Name: Modélisation de microenvironnements vaginaux sains et dysbiotiques dans un vagin humain sur puce (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Découvrez la modélisation de microenvironnements vaginaux sains et dysbiotiques dans un vagin humain sur puce. Cette méthode microfluidique permet d'étudier les interactions avec le microbiome vaginal vivant et de développer des thérapeutiques ciblées.

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Cette recherche a été financée par la Fondation Bill et Melinda Gates (INV-035977) et le Wyss Institute for Biologically Inspired Engineering de l’Université Harvard. Nous remercions également Gwenn E. Merry, de l’Institut Wyss, pour l’édition de ce manuscrit. Le diagramme de la figure 1 a été créé avec BioRender.

Puce microfluidique du vagin pour l’étude du microbiome vaginal

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Donald Ingber est fondateur, membre du conseil d’administration, président du conseil consultatif scientifique et actionnaire d’Emulate. Les autres auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts concurrents.

Les modèles in vitro antérieurs du vagin humain ne reproduisent pas fidèlement les structures des tissus vaginaux, le flux de fluides et les interactions hôte-pathogène19,22. Les modèles animaux sont également limités par les variations inter-espèces du microbiome et les différences dans le cycle œstral ou menstruel19,22. Ce manuscrit décrit un protocole permettant de créer un modèle de puce d’organe du vagin humain capable d’imiter efficacement les réponses humaines aux communautés microbiennes saines et dysbiotiques.
Ce protocole consiste à ensemencer des cellules épithéliales vaginales et des fibroblastes sur les côtés opposés d’une membrane poreuse partagée qui sépare les microcanaux parallèles dans un dispositif de puce d’organe à deux canaux disponible dans le commerce (voir le tableau des matériaux). La membrane poreuse permet la migration des facteurs de croissance et d’autres formes de communication intercellulaire. Cependant, le revêtement de collagène et la présence de monocouches cellulaires empêchent le mélange des médias entre les canaux. Lors de la formation d’une monocouche de cellules épithéliales vaginales dans le canal apical, des facteurs de différenciation sont introduits dans le milieu circulant dans le canal basal, qui traverse l’espace interstitiel et favorise ainsi la différenciation des cellules épithéliales vaginales pour former un épithélium stratifié. La densité des cellules épithéliales vaginales au moment de l’ensemencement est un déterminant crucial de la santé de la puce vaginale à la fin de la phase de différenciation. Ainsi, la densité des cellules épithéliales vaginales doit être évaluée avant d’initier la différenciation, qui ne doit pas être initiée tant qu’une monocouche n’est pas établie. L’exposition aux facteurs de différenciation peut être poursuivie jusqu’à ce que la densité souhaitée des cellules épithéliales vaginales soit obtenue et avant l’inoculation bactérienne. De plus, il convient de noter que le taux de croissance peut varier pour les cellules épithéliales vaginales primaires provenant de différents donneurs (ou sources commerciales), ce qui pourrait affecter la qualité de la puce vaginale générée. Dans toutes les études microfluidiques sur les puces d’organes, il est de la plus haute importance d’éliminer toutes les bulles qui pourraient se former dans les canaux de la culture de puces, car elles interfèrent avec l’écoulement du milieu et finiront par entraîner une réduction de la disponibilité des nutriments et une perte de viabilité cellulaire. 
Ce protocole décrit également comment utiliser la puce vaginale pour établir des communautés bactériennes sur puce qui imitent soit l’état vaginal sain, soit la vaginose bactérienne. La puce vaginale peut également être utilisée pour étudier d’autres maladies ou troubles vaginaux ; Cependant, il faut prendre soin de comprendre les caractéristiques de chaque maladie et les meilleurs moyens de corréler les résultats avec les signes cliniques lors de la réalisation de ces études. En résumé, la puce vaginale humaine ouvre de nouvelles voies pour étudier une pléthore de maladies et d’affections liées à la TRF, et elle peut être un outil précieux pour étudier des thérapies potentielles.

