;acide borique et 2 mM d&#39;EDTA; PH 8,4) et de l&#39;eau distillée dans un rapport 1:19. </li><li> Préparer 1,0% de gel d&#39;agarose pour la séparation des échelles d&#39;ADN de 100 pb. Note: La concentration d&#39;agarose dans un tampon TBE 0,5x dépend des tailles des fragments d&#39;ADN à séparer. </li><li> Placer 0,1 g d&#39;agarose dans un ballon et ajouter 10 ml de tampon TBE 0,5x. Note: Le volume de la solution préparée doit être inférieur à 1/3 de la capacité du flacon. </li><li> Sceller le flacon avec du film de conservation et ensuite chauffer le mélange d&#39;agarose / tampon dans un micro-ondes (moyen, 1,0 min). Avant de mettre le flacon dans le micro-ondes, faire quelques trous dans le film de conservation en cas d&#39;explosion. </li><li> Verser 2,7 ml d&#39;une solution d&#39;agarose fondue dans 4 canaux de la puce SGE. Placez le peigne dans la solution d&#39;agarose pour créer les puits. Note: La solution d&#39;agarose fondue refroidira à l&#39;état de gel à température ambiante 3 min plus tard. </li><li> Retirer le peigne du gEt ajouter 0,9 ml de tampon TBE 0,5x pour recouvrir le gel. </li></ol> 3. Exécution de l&#39;électrophorèse dans la puce SGE <ol><li> Allumez la source de lumière LED et placez un filtre passe-bande de 425 à 505 nm au-dessus de la source lumineuse. </li><li> Mélanger 14,4 μL d&#39;une échelle d&#39;ADN de 100 pb et 1,6 μL de SYBR Green en utilisant un vortex. </li><li> Chargez 4 μL de mélange dans chaque puits du gel d&#39;agarose dans la puce SGE ( Figure 2 ). </li><li> Mettez l&#39;électrode dans les deux voies de la puce SGE. </li><li> Placez un filtre passe bande 550 à 700 nm au-dessus de la puce SGE. </li><li> Allumez la source d&#39;alimentation. Réglez la tension électrique à 180 V (20 V / cm). Activez le smartphone pour enregistrer le processus de séparation des fragments d&#39;ADN ( Figure 3 ). </li><li> Lorsque l&#39;électrophorèse est terminée 10 minutes plus tard, éteignez la source d&#39;alimentation et la lumière LED. </li><li> Nettoyez la puce SGE. </li></ol>

