השגת תאי סרטן שחלות ראשוניים מדגימות מוצקות: שיטה לתרבית תאי סרטן שחלות אפיתל מדגימות גידול בשחלות

תאי אפיתל הנמצאים על פני השטח החיצוניים של השחלה עלולים לעבור טרנספורמציה ממאירה לתאים סרטניים שיכולים לגדול לגידולי שחלות.

כדי לבודד את תאי סרטן השחלות האפיתל הללו או EOCs, התחל בלקיחת דגימת גידול בשחלות וטחון אותה לחתיכות קטנות. העבירו את החתיכות הטחונות לצינור המכיל מאגר עיכול בתוספת אנזים הפרוטאז הרצוי.

פרוטאזות אלו מפרקות את חלבוני המטריצה החוץ-תאית בתוך הרקמה, ומשחררות תאי EOC, אריתרוציטים וכמה פיברובלסטים מנותקים לתרחיף.

סנן את תמיסת התאים דרך מסננת כדי להפריד את התאים הבודדים התלויים מחתיכות רקמה לא מנותקות. צנטריפוגה את התרחיף כדי לגלול את תאי ה-EOC, אריתרוציטים ופיברובלסטים. יש להשליך את הסופרנטנט המכיל אנזים.

השעו מחדש את כדור התא למצע גידול אפיתל והעבירו אותו לצלחת תרבית. דגרו את התרבית כדי לאפשר לתאי ה-EOC והפיברובלסטים להיצמד לבסיס הצלחת בזמן שהאריתרוציטים צפים במדיה.

הסר את האריתרוציטים התלויים על ידי רענון המדיה. עם הזמן, המדיה מאפשרת צמיחה סלקטיבית של תאי EOC על פני פיברובלסטים ליצירת שכבה אחת של תאי סרטן שחלות ראשוניים.

אספו את הדגימה מחדר הניתוח והעבירו אותה על קרח למעבדה. עדיין בתוך המיכל המועבר, הנח את הדגימה במכסה בטיחות ביולוגי. העבירו את הדגימה מצינור חרוטי של 50 מיליליטר לצלחת פטרי בגודל 60 מילימטר על 60 מילימטר המכילה 10 מיליליטר PBS טרי קר כקרח.

לאחר מכן, בעזרת סכין גילוח סטרילי, חתכו עוד יותר את הדגימה לחתיכות בגודל 2 מילימטר או קטנות יותר. לאחר מכן, טפל ב-DMEM עם dispase II בצינור חרוטי של 15 מיליליטר. העבירו את הרקמות הטחונות לצינור התערובת DMEM dispase II. לאחר מכן, דגרו את הדגימה ב-5% פחמן דו חמצני ו-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. ערבבו ידנית את תמיסת התאים כל חמש דקות כדי להבטיח עיכול מיטבי.

לאחר הדגירה, העבירו את תמיסת התאים דרך מסננת תאי רשת של 70 מיקרומטר המונחת על גבי צינור חרוטי של 50 מיליליטר. הפעל בעדינות לחץ על הרשת באמצעות בוכנת מזרק. השלך את כל הרקמה הלא מנותקת שנותרה על גבי הרשת ואסוף את תרחיף התאים שהתקבל בצינור החרוטי הסטרילי של 50 מיליליטר.

לאחר מכן, צנטריפוגה את הצינור החרוטי ב-320 x גרם למשך שבע דקות ב-4 מעלות צלזיוס. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את כדור התא ב-10 מיליליטר של DMEM המכיל 10% FBS ו-1% PS. לאחר מכן, העבירו את תרחיף התא לצלחת פטרי ודגרו את התרחיף ב-5% פחמן דו חמצני ו-37 מעלות צלזיוס. שנה את המדיום 24 שעות לאחר הציפוי הראשוני כדי להסיר את הפסולת התאית ואת רוב האריתרוציטים הקיימים בתרבית.

לבסוף, החלף את המדיום כל שלושה ימים במשך השבועיים הבאים, ולאחר מכן התרביות של תאי EOC ראשוניים מוכנות ליישומים במורד הזרם.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.