Un microbiome vaginal dominé par Lactobacillus spp. qui aide à maintenir un microenvironnement acide joue un rôle important dans le maintien de la santé reproductive féminine1. Cependant, il peut parfois y avoir un changement dans la composition des communautés microbiennes qui composent le microbiome, ce qui entraîne une augmentation de la diversité des bactéries vaginales. Ces changements dysbiotiques, qui entraînent souvent le passage d’un état dominé par les Lactobacillus à un état dominé par des espèces bactériennes anaérobies plus diversifiées (par exemple, Gardnerella vaginalis), sont associés à diverses maladies du système reproducteur, telles que la vaginose bactérienne, la vaginite atrophique, l’infection des voies urinaires, la candidose vulvovaginale, l’urétrite et la chorioamnionite 2,3,4,5 . Ces maladies, à leur tour, augmentent les chances d’une femme de contracter des maladies sexuellement transmissibles et des maladies inflammatoires pelviennes 6,7,8,9. Ils présentent également un risque plus élevé d’accouchement prématuré et de fausses couches chez les femmes enceintes 10,11,12 et ont également été impliqués dans l’infertilité 13,14,15,16.
Bien que des efforts aient été faits pour modéliser la dysbiose vaginale à l’aide de cellules épithéliales vaginales cultivées dans des systèmes de culture statiques et bidimensionnels (2D)17,18, elles n’imitent pas efficacement la physiologie et la complexité du microenvironnement vaginal19. Des modèles animaux ont également été utilisés pour étudier la dysbiose vaginale ; Cependant, leurs phases menstruelles et leurs interactions hôte-microbiome diffèrent considérablement de celles chez l’homme, et par conséquent, la pertinence physiologique des résultats de ces études reste incertaine 19,20,21. Pour contrer ces problèmes, des modèles d’organoïdes et d’inserts Transwell de tissu vaginal humain ont également été utilisés pour étudier les interactions hôte-pathogène dans le FRT 19,22,23,24. Mais parce qu’il s’agit de cultures statiques, elles ne peuvent soutenir la co-culture de cellules humaines avec des microbes vivants que pendant une courte période de temps (<16-24 h), et elles manquent de nombreuses autres caractéristiques physiques potentiellement importantes du microenvironnement vaginal humain, telles que la production de mucus et l’écoulement des fluides22.
Les puces d’organe sont des systèmes de culture microfluidique tridimensionnels (3D) qui contiennent un ou plusieurs microcanaux creux parallèles tapissés de cellules vivantes cultivées sous un écoulement de fluide dynamique. Les puces à deux canaux permettent de recréer des interfaces tissu-tissu au niveau des organes en cultivant différents types de cellules (par exemple, l’épithélium et les fibroblastes stromaux ou l’épithélium et l’endothélium vasculaire) sur les côtés opposés d’une membrane poreuse qui sépare les deux canaux parallèles (Figure 1). Les deux tissus peuvent être exposés indépendamment à l’écoulement des fluides, et ils peuvent également connaître des conditions microaérobies pour permettre la co-culture avec un microbiome complexe 25,26,27,28. Cette approche a récemment été mise à profit pour développer une puce vaginale humaine tapissée d’un épithélium vaginal primaire sensible aux hormones, interfacé avec des fibroblastes stromaux sous-jacents, qui maintient une faible concentration physiologique d’oxygène dans la lumière épithéliale et permet la co-culture avec des microbiomes sains et dysbiotiques pendant au moins 3 jours in vitro29. Il a été démontré que la puce vaginale pouvait être utilisée pour étudier la colonisation par des consortiums optimaux (sains) de L. crispatus et détecter l’inflammation et les lésions causées par des consortiums non optimaux (non sains) contenant G. vaginalis. Ici, nous décrivons en détail les méthodes utilisées pour créer la puce vaginale humaine ainsi que pour établir des communautés bactériennes saines et dysbiotiques sur la puce.