<ol><li>Carle, G. F., Olson, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+chromosomal+DNA+molecules+from+yeast+by+orthogonal-field-alternation+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic.+Acids.+Res%22%5BJournal%5D)">Separation of chromosomal DNA molecules from yeast by orthogonal-field-alternation gel electrophoresis.</a> Nucleic. Acids. Res. 12 (14), 5647-5664 (1984).</li>
<li>McDonell, M. W., Simon, M. N., Studier, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+restriction+fragments+of+T7+DNA+and+determination+of+molecular+weights+by+electrophoresis+in+neutral+and+alkaline+gels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of restriction fragments of T7 DNA and determination of molecular weights by electrophoresis in neutral and alkaline gels.</a> J. Mol. Biol. 110 (1), 119-146 (1977).</li>
<li>Fangman, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+very+large+DNA+molecules+by+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic.+Acids.+Res%22%5BJournal%5D)">Separation of very large DNA molecules by gel electrophoresis.</a> Nucleic. Acids. Res. 5 (3), 653-665 (1978).</li>
<li>Blum, H., Beier, H., Gross, H. J. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/elps.1150080203/abstract">Improved silver staining of plant proteins, RNA and DNA in polyacrylamide gels.</a> Electrophoresis. 8 (2), 93-99 (1987).</li>
<li>Gödde, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoresis+of+DNA+in+human+genetic+diagnostics-state-of-the-art%2C+alternatives+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Electrophoresis of DNA in human genetic diagnostics-state-of-the-art, alternatives and future prospects.</a> Electrophoresis. 27 (5-6), 939-946 (2006).</li>
<li>Studier, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+bacteriophage+T7+early+RNAs+and+proteins+on+slab+gels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of bacteriophage T7 early RNAs and proteins on slab gels.</a> J. Mol. Biol. 79 (2), 237-248 (1973).</li>
<li>Sugden, B., De Troy, B., Roberts, R. J., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+slab-gel+electrophoresis+equipment%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Agarose slab-gel electrophoresis equipment.</a> Anal. Biochem. 68 (1), 36-46 (1975).</li>
<li>Rabilloud, T., Chevallet, M., Luche, S., Lelong, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+gel+electrophoresis+in+proteomics%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional gel electrophoresis in proteomics: Past, present and future.</a> J. Proteomics. 73 (11), 2064-2077 (2010).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> J. Vis. Exp. (62), e3923(2012).</li>
<li>Gasser, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-strand+conformation+polymorphism+%28SSCP%29+for+the+analysis+of+genetic+variation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Single-strand conformation polymorphism (SSCP) for the analysis of genetic variation.</a> Nat. Protoc. 1 (6), 3121-3128 (2006).</li>
<li>Matselyukh, B. P., Yarmoluk, S. M., Matselyukh, A. B., Kovalska, V. B., Kocheshev, I. O., Kryvorotenko, D. V., Lukashov, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+cyanine+dyes+with+nucleic+acids%3A+XXXI.+Using+of+polymethine+cyanine+dyes+for+the+visualization+of+DNA+in+agarose+gels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biochem.+Biophys.+Methods%22%5BJournal%5D)">Interaction of cyanine dyes with nucleic acids: XXXI. Using of polymethine cyanine dyes for the visualization of DNA in agarose gels.</a> J. Biochem. Biophys. Methods. 57 (1), 35-43 (2003).</li>
<li>Lunn, G., Sansone, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethidium+bromide%3A+destruction+and+decontamination+of+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Ethidium bromide: destruction and decontamination of solutions.</a> Anal. Biochem. 162 (2), 453-458 (1987).</li>
<li>Li, Z., Liu, C., Zhang, D., Luo, S., Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capillary+electrophoresis+of+RNA+in+hydroxyethylcellulose+polymer+with+various+molecular+weights%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chormatogr.+B%22%5BJournal%5D)">Capillary electrophoresis of RNA in hydroxyethylcellulose polymer with various molecular weights.</a> J. Chormatogr. B. 1011, 114-120 (2016).</li>
<li>Li, Z., Liu, C., Ma, S., Zhang, D., Yamaguchi, Y. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2016/AY/C5AY02705E#!divAbstract">Analysis of the inhibition of nucleic acid dyes on polymerase chain reaction by capillary electrophoresis.</a> Anal. Methods-UK. 8 (11), 2330-2334 (2016).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+fluorescence-coupled+capillary+electrophoresis+based+method+to+probe+interactions+between+QDs+and+colorectal+cancer+targeting+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Developing a fluorescence-coupled capillary electrophoresis based method to probe interactions between QDs and colorectal cancer targeting peptides.</a> Electrophoresis. 37 (15-16), 2170-2174 (2016).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+capillary+electrophoresis+method+to+explore+the+self-assembly+of+a+novel+polypeptide+ligand+with+quantum+dots%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">A capillary electrophoresis method to explore the self-assembly of a novel polypeptide ligand with quantum dots.</a> Electrophoresis. 37 (15-16), 2156-2162 (2016).</li>
<li>Miao, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0013468616300342">Nuclease assisted target recycling and spherical nucleic acids gold nanoparticles recruitment for ultrasensitive detection of microRNA.</a> Electrochim. Acta. 190, 396-401 (2016).</li>
<li>Heller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+DNA+separation+with+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Principles of DNA separation with capillary electrophoresis.</a> Electrophoresis. 22 (4), 629-643 (2001).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêts n&#39;est déclaré.

L&#39;électrophorèse sur gel d&#39;agarose est largement utilisée pour la séparation de l&#39;ADN, de l&#39;ARN et de la protéine. Ce travail propose une nouvelle méthode pour remplacer le protocole traditionnel d&#39;électrophorèse sur gel. Les résultats démontrent que des échelles d&#39;ADN de 50, 100 et 1000 pb peuvent être bien séparées dans un tel dispositif assemblé. Le grand avantage de cette méthode est que non seulement il peut séparer les acides nucléiques avec peu de consommation chimique, mais il peut égalem...

