בידוד תאי מזותל: טכניקה לבידוד תאים מזותליים ראשוניים מדגימת רקמת אומנטום אנושית

תאי מזותל ראשוניים אנושיים, או HPMCs, מרפדים איברים קרביים רבים כמו האומנטום או שכבת רקמת השומן הקיימת בחלל הצפק.

כדי לבודד את תאי המזותל, התחל בטבילת דגימת אומנטום אנושית במאגר מתאים כדי להסיר את עודפי כדוריות הדם האדומות או RBCs. לאחר מכן, הניחו את האומנטום בכלי זכוכית וטחנו אותו לחתיכות. זה מנתק את הרקמה, ומשחרר HPMCs יחד עם ה-RBCs המזהמים.

העבירו את החלקים לצינור חרוטי והניחו להם להישאר דוממים למשך הזמן הרצוי. הרקמה הטחונה העשירה בשומן בצפיפות נמוכה עולה למעלה, ואילו הרכיבים התאיים הצפופים מתיישבים בתחתית. לאחר מכן, שאבו את הנוזל בתחתית, המכיל HPMCs ו-RBCs, לתוך צינור טרי.

צנטריפוגה לאיסוף התאים. הסר את ה-supernatant המכיל חוצץ. השעו מחדש את הגלולה במצע גידול מזותליאלי ודגרו למשך הזמן הרצוי. המדיה מקלה על צמיחה סלקטיבית של HPMCs על פני RBCs.

התבונן בתאים באמצעות מיקרוסקופ אור כדי לאשר את הצמיחה של תאי מזותל אנושיים בצורת קובואיד

עם רכישת דגימת אומנטום אנושית כירורגית, טבלו מיד את הדגימה ב-PBS בטמפרטורת החדר. תוך שעתיים מהטבילה, העבירו את האומנטום לצינור חרוטי של 50 מיליליטר המכיל 20 מיליליטר PBS טרי. העבירו את שטיפת ה-PBS הנותרת המכילה את תאי המזותל האנושיים העיקריים או HPMC ותאי דם אדומים לצינור חרוטי חדש של 50 מיליליטר וסובבו את התאים.

לאחר מכן, שפכו את תכולת הצינור לתבנית תרבית סטרילית בגודל 10 סנטימטר והשתמשו בשני אזמלים כדי לטחון את הרקמה לחתיכות של 5 מילימטר מעוקב. כדי לבודד את תאי המזותל האנושיים העיקריים או HPMC, העבירו את חתיכות האומנטום לצינור חרוטי של 50 מיליליטר והמתינו דקה אחת עד שהחתיכות המוצקות יצופו למעלה. ה-HPMC יתיישב בתחתית הצינור עם כדוריות הדם האדומות.

השתמש בפיפטה כדי להעביר את שטיפת ה-PBS המכילה תאי מזותל ותאי דם אדומים לתוך הצינור המכיל את התאים הגלולים וסובב את התאים. לאחר מכן, הוסיפו 20 מיליליטר של PBS טרי לאומנטום ואספו את ה-HPMC וה-RBC המכילים PBS שלוש פעמים נוספות כפי שהודגם זה עתה לתאים המקוריים.

לאחר הסיבוב האחרון, צלחו את התאים בבקבוק של 75 סנטימטר רבוע ב-15 מיליליטר של מצע גידול מלא. כדי לבודד HPMC נוסף מדגימת האומנטום, יש לנער את הרקמה המוצקה שנותרה ב-20 מיליליטר PBS ב-200 סל"ד ו-37 מעלות צלזיוס. לאחר 10 דקות, הניחו לדגימה לנוח דקה אחת כדי לאפשר לרקמה המוצקה לעלות לראש הצינור.

לאחר מכן, אסוף את ה-HPMC וה-RBC מתחתית הצינור כפי שהודגם זה עתה. כעת, סובב את התאים מהשטיפה המשנית וצלח אותם בבקבוק נפרד של 75 סנטימטר רבוע ב -15 מיליליטר של מצע גידול מלא. כדי לבודד את כל ה-HPMC שנותר, יש לנער את הרקמה למשך 10 דקות נוספות, הפעם בתערובת של PBS ו-10 מיליליטר של טריפסין-EDTA, ולצפות את ה-HPMC וה-RBC הללו בבקבוק של 75 סנטימטרים רבועים.

לאחר מכן, דגרו את התרביות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני בסביבה לחה. הזנת התאים המצופים ב -15 מיליליטר של מדיום גידול מלא טרי בימים 3 ו -5 מבלי להסיר את המדיום המושקע. ניתן לזהות את HPMC על ידי צורתם הקובייתית והביטוי שלהם של ציטוקרטין-8 ווימנטין.