<table><tbody><tr><td>0,22 & micro ; m Steriflip</td><td>Millipore&nbsp ;</td><td>SCGP00525</td><td>Pour dégazer les milieux</td></tr><tr><td>Puce 2 canaux</td><td>Émuler</td><td>BRK-S1-WER-24</td><td>Partie du kit à puces à deux canaux</td></tr><tr><td>200 & mu ; Embouts barrières en L (ou embouts filtrants)</td><td>Thomas Scientific, SHARP</td><td>1159M40</td><td>Embouts utilisés pour l’ensemencement des copeaux</td></tr><tr><td>Réactif d’activation 1 (ou poudre ER-1) & nbsp ;</td><td>Émuler</td><td>Kit de recherche fondamentale Chip S1-24PK</td><td>Faisant partie du kit Chip à deux canaux ; Température de stockage -20 & degrés C&nbsp ; &nbsp ;</td></tr><tr><td>Activation Reagent 2 (ou solution ER-2) & nbsp ;</td><td>Émuler</td><td>Kit de recherche fondamentale Chip S1-24PK</td><td>Faisant partie du kit Chip à deux canaux ; Température de stockage 4 °C ; C</td></tr><tr><td>Adénine</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>A2786</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Plaques d’agar de sang de Brucella</td><td>VWR International Inc.&nbsp ;</td><td>89405-032</td><td>avec hémines et vitamine K ; Pour l’énumération de Gardnerella vaginalis</td></tr><tr><td>DPBS libres Ca2+ et Mg2+ (DPBS (-/-)</td><td>ScienCell</td><td>303</td><td>Pour laver les cellules</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>C5670</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium (anhyde)&nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>499609</td><td>Composante de HBSS (LB/+G)</td></tr><tr><td>Collagène I&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>354236</td><td>Pour la solution de revêtement pour le CVC</td></tr><tr><td>Collagène IV & nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>C7521</td><td>Pour la solution de revêtement pour le CVC</td></tr><tr><td>Colagnase IV</td><td>Gibco</td><td>17104019</td><td>Pour la dissociation des cellules des Vagina Chips</td></tr><tr><td>Médium complet des fibroblastes &nbsp ;</td><td>ScienCell</td><td>2301</td><td>Médias pour la culture de la HUF</td></tr><tr><td>Milieu épithélial vaginal complet</td><td>Ligne de vie</td><td>LL-0068</td><td>Médias pour la culture du CVC</td></tr><tr><td>D-glucose (dextrose) & nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>158968</td><td>Composante de HBSS (LB/+G)</td></tr><tr><td>DMEM (basse glycémie) & nbsp ;</td><td>Thermofisher</td><td>12320-032</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Module d’écoulement dynamique (ou Zo&euml ;)</td><td>Émuler</td><td>Zo&euml ;-CM1</td><td>Régule le débit des copeaux</td></tr><tr><td>F12 de Ham</td><td>Thermofisher</td><td>11765-054</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>FBS inactivé par la chaleur & nbsp ;</td><td>Thermofisher & nbsp ;</td><td>10438018</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Fibroblastes utérins humains</td><td>ScienCell</td><td>7040</td><td>HUF</td></tr><tr><td>Cellules épithéliales vaginales humaines</td><td>Ligne de vie</td><td>FC-0083</td><td>HVEC</td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>H0396</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>ITES</td><td>Lonza</td><td>17-839Z</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Thermofisher</td><td>25030081</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium hexahydraté</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>M2393</td><td>Composante de HBSS (LB/+G)</td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium heptahydré</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>M1880</td><td>Composante de HBSS (LB/+G)</td></tr><tr><td>Plaques agar MRS</td><td>VWR International Inc.&nbsp ;</td><td>89407-214</td><td>Pour l’énumération de Lactobacillus</td></tr><tr><td>O-phosphoryléthanolamine</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>P0503</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Pénétrographe/Streptocoque</td><td>Thermofisher & nbsp ;</td><td>15070063</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Bandes de pH</td><td>Fischer-Scientific</td><td>13-640-520</td><td>Pour la mesure du pH&nbsp ;</td></tr><tr><td>Pods (1/puce) & nbsp ;</td><td>Émuler</td><td>BRK-S1-WER-24</td><td>Partie du kit à puces à deux canaux</td></tr><tr><td>Poly-L-lysine</td><td>ScienCell</td><td>403</td><td>Pour la solution de revêtement pour les HUF</td></tr><tr><td>Chlorure de potassium &nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>P3911</td><td>Composante de HBSS (LB/+G)</td></tr><tr><td>Monobase phosphate de potassium</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>P0662</td><td>Composante de HBSS (LB/+G)</td></tr><tr><td>Stérile 80 % glycérol & nbsp ;</td><td>MP Biomédicals & nbsp ;</td><td>113055034</td><td>Pour congeler des échantillons bactériens</td></tr><tr><td>Triiodothyronine</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>&nbsp ; T6397</td><td>Composante du média de différenciation</td></tr><tr><td>Solution Trypan Blue (0,4 %) & nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>T8154</td><td>Pour compter les cellules vivantes/mortes</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Thermofisher & nbsp ;</td><td>12605010</td><td>Pour la dissociation des cellules des Vagina Chips</td></tr><tr><td>Solution neutralisante à la trypsine (TNS) & nbsp ;</td><td>ScienCell</td><td>113</td><td>Pour la neutralisation de la trypsine</td></tr><tr><td>Solutiom de trypsine/EDTA (0,25 %)</td><td>ScienCell</td><td>103</td><td>Pour la dissociation cellulaire & nbsp ;</td></tr><tr><td>&bêta ;-estradiol&nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich & nbsp ;</td><td>E2257</td><td>Hormone pour les milieux de différenciation</td></tr></tbody></table>