<html> L&#39;électrophorèse sur gel de dalle (SGE) est la méthode la plus efficace pour la séparation des fragments d&#39;ADN 1 , 2 , 3 , 4 , 5 et est donc considéré comme un outil polyvalent dans les analyses biochimiques et biologiques 6 , 7 , 8 . Cependant, de nombreuses expériences indiquent que SGE est restreinte par les quatre problèmes suivants: (1) les séparations prennent beaucoup d&#39;heures et même des jours; (2) la consommation chimique est très élevée; (3) il nécessite un appareil compliqué ( par exemple, cellule électrophorèse 2D, alimentation électrique et système d&#39;imagerie en gel); (4) le système d&#39;imagerie en gel ne peut observer que les fragments d&#39;ADN séparés lorsque l&#39;expérience est terminée. En outre, le bromure d&#39;éthidium (EtBr), qui est couramment utilisé dans le SGE 9 ,Ass = &quot;xref&quot;&gt; 10, est mutagène et cancérogène 11 , 12 . Ainsi, les gants doivent toujours être portés lors de la distribution de gels contenant EtBr. L&#39;électrophorèse capillaire (CE) présente de nombreux avantages 13 , 14 , 15 , 16 , 17 par rapport au SGE, comme le fonctionnement automatique, le temps de séparation court et la consommation réduite. Cependant, l&#39;instrument CE est assez coûteux. Par conséquent, pour surmonter ces limitations, un système a été développé ( Figure 1 ) pour la séparation de l&#39;ADN. Un tel système peut non seulement réduire considérablement la consommation de produits chimiques et économiser sur le temps de l&#39;expérience SGE (&lt;8 min), mais il peut également effectuer un suivi en temps réel du processus de séparation de l&#39;ADN dans le gel d&#39;agarose par un smartphone. En suivant les procédures décrites dans ce protocole, les étudiants shouLd pourrait concevoir et fabriquer la puce SGE, préparer le gel d&#39;agarose dans la puce, mettre en place un système SGE simple avec un smartphone et enregistrer le processus de migration de l&#39;ADN dans le gel d&#39;agarose.

<table><tbody><tr><td>10&fois ; TBE</td><td>Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.</td><td>T1051</td><td></td></tr><tr><td>Échelle d’ADN de 50 pb</td><td>Takara Bio Inc.</td><td>3421A</td><td></td></tr><tr><td>Échelle d’ADN de 100 pb</td><td>Takara Bio Inc.</td><td>3422A</td><td></td></tr><tr><td>Échelle d’ADN de 1 kbp</td><td>Takara Bio Inc.</td><td>3426A</td><td></td></tr><tr><td>SYBR GREEN</td><td>Takara Bio Inc.</td><td>5760A</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma-Aldrich V900510</td><td></td><td></td> corporatif</tr></tbody></table>

suivi en temps réel de la séparation des fragments d&#39;adn par téléphone intelligent

Real-time Tracking of DNA Fragment Separation by Smartphone

L&#39;électrophorèse sur gel de dalle (SGE) est la méthode la plus commune pour la séparation des fragments d&#39;ADN; Ainsi, il est largement appliqué au domaine de la biologie et d&#39;autres. Cependant, le protocole SGE traditionnel est assez fastidieux, et l&#39;expérience prend beaucoup de temps. De plus, la consommation chimique dans les expériences SGE est très élevée. Ce travail propose une méthode simple pour la séparation des fragments d&#39;ADN basée sur une puce SGE. La puce est fabriquée par une machine à gravure. Deux feuilles de plastique sont utilisées pour les longueurs d&#39;onde d&#39;excitation et d&#39;émission du signal optique. Le signal de fluorescence des bandes d&#39;ADN est collecté par un smartphone. Pour valider cette méthode, des échelles d&#39;ADN de 50, 100 et 1000 pb ont été séparées. Les résultats démontrent qu&#39;une échelle d&#39;ADN inférieure à 5 000 pb peut être résolue en 12 min et à haute résolution lors de l&#39;utilisation de cette méthode, ce qui indique qu&#39;il est un substitut idéal de la méthode SGE traditionnelle.

<html> La figure 4 , la figure 5 , et la figure 6 représentent un résultat typique après l&#39;électrophorèse sur gel d&#39;échelles d&#39;ADN de 50, 100 et 1000 pb. Après l&#39;expérience, les fragments d&#39;ADN étaient bien séparés. En outre, les mêmes échantillons ont été séparés dans les 4 canaux de la puce SGE, montrant que les fragments d&#39;ADN de même taille se déplacent à la même distance dans chaque expérience. <p cl...

Les expériences traditionnelles d&#39;électrophorèse sur gel en dentelle (SGE) nécessitent un appareil compliqué et une forte consommation chimique. Ce travail présente un protocole qui décrit une méthode peu coûteuse pour séparer les fragments d&#39;ADN dans un court laps de temps.

Suivi en temps réel de la séparation des fragments d&#39;ADN par téléphone intelligent

Slab gel electrophoresis (SGE) is the most common method for the separation of DNA fragments; thus, it is broadly applied to the field of biology and ...

