Isolement de moelle osseuse de souris néonatale et préparation de macrophages dérivés de la moelle osseuse
24 mai 2024
Ce protocole décrit une méthode non enzymatique et simple pour isoler des cellules de moelle osseuse de souris néonatales âgées de 7 à 9 jours et générer des macrophages différenciés en utilisant un surnageant de cellules L929 comme source de facteur de stimulation des colonies de granulocytes (M-CSF). Les macrophages dérivés de la moelle osseuse ont été analysés plus en détail pour les antigènes de surface F4/80, CD206, CD11b et la compétence fonctionnelle.
Le but de cette étude est de comprendre certaines des limites de la réponse immunitaire précoce à l’infection bactérienne. Pour ce faire, nous devons développer et utiliser des modèles de recherche spécifiques aux nouveau-nés. L’isolement de la moelle osseuse d’un chiot de sept jours est difficile et n’est pas bien établi.
Les macrophages néonatals dérivés de la moelle osseuse sont sensibles et sujets au stress par rapport aux autres DMO. La technique utilisée dans ce protocole est simple et reproductible. Cette méthode guide les utilisateurs dans l’isolement de la moelle osseuse de souris néonatales âgées de sept à neuf jours sans utiliser d’enzymes.
Cette étude fournit une stratégie standardisée pour générer des macrophages dérivés de la moelle osseuse à partir de souris néonatales qui peuvent être utilisés pour répondre à des questions sur l’immunologie néonatale. Cette méthode reproductible fournit un modèle spécifique à l’âge pour faire progresser la recherche sur l’immunité néonatale dans de nombreux domaines d’expertise.
Aperçu
Ce protocole décrit une méthode non enzymatique pour isoler les cellules de la moelle osseuse de souriceaux néonatals et générer des macrophages différenciés. L'étude s'intéresse aux difficultés liées à l'utilisation de souriceaux néonatals âgés de 7 à 9 jours et à la sensibilité des macrophages dérivés de leur moelle osseuse.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Immunologie
- Biologie cellulaire
Contexte
- Comprendre les réponses immunitaires précoces aux infections bactériennes chez les nouveau-nés.
- Difficultés liées à l'isolement de la moelle osseuse chez les souriceaux néonatals.
- Les macrophages dérivés de la moelle osseuse néonatale sont sensibles et sujets au stress.
- Nécessité de techniques reproductibles en recherche néonatale.
Objectif de l'étude
- Développer une méthode fiable pour isoler la moelle osseuse chez les souriceaux néonatals.
- Générer des macrophages fonctionnels pour des études sur la réponse immunitaire.
- Approfondir la compréhension des réponses immunitaires néonatales.
Méthodes utilisées
- Isolation de la moelle osseuse de souriceaux âgés de 7 à 9 jours.
- Technique non enzymatique pour l'isolement cellulaire.
- Utilisation du surnageant de cellules L929 comme source de M-CSF.
- Analyse des antigènes de surface et de la compétence fonctionnelle des macrophages.
Résultats principaux
- Isolation réussie de macrophages dérivés de la moelle osseuse de souriceaux.
- Caractérisation des macrophages à l'aide des antigènes membranaires F4/80, CD206 et CD11b.
- Démonstration de la compétence fonctionnelle des macrophages obtenus.
- Validation de la méthode comme étant simple et reproductible.
Conclusions
- Le protocole fournit une méthode fiable pour l'étude des réponses immunitaires néonatales.
- Les macrophages isolés peuvent être utilisés pour des recherches immunologiques supplémentaires.
- Cette technique pourrait faciliter des progrès dans les études sur la santé néonatale.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
L'isolement fiable et la différenciation de macrophages dérivés de la moelle osseuse de souriceaux comblent une lacune critique dans la modélisation des réponses immunitaires précoces pour la recherche immunologique en phase de découverte. Ce protocole standardisé, sans enzyme, permet des études mécanistiques spécifiques à l'âge, renforçant la fiabilité prédictive des modèles de maladies néonatales et des recherches translationnelles. La méthode accroît la pertinence des projets en permettant des tests fonctionnels de cellules immunitaires adaptés à la biologie néonatale.
Applications stratégiques en recherche et développement biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet d'interroger les mécanismes immunitaires néonatals distincts de ceux des systèmes adultes.
- Permet la validation fonctionnelle de cibles dans des modèles inflammatoires et infectieux spécifiques à l'âge.
- Facilite la détection biologique des risques associés aux hypothèses en immunologie néonatale.
- Améliore la confiance prédictive concernant les cibles thérapeutiques en début de vie.
Développement de tests et criblage
- Permet une préparation standardisée et reproductible des macrophages néonatals pour des tests en aval.
- Permet une évaluation quantitative de la fonction phagocytaire à l'aide de bactéries conjuguées à un colorant sensible au pH.
- Permet l'analyse cytométrique en flux de marqueurs de surface pour la validation du test.
- Prépare des systèmes cellulaires validés pour le criblage de composés dans des contextes néonatals.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne les modèles de macrophages in vitro avec les réponses immunitaires néonatales pertinentes pour la maladie.
- Permet une continuité allant de la découverte à la validation préclinique dans des modèles spécifiques à l'âge.
- Prend en charge l'avancement ajusté au risque des programmes d'immunologie néonatale.
- Offre une déminution du risque de nature mécanistique pour les études sur les infections et l'inflammation en début de vie.
Intégration du pipeline et du flux de travail
Ce protocole s'intègre dans la continuité découverte-préclinique en permettant la vérification d'hypothèses, la validation fonctionnelle et des lectures quantitatives dans des modèles immunitaires néonatals.
- Biologie de la découverte : Soutient les études mécanistiques de la fonction des cellules immunitaires néonatales et l'analyse des voies biologiques.
- Tri : Fournit des macrophages prêts à l'emploi et reproductibles pour le tri fonctionnel et phénotypique.
- Analytique : Fournit des résultats quantitatifs par cytométrie en flux et tests de phagocytose afin de comparer les conditions.
- Recherche translationnelle : Relie la découverte scientifique et les travaux précliniques grâce à des modèles cellulaires immunitaires adaptés à l'âge.
- Réutilisation en entreprise : Met en place un flux de travail standardisé et réutilisable pour la préparation des cellules immunitaires néonatales dans différents programmes.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la recherche sur l'immunité néonatale.
- Valeur opérationnelle : Fournit une préparation cellulaire standardisée, reproductible et évolutible permettant la comparabilité entre études.
- Valeur stratégique : Permet de meilleures décisions d'orientation (go/no-go) et une meilleure efficacité du capital dans les portefeuilles d'immunologie néonatale.
- Impact sur le portefeuille : Soutient la priorisation et l'avancement, ajustées au risque, des cibles immunitaires de la petite enfance.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise dans la manipulation des souriceaux néonatals et dans les techniques stériles.
- Requiert un accès à la cytométrie en flux et à la microscopie à fluorescence pour l'analyse fonctionnelle et phénotypique.
- Exige une standardisation interéquipes pour assurer la reproductibilité dans les études multicentriques.
- Une adaptation peut être nécessaire selon les souches de souris ou les fenêtres d'âge.
- Le rendement cellulaire et la sensibilité au stress peuvent limiter l'extensibilité par rapport aux modèles adultes.
F.A.Q. sur la bio-industrie pharmaceutique
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
