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Hémostase de la plaie perforante et préparation d’échantillons pour l’analyse par microscopie éle...
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JoVE Journal Medicine
Puncture Wound Hemostasis and Preparation of Samples for Montaged Wide-Area Electron Microscopy Analysis

Hémostase de la plaie perforante et préparation d’échantillons pour l’analyse par microscopie électronique à large rayon

Full Text
618 Views
05:41 min
May 24, 2024

DOI: 10.3791/66479-v

Kelly Ball1, Irina Pokrovskaya1, Brian Storrie1

1Department of Physiology and Cell Biology,University of Arkansas for Medical Sciences

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Une procédure de plaie perforante pour la formation de thrombus hémostatiques est présentée ici. Les thrombus formés sont grands et ont des centaines de microns de diamètre. Par conséquent, les approches d’imagerie volumique sont appropriées. Nous suggérons la microscopie électronique à transmission à large zone comme approche à haute résolution accessible au plus grand nombre et détaillons un protocole préparatif.

Nous sommes un laboratoire qui fait des EM de volume, des travaux structurels, pour dire comment les plaquettes s’activent, comment s’agrègent-elles ? Comment forment-ils un thrombus qui provoque l’arrêt du saignement et comment, en cas de stimulation excessive, ils provoquent une coagulation occlusive. Ce faisant, le principe est que si nous connaissons la structure, nous pouvons alors mieux cibler les médicaments et obtenir de meilleurs résultats.

Nous utilisons des modèles murins dans nos recherches, comme le font de nombreux chercheurs, et nous avons tous le défi d’établir comment nos découvertes chez la souris et, dans notre cas, dans les artères et les veines de la souris, se répercutent sur les mécanismes des artères et des veines beaucoup plus grandes chez l’homme. Nous espérons tous que les principes sont les mêmes chez les souris et les humains. Si vous prenez notre travail et que vous utilisez des approches EM en volume, les grandes choses auxquelles nous avons contribué sont un, à savoir que les plaquettes ne sont pas seulement des kamikazes.

Ils retiennent les granulés. Ils font des choses en réponse à un signal. Ils ont des états stables, et ces états stables font partie d’un thrombus normal et ils font également partie d’un caillot inclusif.

Deuxièmement, nous avons apporté le sentiment qu’il y a vraiment une structure dans le thrombus qui se forme, ce n’est pas simplement un tas de briques, mais plutôt c’est une structure ordonnée dans laquelle les plaquettes sont ordonnées en fonction de leur activation, et cetera. Et troisièmement, nous avons apporté le sentiment qu’il devrait être possible d’appliquer et de comprendre à partir de la structure ce qui doit être soit stimulé pour obtenir un bon résultat, soit ce qui doit être supprimé pour donner un résultat qui protégera les gens contre les mauvais résultats. Nous collectons des images séquentielles à l’échelle nanométrique de distances millimétriques.

Nous les assemblons dans une seule image montée. Par conséquent, nous pouvons observer n’importe quel point donné de l’image à une échelle de près du nanomètre au millimètre, ce qui est suffisant pour placer des caractéristiques individuelles à l’intérieur de l’ensemble du thrombus. Les chercheurs disposent maintenant d’un outil puissant, et ils peuvent poser la nouvelle question suivante : comment les cascades de coagulation et les signaux cellulaires ou les médicaments agissent-ils spatialement aux niveaux local et global dans les thrombus ?

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Mots-clés : plaie perforante hémostase thrombus agrégation plaquettaire microscopie électronique préparation d’échantillons imagerie à large zone thrombose lésions vasculaires fixation enrobage coloration

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