Isolement de moelle osseuse de souris néonatale et préparation de macrophages dérivés de la moelle osseuse
May 24th, 2024
Ce protocole décrit une méthode non enzymatique et simple pour isoler des cellules de moelle osseuse de souris néonatales âgées de 7 à 9 jours et générer des macrophages différenciés en utilisant un surnageant de cellules L929 comme source de facteur de stimulation des colonies de granulocytes (M-CSF). Les macrophages dérivés de la moelle osseuse ont été analysés plus en détail pour les antigènes de surface F4/80, CD206, CD11b et la compétence fonctionnelle.
Le but de cette étude est de comprendre certaines des limites de la réponse immunitaire précoce à l’infection bactérienne. Pour ce faire, nous devons développer et utiliser des modèles de recherche spécifiques aux nouveau-nés. L’isolement de la moelle osseuse d’un chiot de sept jours est difficile et n’est pas bien établi.
Les macrophages néonatals dérivés de la moelle osseuse sont sensibles et sujets au stress par rapport aux autres DMO. La technique utilisée dans ce protocole est simple et reproductible. Cette méthode guide les utilisateurs dans l’isolement de la moelle osseuse de souris néonatales âgées de sept à neuf jours sans utiliser d’enzymes.
Cette étude fournit une stratégie standardisée pour générer des macrophages dérivés de la moelle osseuse à partir de souris néonatales qui peuvent être utilisés pour répondre à des questions sur l’immunologie néonatale. Cette méthode reproductible fournit un modèle spécifique à l’âge pour faire progresser la recherche sur l’immunité néonatale dans de nombreux domaines d’expertise.
Aperçu
Ce protocole décrit une méthode non enzymatique pour isoler les cellules de moelle osseuse de souris néonatales et générer des macrophages différenciés. L'étude se concentre sur les défis liés au travail avec des souris néonatales âgées de 7 à 9 jours et la sensibilité de leurs macrophages dérivés de la moelle osseuse.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Immunologie
- Biologie cellulaire
Contexte
- Comprendre les réponses immunitaires précoces aux infections bactériennes.
- Défis de l'isolement de la moelle osseuse de souris néonatales.
- Les macrophages dérivés de la moelle osseuse néonatale sont sensibles et sujets au stress.
- Besoin de techniques reproductibles dans la recherche néonatale.
Objectif de l'étude
- Développer une méthode fiable pour isoler la moelle osseuse de souris néonatales.
- Générer des macrophages fonctionnels pour des études de réponse immunitaire.
- Améliorer la compréhension des réponses immunitaires néonatales.
Méthodes utilisées
- Isolation de la moelle osseuse de souris néonatales âgées de 7 à 9 jours.
- Technique non enzymatique pour l'isolement cellulaire.
- Utilisation du surnageant de cellules L929 comme source de M-CSF.
- Analyse des antigènes de surface et de la compétence fonctionnelle des macrophages.
Résultats principaux
- Isolation réussie des macrophages dérivés de la moelle osseuse néonatale.
- Caractérisation des macrophages à l'aide des antigènes de surface F4/80, CD206 et CD11b.
- Démonstration de la compétence fonctionnelle des macrophages générés.
- Validation de la méthode comme simple et reproductible.
Conclusions
- Le protocole fournit une méthode fiable pour étudier les réponses immunitaires néonatales.
- Les macrophages isolés peuvent être utilisés pour d'autres recherches immunologiques.
- Cette technique peut faciliter les avancées dans les études sur la santé néonatale.
Questions fréquemment posées
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
