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DOI: 10.3791/63177-v
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This study presents a novel CRISPR-Cas9 technique to identify maternal-effect phenotypes in early development. By utilizing multiplexing guide RNAs, researchers can rapidly uncover the roles of maternally-expressed genes in a single generation.
Le développement précoce dépend des produits hérités de la mère, et le rôle de bon nombre de ces produits est actuellement inconnu. Ici, nous avons décrit un protocole qui utilise CRISPR-Cas9 pour identifier les phénotypes d’effet maternel en une seule génération.
Le rôle de nombreux gènes exprimés par la mère au cours du développement précoce est actuellement inconnu. Cette technique CRISPR maternelle permet l’identification rapide des gènes d’effet maternel et de leur rôle dans le développement. Le multiplexage guide les ARN vers un seul gène permet aux chercheurs d’identifier de nouveaux phénotypes d’effets maternels en une seule génération.
Cette recherche est bénéfique pour comprendre la fonction des transcrits d’ARNm dans les gamètes, qui sont nécessaires à l’embryogenèse précoce. La clé de cette technique est de micro-injecter les embryons au début du stade d’une cellule, et de vérifier que la majorité des ARN guides peuvent faire des mutations somatiques dans les embryons injectés. Pour créer un modèle d’ARN guide pour chaque oligonucléotide spécifique au gène, analyte à l’oligonucléotide constant et remplir les surplombs avec de l’ADN polymérase T4.
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