Name: Microscopie de localisation à une seule molécule des protéines membranaires utilisant le marquage à anticorps unique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: Découvrez le marquage à anticorps unique pour visualiser les interactions anticorps-épitope à l'échelle nanométrique dans les membranes de cellules T. Cette méthode permet d'étudier l'organisation spatiale des protéines membranaires.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Anticorps Alexa Fluor 488 anti-CD81</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MA5-44132</td><td>Anticorps d’imagerie</td></tr><tr><td>Centrifugeuse de laboratoire</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>MilliporeSigma</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>Verre à couvercle chambré, 8 puits</td><td>Cellvis</td><td>C8-1-N</td><td></td></tr><tr><td>Médias DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11960069</td><td></td></tr><tr><td>Solution physiologique tamponnée au phosphate de Dulbecco</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Sérum bovin fœtal</td><td>MilliporeSigma</td><td>F0926-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldéhyde, 10 %</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Colloïdes dorés, 100 nm</td><td>Ted Pella</td><td>15711 et moins ; 20</td><td>Marqueur fiduciaire</td></tr><tr><td>Huile d’immersion & nbsp ;</td><td>Laboratoires Cargille</td><td>16245</td><td></td></tr><tr><td>Microscope inversé &nbsp ; équipé du module TIRF</td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse Ti2-E</td><td>Microscope</td></tr><tr><td>Lignée cellulaire Jurkat E6.1</td><td>MilliporeSigma</td><td>88042803-1VL</td><td>Cellules de suspension</td></tr><tr><td>Lancement laser, 6 lignes</td><td>Oxxius</td><td>L6CC-CS8-1511</td><td>Laser d’excitation</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11668019</td><td>Réactif de transfection</td></tr><tr><td>Tube à microcentrifuge, 1,5 mL&nbsp ;</td><td>VWR</td><td>89000-028</td><td></td></tr><tr><td>Logiciels d’imagerie microscopique</td><td>Nikon Instruments</td><td>Recherche avancée sur les éléments du NIS</td><td>Logiciel d’acquisition d’images</td></tr><tr><td>Objective, 100x/1,49 CFI APO TIRF & nbsp ;</td><td>Nikon Instruments</td><td>MRD01991</td><td>Objectif microscope</td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde, 16 %</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td>Antibiotiques</td></tr><tr><td>Solution de poly-L-lysine, 0,01 % & nbsp ;</td><td>MilliporeSigma</td><td>P4707-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Caméra Prime 95B sCMOS</td><td>Teledyne Vision Solutions</td><td>01-PRIME-95B-R-M-16-C</td><td>Caméra</td></tr><tr><td>Médias RPMI 1640</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875-093</td><td>Supports pour cellules de suspension</td></tr><tr><td>Azidée de sodium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19038-1000</td><td></td></tr><tr><td>Borohydrure de sodium</td><td>MilliporeSigma</td><td>213462-25G</td><td></td></tr><tr><td>Fioles de culture T25</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>Microsphères TetraSpeck</td><td></td><td></td><td>Marqueur fiduciaire</td></tr><tr><td>Plat de culture tissulaire, 100 mm&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Gamme cellulaire U2OS</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Cellules adhérentes</td></tr></tbody></table>

microscopie de localisation à une seule molécule des protéines membranaires utilisant le marquage à anticorps unique

Single-Molecule Localization Microscopy of Membrane Proteins using Single-Antibody Labeling

Microscopie de localisation à une seule molécule des protéines membranaires utilisant le marquage à anticorps unique

The plasma membrane defines the cell shape and serves as the interface that governs intercellular communication. Membrane proteins constitute a major ...

single-molecule-localization-microscopy-membrane-proteins-using

Research

Recherche

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingénierie

Nous démontrons l’utilisation de la microscopie de localisation par photo-activation de fluorescence (FPALM) pour imager simultanément plusieurs types de molécules marquées par fluorescence au sein des cellules. Les techniques décrites permettent de localiser des milliers à des centaines de milliers de protéines individuelles marquées par fluorescence, avec une précision de plusieurs dizaines de nanomètres à l’intérieur de cellules uniques.

Imagerie multicolore simultanée de structures biologiques avec microscopie de localisation par photoactivation de fluorescence

Ce protocole décrit comment utiliser la microscopie à fluorescence à réflexion interne totale pour visualiser et suivre des récepteurs uniques à la surface de cellules vivantes et ainsi analyser la mobilité latérale des récepteurs, la taille des complexes récepteurs, ainsi que pour visualiser les interactions transitoires récepteur-récepteur. Ce protocole peut être étendu à d’autres protéines membranaires.