modélisation de microenvironnements vaginaux sains et dysbiotiques dans un vagin humain sur puce

Modeling Healthy and Dysbiotic Vaginal Microenvironments in a Human Vagina-on-a-Chip

La santé des femmes, et en particulier les maladies de l’appareil reproducteur féminin, n’a pas reçu l’attention qu’elle mérite, même si un système reproducteur malsain peut entraîner des maladies potentiellement mortelles, l’infertilité ou des résultats défavorables pendant la grossesse. L’un des obstacles dans le domaine est qu’il y a eu une pénurie de modèles précliniques et expérimentaux qui imitent fidèlement la physiologie et la physiopathologie de la TRF. Les modèles in vitro et animaux actuels ne récapitulent pas entièrement les changements hormonaux, les conditions microaérobies et les interactions avec le microbiome vaginal. L’avènement de la technologie de culture microfluidique Organ-on-a-Chip (Organ Chip) qui peut imiter les interfaces tissu-tissu, la perfusion vasculaire, les flux de liquide interstitiel et le microenvironnement physique d’une sous-unité majeure d’organes humains peut potentiellement servir de solution à ce problème. Récemment, une puce vaginale humaine qui soutient la co-culture de consortiums microbiens vaginaux humains avec un épithélium vaginal humain primaire qui est également interfacé avec le stroma vaginal et connaît un flux de fluide dynamique a été développée. Cette puce reproduit les réponses physiologiques du vagin humain aux microbiomes sains et dysbiotiques. Un protocole détaillé pour la création de puces vaginales humaines a été décrit dans cet article.

