Imagerie confocale d’ARN bicaténaire et récepteurs de reconnaissance de modèle dans l’infection par le Virus ARN de polarité négative

ARN bicaténaire produite lors de la réplication des virus à ARN sont reconnaissables par les récepteurs de reconnaissance de modèle pour induire une réponse immunitaire innée. Pour les virus à ARN sens négatif, l’interaction entre l’Arndb à basse altitude et PRRs reste floue. Nous avons développé une méthode de microscopie confocale afin de visualiser les arénavirus dsRNA et PRR dans des cellules individuelles.

L’essai traditionnel de détection d’ARN à double brin n’est habituellement pas assez sensible pour détecter l’ARN à double brin formé dans l’infection négative-sens de virus d’ARN. Par conséquent, l’interaction entre l’ARN à double brin et les récepteurs de reconnaissance du modèle hôte est restée largement insaisissable pour ces virus. En utilisant ce protocole, nous sommes en mesure de visualiser et de caractériser l’interaction entre la protéine nucléaire virale, l’ARN à double brin et l’hôte d’un PRR à un niveau d’une seule cellule pour le virus de l’ARN à sens négatif. Il s’agit d’un test multiplexe qui permet la coloration simultanée de l’ARN double brin et deux cibles virales ou de protéines hôtes dans les cellules individuelles. Contrairement à l’analyse ARN-FISH, cette technique est indépendante de la séquence arn et généralement compatible avec la détection d’anticorps des cibles protéiques. Commencez 24 heures avant l’infection en ensemencement de 200 000 cellules A549 épithéliales pulmonaires humaines sur des couvercles en verre enduits de Poly-D-Lysine glissés dans des plaques de 12 puits et les cultivant à 37