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DOI: 10.3791/65220-v
Nicolas Huyghe1, Elena Benidovskaya1, Simon Beyaert1, Aurélie Daumerie4, Finoula Maestre Osorio1, Frank Aboubakar Nana2,3, Caroline Bouzin4, Marc Van den Eynde1,5
1Institut de Recherche Expérimentale et Clinique (IREC), Pôle MIRO,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 2Institut de Recherche Expérimentale et Clinique (IREC), Pôle de Pneumologie, ORL et Dermatologie (PNEU),Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 3Division of Pneumology, Cliniques Universitaires St-Luc,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 4IREC Imaging Platform,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 5Institut Roi Albert II, Department of Medical Oncology and Gastroenterology,Cliniques Universitaires St-Luc
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Dans cet article, un protocole d’immunofluorescence multiplex (mIF) manuelle d’amplification du signal tyramide (TSA) combiné à l’analyse d’images et à l’analyse spatiale est décrit. Ce protocole peut être utilisé avec des coupes de paraffine fixées au formol (FFPE) pour la coloration de deux à six antigènes par lame selon le scanner de lames disponible en laboratoire.
Dans notre laboratoire, nous étudions le cancer colorectal humain. Sa progression vers la maladie métastatique et sa réponse au traitement, y compris l’immunothérapie. Nous essayons de trouver de nouveaux biomarqueurs prédictifs et pronostiques en étudiant le microenvironnement immunitaire tumoral et le microbiome intratumoral dans les maladies primaires et métastatiques.
Dans notre projet, nous mettons actuellement en œuvre plusieurs technologies telles que le séquençage de l’ARN, le séquençage de l’exome entier, l’analyse de l’ADN acellulaire circulant par séquençage, l’immunofluorescence et l’hybridation de l’institut de fluorescence. À l’heure actuelle, notre défi majeur est de combiner la coloration par hybridation de l’institut de fluorescence avec l’immunofluorescence multiplex d’amplification du signal tyramide pour étudier l’interaction entre le microbiome et les cellules immunitaires. Notre méthode est robuste, reproductible, facile à utiliser et rentable.
Il peut être installé dans n’importe quel laboratoire possédant un scanner à lumière fluorescente et la méthode peut être utilisée avec n’importe quel anticorps IHC disponible dans le commerce par opposition aux kits disponibles dans le commerce qui sont généralement optimisés pour un panel restreint d’antigènes.
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