Le vagin humain est tapissé d’un épithélium stratifié qui recouvre un stroma collagène riche en fibroblastes. Pour modéliser cela, une interface tissulaire a été créée en cultivant de l’épithélium vaginal humain primaire et des fibroblastes sur les côtés opposés d’une membrane poreuse commune au sein d’un dispositif de puce d’organe microfluidique à deux canaux. La formation de l’épithélium vaginal est surveillée à l’aide d’une imagerie microscopique à champ clair, qui révèle la formation d’une feuille continue de cellules qui forme progressivement plusieurs couches cellulaires (Figure 2A). Des rapports antérieurs ont confirmé que cette morphologie est en corrélation avec le développement d’un épithélium entièrement stratifié lorsqu’on l’observe en coupe transversale29. Cependant, si la couche épithéliale semble inégale et discontinue (figure 2B), la puce vaginale peut ne pas être adaptée à une utilisation dans des expériences.
La figure 3 montre une représentation schématique de la génération de la puce vaginale. Pour valider la fonctionnalité de la puce vaginale, les puces ont été inoculées avec L. crispatus et G. vaginalis pour modéliser des environnements vaginaux sains et dysbiotiques, respectivement. G. vaginalis est la bactérie principalement impliquée dans la vaginose bactérienne. Pour vérifier si des bactéries saines et dysbiotiques se greffent sur les puces vaginales, la charge bactérienne a été quantifiée dans les puces vaginales inoculées avec les différentes populations bactériennes par des effluents de canaux de placage et des couches cellulaires digérées sur des milieux de croissance bactérienne sélectifs (gélose De Man-Rogosa-Sharpe (MRS) pour L. crispatus et gélose au sang Brucella (BBA) pour G. vaginalis) (voir la table des matériaux) et en les comparant à des cultures similaires en utilisant l’inoculum d’origine. Des colonies de L. crispatus et de G. vaginalis ont été détectées dans les 48 h suivant la mise en plaques (figure 2C), confirmant que des bactéries saines et dysbiotiques étaient greffées dans les puces vaginales. Cependant, si des colonies bactériennes sont observées sur les plaques contenant les inoculums, mais pas sur les plaques contenant l’effluent ou la digestion après l’incubation requise, on peut conclure que les bactéries ne se sont pas greffées.
Un environnement vaginal sain est acide et la dysbiose entraîne une augmentation du pH vaginalde 31. Par conséquent, le pH de l’effluent du canal épithélial apical de la puce vaginale a également été analysé. Le pH des puces vaginales inoculées avec L. crispatus était semblable à celui des puces témoins non inoculées, et lorsqu’elles ont été cultivées conjointement avec G. vaginalis , elles ont présenté une augmentation significative du pH (figure 2D). Si le pH d’une puce vaginale non infectée est élevé, cela indique qu’il y a un problème et que ces puces ne doivent pas être utilisées pour des expériences.
L’état inflammatoire du tissu vaginal est également sensible à la composition du microbiome vaginal, avec un microbiome dysbiotique stimulant l’inflammation. Lors de l’analyse des cytokines pro-inflammatoires dans le canal apical de la puce vaginale 3 jours après l’inoculation avec L. crispatus ou G. vaginalis, la réponse pro-inflammatoire s’est également avérée plus élevée avec G. vaginalis par rapport aux puces non infectées et aux puces inoculées avec L. crispatus (Figure 2E). Pris ensemble, ces résultats montrent que la puce vaginale imite étroitement le microenvironnement vaginal humain dans les états sains et dysbiotiques.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66486/66486fig01.jpg"> Figure 1 : Puce à deux canaux et son pod. (A) Image d’une puce PDMS à deux canaux illustrant ses canaux et ses ports. (B) Image d’un groupe illustrant les réservoirs et les orifices des canaux apical et basal. (C) Schéma montrant la vue en coupe transversale d’une puce vaginale infectée par des microbes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66486/66486fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66486/66486fig02.jpg"> Figure 2 : La puce vaginale imite les microenvironnements vaginaux humains sains et dysbiotiques. (A) Cellules épithéliales vaginales dans le canal apical d’une puce vaginale robuste. La barre d’échelle représente 1 mm de la puce dans l’image du haut et 500 μm dans l’image du bas. (B) Cellules épithéliales vaginales dans le canal apical d’une puce vaginale inadéquate. La barre d’échelle représente 1 mm de la puce dans l’image du haut et 500 μm dans l’image du bas. (c) Greffe de L. crispatus (LC) et de G. vaginalis (GV) dans la puce vaginale. (D) pH des puces vaginales après 72 h d’incubation avec L. crispatus (LC) et G. vaginalis (GV) par rapport aux puces vaginales non infectées (témoins). (E) Réponse pro-inflammatoire des puces vaginales à L. crispatus (LC) et G. vaginalis (GV) après 72 h d’incubation, par rapport aux puces vaginales non infectées (témoins). (C-E) Les graphiques illustrent la moyenne ± SD pour 4 à 6 puces ; *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001 par rapport aux puces vaginales de contrôle ; Chaque (●) représente les données d'1 puce. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66486/66486fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66486/66486fig03.jpg"> Figure 3 : Représentation schématique du protocole de génération de la puce vaginale. Représentation schématique des étapes impliquées dans l’ensemencement des cellules et la génération de la puce vaginale. HVEC - Cellules épithéliales vaginales humaines ; HUFs - Fibroblastes utérins humains ; VEM - Milieu épithélial vaginal ; FM - Média fibroblastique ; DM - Milieu de différenciation ; PS - Pénicilline Streptomycine. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66486/66486fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Cet article décrit un protocole de création d’un dispositif de culture microfluidique de vagin sur puce (Vagina Chip) qui permet d’étudier les interactions de l’hôte humain avec un microbiome vaginal vivant dans des conditions microaérophiles. Cette puce peut être utilisée comme outil pour étudier les maladies vaginales ainsi que pour développer et tester des contre-mesures thérapeutiques potentielles.