Le passage présente un nouveau système d'électrophorèse sur gel SNAP. Ce système peut non seulement réduire considérablement le temps des expériences chimiques, mais aussi permettre un suivi en temps réel de la séparation dans un gel d'agarose à l'aide d'un smartphone. Ces trois images représentent un résultat typique après électrophorèse de fragments de 50, 100 et 1 000 paires de bases dans une échelle moléculaire.Chaque fragment d'ADN était bien séparé. L'électrophorèse sur gel SNAP est la méthode la plus inventive de séparation des fragments d'ADN et, par conséquent, elle est considérée comme un outil pédagogique essentiel en analyse biochimique et biologique. Cette fois, je vais vous présenter une nouvelle méthode concernant l'expérience d'électrophorèse sur gel SNAP.Commençons. Tout d'abord, nous pesons 0,1 gramme de gélose et l'introduisons dans un flacon, puis ajoutons un tampon TPE dans le flacon. Le volume de la solution préparée ne doit pas dépasser un tiers de la capacité du flacon.Sceller le flacon avec du film réfrigérant, puis chauffer le mélange de tampon d'agarose au micro-ondes. Avant de placer le flacon au micro-ondes, nous faisons quelques trous dans le film réfrigérant afin d'éviter toute explosion. Maintenir la solution d'agarose solidifiée dans les canaux du tube d'électrophorèse gel SNAP.Placer le peigne dans la solution. La solution montée refroidira et passera à l'état gel quelques minutes plus tard à température ambiante. Retirer le peigne pour créer des puits et ajouter du tampon TBE.Nous avons conçu un système simple de suivi en temps réel de la séparation des fragments d'ADN permettant d'observer l'état de mouvement des fragments d'ADN à l'aide d'un smartphone. Mélangez d'abord l'échelle d'ADN avec SYBR Green One à l'aide d'une centrifugation. Chargez le mélange dans le puits du gel d'agarose.Deuxièmement, allumez la source lumineuse à LED et placez un filtre passe-bande au-dessus de la LED, puis insérez l'électrode dans les deux voies de la puce. Ensuite, placez un autre filtre passe-bande au-dessus. Attendez sur la source d'alimentation.Régler la puissance électrique sur 180 watt. Allumer le smartphone pour enregistrer le processus de séparation des fragments d'ADN. Par exemple, nous utilisons un smartphone pour suivre la séparation d'un échelle d'ADN de 50 paires de bases.L'électrophorèse sur gel SNAP est la méthode la plus efficace pour la séparation des fragments d'ADN. Toutefois, des expériences abandonnées indiquent que l'électrophorèse sur gel SNAP était limitée par la longueur totale en raison de certains problèmes. Problème un : les séparations prennent plusieurs heures, voire des jours.Deux : la perception chimique est très élevée. Trois : elle nécessite beaucoup d'appareils. Quatre : le système d'imagerie des gels ne peut observer les fragments d'ADN séparés qu'une fois l'expérience terminée.En outre, l'iridium et le brome, couramment utilisés en électrophorèse sur gel SNAP, sont mutagènes et cancérigènes. Après l'expérience, chaque fragment d'ADN était bien séparé. De plus, nous avons séparé les mêmes échantillons dans les quatre canaux de la puce d'électrophorèse sur gel SNAP et constaté que les fragments d'ADN de même taille migraient sur la même distance lors de chaque expérience.D'après l'image, les fragments d'ADN ont été bien séparés, bien qu'il y ait eu des doutes quant à l'aspect blanc des fragments d'ADN sur la figure B. Cela peut être amélioré en optimisant les paramètres de la puce et la concentration du gel d'agarose. Après avoir visionné cette vidéo, vous devez consulter notre nouveau message concernant l'électrophorèse sur gel SNAP. De plus, les fragments d'ADN obtenus présentent un aspect blanc.Cela peut être amélioré en optimisant les paramètres de la puce de électrophorèse SNAP gel et la concentration du gel d'agarose. Ce qui est important, c'est que vous devez faire très attention lors des prélèvements, car cela nécessite une haute tension et peut devenir dangereux.

real-time-tracking-of-dna-fragment-separation-by-smartphone

Research

Recherche

JoVE Journal

Biochemistry

Biochimie

Dans cette vidéo, nous analysons la distribution granulométrique de fragments d’ADN acellulaire ou d’ADNcf à l’aide de l’électrophorèse capillaire automatisée. Cette technique permet de mieux comprendre le profil des fragments d’ADN libérés par les cellules cancéreuses lors de l’apoptose.

