בדיקת מגע זחלים: הליך להערכת תמותת זחלי יתושים בעקבות מגע ישיר עם תרכובת זחלי בדיקה

כדי להעריך את הפוטנציאל של תרכובת קוטלת זחלים לבדיקה, אנטגוניסט לקולטן דופמין, באמצעות בדיקת מגע זחלים, מתחיל עם זחלי יתושים חיים בשלב ההתפתחותי או הכוכב הרצוי שלהם במדיה מימית. העבירו מספרים שווים של הזחלים לבארות של צלחת מרובת בארות.

החלף את המדיה בבארות במים נטולי יונים כדי למנוע הפרעות של מזהמים שעלולים להשפיע לרעה על הזחלים. הוסף ריכוזים הולכים וגדלים של תרכובת הבדיקה לבארות המתאימות.

סובב בעדינות את הצלחת כדי להקל על המגע בין הזחלים לתרכובת הבדיקה. דגרו את הצלחת בתנאים מתאימים.

במגע עם הזחלים, תרכובת הבדיקה נכנסת לדופן הגוף או לשכבה החיצונית ביותר ומגיעה לספירקולות, פתחי מערכת קנה הנשימה, המחוברים לגרעינים - אשכול תאי עצב - המרכיבים את מערכת העצבים המרכזית.

על תאי העצב, תרכובת הבדיקה נקשרת לאתרי הקישור המשניים של קולטני הדופמין, המעורבים בתהליכים תאיים קריטיים. קשירה זו, אפילו עם המוליך העצבי דופמין הקשור לקולטן הדופמין, מונעת הפעלת קולטנים ואיתות במורד הזרם, משבשת את התפתחות הזחלים, ובסופו של דבר גורמת למוות.

רשום את מספר הזחלים שאינם מגיבים, חסרי תנועה, בכל באר בנקודת זמן מסוימת לאחר חשיפה לתרכובת הבדיקה על פני ריכוזי תרכובות משתנים.

שיעור תמותת זחלים מוגבר עם עלייה בריכוז מצביע על פוטנציאל קוטלי הזחלים של תרכובת הבדיקה.

כדי להתחיל, סמן את הבארות של צלחת תרבית רקמות שקופה עם 24 בארות. השתמש באיזון אנליטי כדי לשקול את תרכובת הבדיקה. לאחר מכן, ממיסים את התרכובת במים סטריליים מזוקקים כפולים בצינור של 1.5 מיליליטר, וכתוצאה מכך תמיסת מלאי של 80 מילי-מולאר. לאחר מכן, יש לדלל באופן סדרתי את תמיסת המלאי באמצעות מים מזוקקים כפולים להכנת תמיסות מלאי עבודה בריכוזים הרצויים.

שימו לב שיש לנקוט בזהירות בעת הוספת הזחלים לבארות, במהלך פינוי עודפי מים וכאשר מוסיפים את כימיית הבדיקה, כדי למנוע נזק פיזי לזחלים. פציעה עלולה להגביר את התמותה, ובכך לייצר תוצאות חיוביות כוזבות או לפסול את הבדיקה.

השתמש בפיפטה מפלסטיק רחב כדי להעביר חמישה זחלי כוכב שלישי לכל באר של הצלחת. לאחר מכן, השתמש בפיפטה של 1 מיליליטר כדי להסיר בעדינות את המים, והחלף אותם בנפח הרצוי של מים מזוקקים כפולים.

הקפד לא לגעת בזחלים בעת הוצאת המים. עבדו במהירות כדי להבטיח שהזחלים לא יתייבשו, והוסיפו בעדינות את כימיית הבדיקה על ידי פיפטינג כנגד הצד הנגדי של באר הפלסטיק.

הוסף נפח מתאים של תמיסת בדיקה לכל באר, וסובב בעדינות את הצלחת כדי להבטיח ערבוב אחיד. הנח את הצלחת בתא גידול, תוך שמירה על מחזור אור-חושך של 12 שעות ב-25 מעלות צלזיוס עם לחות יחסית של 75% עד 85%.

כדי לבדוק את תנועת הזחלים, הקש בעדינות על הצלחת. אם לא נצפתה תנועה, גע בעדינות בזחל בעזרת קיסם סטרילי. ציינו את הזחל כמת אם לא מבחינים בתגובה, והשתמשו בגיליון ניקוד כדי לרשום את המספר הכולל של הזחלים המתים בכל באר בנקודות הזמן המתוארות בפרוטוקול הטקסט.