Utilisation d’un test de décalage thermique pour sonder la liaison du substrat à la sélénoprotéine O

Notre objectif est d’étudier l’activité biochimique de protéines aux fonctions inconnues. La liaison aux cofacteurs est non seulement essentielle à l’activité de certaines protéines, mais peut également altérer leur stabilité thermique. Une application pratique de ce phénomène consiste à utiliser le changement de stabilité thermique mesuré par la température de fusion de la protéine pour analyser la liaison des ligands.

Le dosage par décalage thermique est un outil polyvalent pour étudier les interactions des protéines avec des cofacteurs ou des médicaments potentiels, et pour identifier les conditions stabilisatrices de la cristallographie. Certains de ses avantages par rapport aux autres méthodes de criblage sont sa configuration relativement simple et son débit élevé avec des plaques de 96 ou 384 puits. La sélénoprotéine O, ou SelO, est une pseudokinase conservée au cours de l’évolution qui transfère l’adénosine monophosphate de l’ATP aux substrats protéiques dans une modification post-traductionnelle connue sous le nom d’AMPylation.

Dans ce protocole, nous utilisons la TSA pour analyser la liaison des nucléotides et des métaux à SelO.