Analyse automatisée de la distribution de la taille des fragments d’ADN de cf basée sur l’électrophorèse capillaire : une méthode basée sur une micropuce d’ADN pour étudier la distribution de la taille de fragments d’ADN isolés à partir de biofluides

Cette vidéo décrit la technique d’électrophorèse capillaire microfluidique permettant de séparer les amplicons de PCR en fonction de leur taille. Cette technique permet de dimensionner les fragments à l’aide de colorants fluorescents et de marqueurs de taille moléculaire standard.

Électrophorèse capillaire microfluidique pour la taille des fragments de produits PCR : une technique de séparation électrophorétique basée sur une micropuce pour séparer les fragments d’ADN en fonction de leur taille

Nous décrivons ici une stratégie de retrait optimisée et efficace pour la collecte des bio-particules présentes dans «toucher ADN 'échantillons, avec un protocole d'amplification amélioré impliquant une seule étape 5 ul micro-volume de lyse / STR amplification, pour permettre la récupération de répétition courte en tandem (STR) des profils de donneur (s) bio-particules.

Analyse génétique accrue des simples bioparticules droits récupérés par micromanipulation simplifié du Forensic Evidence &#39;Touch ADN&#39;

Ce protocole montre un test de débit-stretching seule molécule simple, robuste et haut débit pour l’étude unidimensionnelle diffusion (1D) de molécules le long de l’ADN.

Une seule molécule Simple, robuste et haut débit débit étirement test mise en place pour étudier le Transport de molécules le long de l’ADN

Dans cet article, un protocole détaillé pour quantifier la longueur des télomères en utilisant une analyse de fragment de restriction terminale modifiée est discuté qui fournit une mesure directe rapide et efficace de la longueur des télomères. Cette technique peut être appliquée à une variété de sources cellulaires d'ADN pour quantifier la longueur des télomères.

Analyse modifiée des fragments de restriction des terminaux pour quantifier la longueur de télomère à l&#39;aide de l&#39;hybridation en gel

Nous décrivons une technique permettant de combiner la cytométrie en flux et le séquençage à haut débit pour identifier des régions fin de réplication du génome.

G2-seq : Une haut débit basée sur le séquençage Technique d’identification tard reproduisant des régions du génome

Fluorescence par résonance énergétique axée sur le transfert en temps réel observation systems de l’ADN brin réaction d’échange médiée par Rad51 ont été développés. En utilisant les protocoles présentés ici, nous sommes en mesure de détecter la formation des intermédiaires réactionnels et leur transformation en produits, tout en également analyser la cinétique enzymatique de la réaction.

Observation en temps réel de la réaction d’échange de brin ADN médiée par Rad51

Nous décrivons ici un protocole simple pour générer des profils d’empreintes génétiques en amplifiant le locus VNTR D1S80 à partir de l’ADN des cellules épithéliales.

Application de l’empreinte génétique à l’aide du locus D1S80 dans les classes de laboratoire

Cet article fournit un protocole pour la quantification des protéines à l’aide du test de Bradford et d’un smartphone comme dispositif d’analyse. Les niveaux de protéines dans les échantillons peuvent être quantifiés à l’aide de données de couleur extraites d’une photo d’une microplaque prise avec un smartphone.

RGBradford : Quantification des protéines avec l’appareil photo d’un smartphone

Ce protocole démontre la réalisation d’un test sur une seule molécule pour la visualisation en direct du déroulement de l’ADN par l’hélicase CMG. Il décrit (1) la préparation d’un substrat d’ADN, (2) la purification de l’hélicase CMG de Drosophila melanogaster marquée par fluorescence, (3) la préparation d’une cellule d’écoulement microfluidique pour la microscopie à fluorescence par réflexion interne totale (TIRF) et (4) le test de déroulement de l’ADN à molécule unique.

Visualisation en temps réel d’une molécule unique du déroulement de l’ADN par CMG Helicase

Des formes fiables et précises d’analyse ADN déployable sur le terrain sont cruciales pour de nombreux secteurs. Cet article propose deux méthodes d’analyse microbienne environnementale sur le terrain : 1) l’isolement de l’ADN microbien à partir d’échantillons environnementaux à l’aide d’un kit d’extraction biologique sur le terrain, et 2) l’analyse de l’ADN via l’unité qPCR de champ.

Analyse de l’ADN microbien sur le terrain à l’aide d’un kit d’extraction biologique et d’une unité qPCR de terrain

Découvrez l'électrophorèse SNAP pour la séparation d'ADN en temps réel par smartphone. Cette méthode réduit la consommation chimique et le temps d'expérience. Elle offre une visualisation claire des fragments d'ADN de 50 à 1000 paires de bases.

Suivi en temps réel de la séparation des fragments d'ADN par téléphone intelligent

Explorer plus de vidéos