Identification de lymphocytes T rares spécifiques de l’antigène dans des poumons de souris avec un peptide : tétramères du complexe majeur d’histocompatibilité

Nous fournissons un protocole détaillé pour isoler et identifier des populations rares de lymphocytes T spécifiques de l’antigène dans les poumons de souris grâce à l’enrichissement des lymphocytes T à base de billes magnétiques et aux tétramères du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH).

Notre laboratoire étudie le développement des lymphocytes T CD4 dans différents contextes de tolérance et d’immunité. Dans l’ensemble de nos projets, nous nous intéressons principalement à la façon dont l’exposition aux antigènes favorise le développement de sous-ensembles phénotypiques de lymphocytes T qui établissent une mémoire immunitaire capable d’améliorer la tolérance à elle-même ou l’immunité contre les agents pathogènes. Récemment, nous nous sommes concentrés sur le développement de sous-ensembles de lymphocytes T régulateurs et mémoires qui résident dans le tissu pulmonaire.

Ces lymphocytes T résidents dans les tissus jouent un rôle important dans le renforcement de la tolérance aux auto-antigènes lors de lésions tissulaires, ou dans la promotion des réponses inflammatoires aux agents pathogènes lors de la réinfection. Notre laboratoire est spécialisé dans l’étude directe des lymphocytes T spécifiques de l’antigène, mais aussi des réactifs peptidiques personnalisés du tétramère du CMH. Cela nous permet d’étudier ces lymphocytes T sans utiliser de modèles transgéniques TCR ou d’autres manipulations expérimentales connues pour provoquer des artefacts expérimentaux.

Bien que nous puissions facilement identifier les lymphocytes T spécifiques de l’antigène avec des tétramères, ces lymphocytes T sont souvent présents à de très basses fréquences, en particulier lorsqu’ils sont dans un état naïf ou de mémoire. Il est également difficile d’isoler ces lymphocytes T des tissus non lymphoïdes où ils résident souvent à la suite d’une réponse immunitaire. Bien qu’il existe plusieurs protocoles établis pour isoler les lymphocytes T des poumons de souris, le protocole que nous présentons ici a été optimisé pour la détection ultérieure des lymphocytes T spécifiques de l’antigène à basse fréquence par coloration tétramère.

Dans ce protocole, nous avons également inclus deux options d’association de tissus afin de mieux tenir compte des ressources de la bibliothèque. Notre protocole aidera les chercheurs à étendre l’utilisation des tétramères aux lymphocytes T spécifiques de l’antigène dans le tissu pulmonaire. Cela conduira à des études in vivo plus puissantes sur le développement et la fonction des lymphocytes T mémoires dans les tissus, qui sont des sujets d’intérêt intense dans le domaine.