Modélisation de microenvironnements vaginaux sains et dysbiotiques dans un vagin humain sur puce

Women's health, and particularly diseases of the female reproductive tract (FRT), have not received the attention they deserve, even though an unhealthy ...

Nous avons réussi à développer une puce vaginale humaine qui favorise la différenciation spontanée de l’épithélium vaginal stratifié squameux, forme une barrière solide, répond aux hormones et génère un microbiome soutenant les gradients d’oxygène. Les cultures 2D et organoïdes sont actuellement utilisées pour étudier la dysbiose vaginale, mais elles ne sont pas en mesure d’imiter les complexités physiologiques du microenvironnement vaginal en raison de leur nature statique. Les modèles animaux ne peuvent pas non plus modéliser les mêmes changements hormonaux présents dans le cycle menstruel humain, et le microbiome vaginal diffère entre les espèces animales et les humains.Nous avons entrepris d’explorer si la technologie des puces d’organes peut être utilisée pour développer un modèle préclinique des interactions entre le microbiome du vagin humain et qui pourrait être utilisé pour la découverte et l’évaluation de thérapies potentielles basées sur le microbiome. La puce vaginale permet un flux de fluide dynamique à travers l’épithélium vaginal et le stroma, ce qui prolonge sa co-culture avec les consortiums microbiens vaginaux et maintient un microenvironnement physiologiquement pertinent. Le vagin humain sur puce est un outil passionnant qui peut être utilisé pour étudier diverses maladies de l’appareil reproducteur féminin et valider de nouvelles biothérapies.

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neuroHuMiX est un modèle avancé d’intestin sur puce permettant d’étudier les interactions des cellules bactériennes, épithéliales et neuronales dans des conditions de co-culture proximales et représentatives. Ce modèle permet de démêler les mécanismes moléculaires sous-jacents à la communication entre le microbiome intestinal et le système nerveux.

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Ce protocole décrit un modèle in vitro d’entérocolite nécrosante (NEC), qui peut être utilisé pour des études mécanistiques de la pathogenèse de la maladie. Il est doté d’une puce microfluidique ensemencée d’entéroïdes intestinaux dérivés de l’intestin néonatal humain, de cellules endothéliales et du microbiome intestinal d’un nouveau-né atteint d’une NEC sévère.

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L’intégration d’organoïdes intestinaux canins et d’un système microfluidique Gut-on-a-Chip offre des modèles translationnels pertinents pour les maladies intestinales humaines. Les protocoles présentés permettent la morphogenèse 3D et la modélisation dynamique in vitro de l’intestin, ce qui contribue au développement de traitements efficaces pour les maladies intestinales chez les chiens et les humains avec One Health.

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Notre protocole détaillé décrit la création et l’utilisation du modèle avancé d’intestin sur puce, qui simule la muqueuse intestinale humaine avec des structures 3D et divers types de cellules, permettant une analyse approfondie des réponses immunitaires et des fonctions cellulaires en réponse à la colonisation microbienne.

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Découvrez la modélisation de microenvironnements vaginaux sains et dysbiotiques dans un vagin humain sur puce. Cette méthode microfluidique permet d'étudier les interactions avec le microbiome vaginal vivant et de développer des thérapeutiques ciblées.

Modélisation de microenvironnements vaginaux sains et dysbiotiques dans un vagin humain sur puce

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