יצירת מודל עכברי של מלריה מוחית ניסיונית באמצעות ספורוזואיטים שמקורם ביתושים מארחים

התחילו עם צינור המכיל בלוטות רוק מנקבות יתושים הנגועות ב-Plasmodium berghei - טפיל הגורם למלריה.

משבשים מכנית את הבלוטות, ומשחררים את הספורוזואיטים - צורה זיהומית של הטפיל לתווך.

גלולה את שברי הבלוטה והפסולת. אסוף את הסופרנטנט המכיל ספורוזואיט והזריק אותם לווריד הזנב של עכבר מרוסן.

הספורוזואיטים המוזרקים עוברים בזרם הדם ומגיעים לכבד, שם הם מדביקים הפטוציטים ומתרבים, ויוצרים מרוזואיטים - צורה פולשנית של הטפיל.

עם הזמן, הפטוציטים משחררים מרוזואיטים לזרם הדם, ופולשים לתאי הדם האדומים, או RBCs.

בתוך ה-RBCs, המרוזואיטים משתכפלים בצורה א-מינית, מתפתחים לצורה בוגרת ומבטאים אנטיגנים שמקורם בטפילים על פני השטח של ה-RBCs.

אנטיגנים אלה נקשרים לקולטני אנדותל, כולל אלה בכלי הדם במוח, מה שמוביל לקיבוע של RBCs נגועים ולא נגועים.

הצטברות RBC חריגה זו משבשת את מחסום הדם-מוח, גורמת להצטברות נוזלים בפרנכימה של המוח ולהתפתחות מלריה מוחית בעכבר.

התחל באיסוף נקבות יתושים מהכלוב שלהן 17 עד 22 יום לאחר ארוחת הדם. השתמש במלקחיים כדי להניח 3 עד 4 יתושים על מגלשת זכוכית מכוסה בטיפת מדיום RPMI קר. לאחר מכן, הנח את השקופית מתחת למיקרוסקופ.

מתחו בזהירות את היתוש בין הראש לגוף בעזרת מלקחיים, והשתמשו במזרק ובמחט כדי לבודד את בלוטת הרוק. לאחר מכן, אספו את בלוטות הרוק ממגלשת הזכוכית על ידי יניקתן עם פיפטה מזכוכית, והעברתן לצינור צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר. לאחר מכן, השתמש במקל פלסטיק קטן כדי לרסק את בלוטות הרוק המבודדות בתוך צינור הצנטריפוגה למשך שלוש דקות על מנת לבודד את הספורוזואיטים מרקמת בלוטת הרוק.

צנטריפוגה למשך שלוש דקות ב-1,000 פעמים גרם ב-4 מעלות צלזיוס כדי לטהר את הספורוזואיטים מהרקמה שנותרה. פיפטה את הסופרנטנט, המכיל את הספורוזואיטים, לצינור צנטריפוגה חדש, וספרו את הספורוזואיטים המטוהרים בהמוציטומטר נויבאואר. ספורוזואיטים מראים תנועה אופיינית נגד כיוון השעון.

לאחר מכן, התאם את ריכוז הספורוזואיטים המטוהרים ל-10,000 למיליליטר על ידי הוספת מי מלח עם פוספט. לבסוף, הניחו עכבר C57BL6 במסננת, והכניסו את זנבו למים חמים כדי לדמיין טוב יותר את וריד הזנב. לאחר מכן, הזריק בסך הכל 1,000 ספורוזואיטים, או 0.1 מיליליטר, לווריד הזנב כדי ליזום זיהום.