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DOI: 10.3791/58644-v
Elijah N. McCool*1, Rachele Lubeckyj*1, Xiaojing Shen1, Qiang Kou2, Xiaowen Liu2,3, Liangliang Sun1
1Department of Chemistry,Michigan State University, 2Department of BioHealth Informatics,Indiana University-Purdue University Indianapolis, 3Center for Computational Biology and Bioinformatics,Indiana University School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Un protocole détaillé est décrit pour la séparation, l’identification et la caractérisation des proteoforms dans des échantillons de protéine à l’aide de la zone capillaire électrophorèse-electrospray ionisation-spectrométrie de masse (CZE-ESI-MS/MS). Le protocole peut être utilisé pour la caractérisation à haute résolution des proteoforms dans des échantillons de protéine simple et l’identification à grande échelle des proteoforms dans des échantillons de protéome complexe.
Cette méthode peut aider à améliorer la caractérisation à grande échelle et à haute résolution des isoformes protéiques et des modifications post-translationnelles des protéines dans les cellules. Le principal avantage de cette technique est que la spectrométrie de masse de la zone capillaire offre une séparation très efficace et une détection très sensible des protéines intactes. Pour pré-traiter le capillaire, séchez-le avec du gaz azoté à 10 psi pendant au moins 12 heures.
Ensuite, remplissez le capillaire d’un méthacrylate 3 propyle à 50 % volume par volume dans du méthanol à l’aide d’une pompe à seringues. Sceller les deux extrémités du capillaire avec du caoutchouc de silice. Après avoir couver à température ambiante pendant au moins 24 heures, continuer avec un revêtement linéaire en polyacrylamide sur la paroi intérieure du capillaire de séparation, tel que décrit dans le protocole de texte.
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