Source et voie de contamination par les alcaloïdes pyrrolizidiniques dans les échantillons de thé

La mise au point d’une méthode de détection de 15 alcaloïdes pyrrolizidiniques dans les mauvaises herbes, le sol, les feuilles de thé fraîches et les échantillons de thé sec peut fournir un soutien technique pour explorer la source de contamination des alcaloïdes pyrrolizidiniques dans le thé. Par rapport à l’extraction en phase solide, la méthode adsorbante pour l’échantillon de sol permet de gagner du temps, de réduire les coûts et de meilleures récupérations pour l’analyse des alcaloïdes pyrrolizidiniques. Pour commencer l’extraction sur les produits de thé séché préchauffés, les feuilles de thé fraîches ou les mauvaises herbes, pesez un gramme d’échantillon dans un tube à centrifuger de 50 millilitres et ajoutez 10 millilitres de solution d’acide sulfurique de 0,1 millilitre par litre dans le tube.

Ensuite, vortex l’échantillon pendant deux minutes s’il doit être analysé par extraction en phase solide, et pendant une minute s’il doit être analysé à l’aide d’un nettoyage adsorbant. Soumettre ensuite l’échantillon à une extraction par ultrasons pendant 15 minutes, suivie d’une centrifugation à 9, 390 G pendant 10 minutes à température ambiante. Ensuite, à l’aide d’un compte-gouttes à embout en plastique, transférez la solution surnageante dans un tube centrifuge de 50 millilitres.

Après avoir effectué l’extraction deux fois, combinez les surnageants dans le tube. Pour commencer l’extraction sur le sol préparé, pesez un gramme d’échantillon dans un tube à centrifuger de 50 millilitres. Ajouter 0,1 millilitre de 0,1 moles par litre de solution de citrate trisodique pour ajuster le pH du sol à 6,0 et laisser reposer l’échantillon pendant deux minutes.

Ajoutez ensuite 10 millilitres de solution de méthanol d’acide sulfurique 0,1 mole par litre dans le tube et faites tourbillonner l’échantillon pendant deux minutes, puis agitez pendant 30 minutes. Ensuite, effectuez une extraction par ultrasons pendant 30 minutes comme démontré précédemment. Ensuite, centrifuger l’échantillon à 9, 390 G pendant 10 minutes.

Et à l’aide d’un compte-gouttes à embout en plastique, transférez le surnageant dans un tube centrifuge de 50 millilitres. Après avoir effectué l’extraction deux fois, combinez les surnageants. Activez la cartouche d’extraction en phase solide ou SPE avec cinq millilitres de méthanol suivis de cinq millilitres d’eau désionisée.

Après activation, ajoutez 10 millilitres du surnageant de l’extraction de l’échantillon à la cartouche préactivée. Une fois que le niveau de la solution échantillon atteint la couche supérieure des cartouches, éluer la matrice de l’échantillon avec cinq millilitres de solution d’acide formique à 1%, suivis de cinq millilitres de méthanol, et jeter les éluants. Ensuite, éluez les analytes avec cinq millilitres de méthanol contenant 0,5% d’eau ammoniacale.

Filtrer l’éluant à travers un filtre à membrane de 0,22 micron pour l’analyser par UPLC-MS/MS. Pour effectuer le nettoyage de l’échantillon à l’aide d’un adsorbant, préparez un tube centrifuge de 10 millilitres avec l’adsorbant compromettant GCB, PSA et C18 dans un rapport de 10 à 20 à 15 milligrammes. Ajoutez ensuite deux millilitres du surnageant obtenu après le traitement de l’échantillon.

Ensuite, vortex l’échantillon et le mélange adsorbant pendant une minute et centrifuger à 9, 390 G pendant huit minutes à température ambiante. Filtrer un millilitre du surnageant résultant à travers un filtre à membrane de 0,22 micron dans un flacon d’échantillon avant de l’analyser par UPLC-MS/MS. Dans l’étude, un pourcentage de récupération plus élevé de 15 alcaloïdes pyrrolizidiniques à partir de feuilles de thé fraîches, d’échantillons de thé séché et de mauvaises herbes a été obtenu en utilisant la technique de purification adsorbante par rapport à la méthode de cartouche SPE.

Les récupérations des alcaloïdes dans le sol par purification adsorbante étaient de 79 à 111 %Dans les feuilles de thé fraîches prélevées dans les cinq sites d’échantillonnage, une teneur plus élevée en N-oxyde intermédiaire a été détectée que celle en sénécionine. La sénécionine n’a pas été détectée dans les feuilles matures des sites d’échantillonnage un et deux. Parmi les 11 alcaloïdes pyrrolizidiniques, seul l’oxyde de N-oxyde intermédine a été détecté dans le sol, tandis que la sénécionine et l’oxyde de N intermédiaire ont été détectées dans différentes parties des théiers.

De plus, la teneur en N-oxyde intermédiaire dans un bourgeon à deux feuilles s’est avérée la plus élevée. En essayant d’abord cela, la chose la plus importante est d’ajouter 0,1 millilitre de 0,1 moles par litre de solution de citrate trisodique pour ajuster le pH de votre sol à 6,0. Cette méthode peut être appliquée à l’analyse des alcaloïdes dans d’autres plantes comestibles, et elle fournit également une technique naturelle pour explorer la source des alcaloïdes qu’elles contiennent.