Thermostabilisation, Expression, purification et cristallisation du Serotonin Human Transporter Bound to

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27 novembre 2016

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Ce manuscrit décrit comment dépister les thermostabilizing mutations, purifier le transporteur de la sérotonine humaine, générer des anticorps de haute affinité, et cristalliser le complexe transporteur-anticorps sérotonine lié à l'antidépresseur drogue S -citalopram. Ce protocole peut être adapté à l'étude d'autres transporteurs membranaires complexes, des récepteurs et des canaux.

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Liaison du S-citalopram

Chapters in this video

0:05

Titre

0:47

Transfection de cellules HEK293S GnTI- adhérentes pour le criblage de la thermostabilité

2:24

Criblage de la thermostabilité basé sur la proximité de scintillation avec le citalopram

4:18

Expression du transporteur de la sérotonine humaine dans les cellules HEK293S GnTI-

5:24

Purification par affinité du transporteur de la sérotonine pour l'immunisation et la cristallisation

7:12

Formation de complexes transporteur-anticorps et séparation par chromatographie d'exclusion stérique

8:21

Cristallisation de complexes transporteur-anticorps par la méthode de la goutte suspendue

10:01

Résultats : thermostabilisation et cristallisation du transporteur de la sérotonine lié à un antidépresseur

11:25

Conclusion

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