Haute résolution spatio-temporelle d&#39;analyse de la dynamique des récepteurs par simple molécule microscopie de fluorescence

La préparation de bicouches lipidiques planes fonctionnalisées par du verre, la détermination de la mobilité des protéines à l’intérieur et la mesure des densités de protéines sont présentées ici. Une feuille de route pour la construction d’un microscope à réflexion interne totale à bruit réduit est esquissée, qui permet de visualiser des fluorochromes résidents d’une seule bicouche avec une résolution spatio-temporelle élevée.

Bilayers seule molécule microscopie à fluorescence sur Planar pris en charge

Nous démontrons une méthode pour imaginer des molécules multiples dans des nano-structures hétérogènes à une seule précision de la molécule en utilisant la liaison séquentielle et l'élution d'anticorps marqués par fluorescence.

Imagerie haute résolution et ultra-résolution des cellules T à l&#39;aide de madSTORM

Nous présentons ici un protocole pour la localisation multi-couleur des protéines membranaires unique dans les organites des cellules vivantes. Pour fixer les fluorophores, étiquetage des protéines sont utilisées. Protéines, situés dans des compartiments de différentes membranes de l’organite même, peuvent être localisées avec une précision d’environ 18 nm.

Microscopie multicolore localisation des protéines de la Membrane unique dans les organites des cellules mammifères vivants

Nous présentons un protocole pour la détection optique en temps réel des protéines sans étiquette simples car elles sont sécrétées par les cellules vivantes. Celle-ci repose sur la microscopie interférométrique diffusion (iSCAT), qui peut être appliquée à une variété de configurations et différents systèmes biologiques.

Label-Free Imaging d’unique protéines sécrétée par les cellules vivant via iSCAT microscopie

Nous présentons ici un protocole pour évaluer l’homogénéité étiquetage pour chaque espèce de protéine dans un échantillon complexe des protéines à l’échelle de la molécule.

Échelle du protéome Quantification d’homogénéité à l’échelle de la molécule unique d’étiquetage

La microscopie de localisation simple molécule 3D est utilisée pour sonder les positions spatiales et les trajectoires de mouvement des protéines étiquetées fluorescentes dans les cellules bactériennes vivantes. Le protocole expérimental et d'analyse de données décrit ci-dessus détermine les comportements diffusifs répandus des protéines cytosoliques basées sur des trajectoires monomolécules mises en commun.

Microscopie de suivi à molécule unique - Outil pour déterminer les états diffusifs des molécules cytosoliques

Ce protocole décrit une approche de traitement d’image et de suivi d’une seule particule basée sur iSCAT qui permet d’étudier simultanément la masse moléculaire et le comportement diffusif des macromolécules interagissant avec les membranes lipidiques. Des instructions étape par étape pour la préparation des échantillons, la conversion masse-contraste, l’acquisition de films et le post-traitement sont fournies ainsi que des instructions pour éviter les pièges potentiels.

Suivi des particules sensibles à la masse pour caractériser la dynamique des macromolécules associées à la membrane

Ici, un protocole pour effectuer et analyser la liaison, la mobilité et l’assemblage de molécules uniques sur des membranes lipidiques artificielles encombrées à l’aide de la microscopie à fluorescence interne totale à molécule unique (smTIRF) est présenté.

Diffusion et assemblage d’une molécule unique sur des membranes lipidiques encombrées de polymères

Cet article fournit une description détaillée de la création d’échantillons pour le suivi d’une seule protéine dans les bicouches lipidiques soutenues par des solides. Il explique aussi un microscope à fluorescence simple avec une sensibilité à une seule molécule et un taux d’images rapide. Enfin, nous exposons la procédure d’extraction des trajectoires à une seule protéine.

Suivi des protéines individuelles dans les bicouches lipidiques à l’aide de la microscopie à fluorescence

Découvrez le marquage à anticorps unique pour visualiser les interactions anticorps-épitope à l'échelle nanométrique dans les membranes de cellules T. Cette méthode permet d'étudier l'organisation spatiale des protéines membranaires.

Microscopie de localisation à une seule molécule des protéines membranaires utilisant le marquage à anticorps unique

Explorer plus de vidéos