La découpe et la méthode flottante pour tissus inclus en paraffine pour le sectionnement

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine morphologique, telles que la coupe en paraffine. Le principal avantage de cette technique est qu’elle culmine la procédure de coupe et de pliage et évite le processus de transfert requis par la méthode conventionnelle. Pour commencer, rassemblez toutes les pièces préfabriquées dans une hotte.

Utilisez du chloroforme pour combiner les sept panneaux acryliques, comme illustré ici. Le produit final sera un réservoir équipé d’un canal de section et d’un bain-marie. Installez l’élément chauffant électrique tubulaire à travers le trou du panneau acrylique numéro deux.

À l’aide d’une perceuse électrique, faites un petit trou dans le panneau acrylique numéro sept et installez un thermostat numérique sur le réservoir, en vous assurant qu’il se trouve au moins un centimètre en dessous du niveau de la surface d’eau prévue, qui est indiquée par le point noir sur le réservoir. Ajustez la tension de manière à ce qu’elle soit inférieure à 24 volts avant d’allumer l’équipement. Retirez le bac à déchets de section du microtome.

Ensuite, utilisez un mastic silicone neutre pour relier le canal des sections au porte-lame du microtome, en veillant à ne pas mettre de scellant au-dessus du haut de la lame. Laissez l’installation sécher pendant la nuit pour donner au chloroforme et au mastic silicone neutre le temps de se solidifier. Le lendemain, installez la lame dans le porte-lame.

Ajoutez de l’eau dans le bain-marie, en vous assurant que la surface de l’eau touche juste le haut de la lame. Après avoir effectué une section de paraffine conventionnelle, allumez l’équipement pour commencer une section de paraffine améliorée. Utilisez l’interrupteur de détection de température pour ouvrir le radiateur.

Réglez la température ciblée entre 38 degrés Celsius et 40 degrés Celsius pendant une heure pour réchauffer l’eau. À l’aide d’un couteau, modifier le bloc de paraffine obtenu par enrobage de paraffine. Ensuite, placez le bloc sur la pince à cassette du microtome et verrouillez-le.

Coupez les sections les plus épaisses pour vous approcher rapidement de l’échantillon. Ajustez à une épaisseur de section appropriée pour les échantillons. En tournant le volant, les sections seront automatiquement chargées en sections canal et bain.

Ensuite, sectionnez l’échantillon en un trait de coupe lent et uniforme. Guidez les sections dans la chambre de bain de manière à ce qu’elles flottent en ligne. Si la section de la tête adhère à la paroi de la chambre, utilisez un guide-brosse pour la maintenir flottante.

Une fois que les sections se sont complètement dépliées dans le bain-marie, utilisez une pince à épiler pour en séparer plusieurs, puis ramassez-les sur une lame de microscope. Transférez les lames dans un four réglé à 42 degrés Celsius pour qu’elles sèchent pendant la nuit. Les lames peuvent ensuite être stockées indéfiniment à température ambiante jusqu’à ce qu’elles soient prêtes à être analysées.

Lorsque vous êtes prêt à analyser, utilisez la coloration à l’hématoxyline-éosine pour évaluer les sections à l’aide de la méthode améliorée. Dans cette étude, une méthode améliorée est utilisée pour préparer des coupes de paraffine pour le tissu hippocampique de souris adulte, les reins de souris adultes, le cerveau embryonnaire de souris et les yeux de poisson-zèbre. Comme le montre ici, la nouvelle méthode évite la perte de sections et augmente la proportion de coupes intactes dans chaque type de tissu examiné.

Lors de la réalisation d’une section en série entière, cette méthode accélère la vitesse de sectionnement en paraffine dans tous les échantillons testés. En d’autres termes, cette méthode permet une section en paraffine de meilleure qualité en moins de temps que la méthode conventionnelle. Des coupes en série de la rétine optique du poisson-zèbre sont ensuite observées par coloration à l’hématoxyline-éosine.

Les sections récoltées à l’aide de la méthode améliorée sont considérées comme ayant une meilleure intégrité que celles récoltées à partir de la méthode conventionnelle de sectionnement à la paraffine. Bien qu’il n’y ait pas de différences significatives dans la qualité de la plupart des sections récoltées lorsque l’on compare ces deux méthodes, certaines sections récoltées à partir de la méthode conventionnelle sont considérées comme ayant une qualité relativement faible. N’oubliez pas que travailler avec du chloroforme peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que la hotte doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de se rappeler d’ajouter de l’eau avec précaution et d’éviter tout débordement.