Name: כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור Multiplexed (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: למד כיצד לכוון טור HPLC עם זרימה מקוטעת מקבילה לאיתור מרובה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מהיר של דגימות מורכבות כמו קפה ויין לזיהוי טביעת אצבע כימית ולהבחנה בין מוצרים אותנטיים לזיופים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי UWS ו-ThermoFisher Scientific. אחד המחברים (DK) מודה על קבלת פרס אוסטרלי לתארים מתקדמים.

הערה: פרוטוקול זה מכיל הוראות כיצד להשתמש בעמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים במערכת HPLC יחד עם גלאים מרובים לאיתור מרובב. הפרוטוקול נכתב בהנחת שהקורא יש לו ידע בסיסי וניסיון בכרומטוגרפיה ושיטות זיהוי HPLC שונים. זהירות: עיין בגיליונות נתוני בטיחות חומרים (MSDS) עבור כל החומרים וריאגנטים לפני השימוש (כלומר, MSDS למתנול). להבטיח את השימוש של כל נהלי הבטיחות המתאימים בעת טיפול בחומרים ממסים ונוזלית כרומטוגרפיה eluent ביצועים גבוהים (HPLC). להבטיח שימוש נכון של בקרות הנדסה של HPLC, מכשור איזון וגלאי אנליטיות, ולהבטיח את השימוש בציוד מגן אישי (משקפי מגן, כפפות, מעיל מעבדה, מכנסיים באורך מלאים, ונעליים סגורות הבוהן). 1. הגדרה של HPLC Instrument <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מכשיר HPLC עם המים ultrapure (למשל, 100% מים מילי- Q) לליןהדואר ומתנול 100% לקו B כשלב הנייד ולטהר את המשאבות לפי דרישת יצרן. אם אחד מהגלאים משמשים הוא MS, כפי שהוא כאן, להוסיף 0.1% חומצה פורמית לשני שלבים הניידים A ו- B. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת HPLC רכיבים וגלאים סייעו כפי שמודגם באיור 2. זה דורש מיקום נוח של גלאים ביחס לטור כדי למזער את הנפח המת בין הגלאי ועמודה. גמישות בתצורת מערכת HPLC רצויה. </li></ol> 2. התקנה של UV-Vis וגלאי MS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את גלאי UV-Vis לאורך הגל הרצוי התלוי במדגם של עניין (למשל, ננומטר 280). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את גלאי MS במצב חיובי לניתוח רוזן סה&quot;כ יון (TIC) באמצעות שיטת זיהוי סריקה מלאה. גם להתאים את הפרמטרים הבאים MS בהתאם: הטמפרטורה מאדה 500 מעלות צלזיוס, טמפרטורת נימים 350 ° C, גז נדן, בשיעור של 60 יחידות, זרימת גז עזר40 ולטאטא זרימת גז ב 5 יחידות, ומתח תרסיס 3.5 קילו וולט. ניתן לכוונן את הגדרות אלה מאוחר יותר לדרישות משתמש ספציפיות תלויות במדגם להיות מנותח. </li></ol> 3. הכנת 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl הרדיקלי (DPPH •) מגיב התקנה של גלאי מערכת • DPPH <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 25 מ&quot;ג של DPPH • ולפזר ב250 מיליליטר של מתנול בבקבוק נפח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 250 μl של חומצה פורמית למגיב DPPH •. מכסה את הבקבוק בנייר כסף, כדי למנוע חשיפה לאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Sonicate הבקבוק המכיל מגיב DPPH • במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטהר את משאבת DPPH • עם מגיב DPPH • מוכן לפי הדרישה של היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר את מערכת DPPH • על פי איור 2 על ידי הצמדת קו המשאבה לכניסה של T-פיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף סליל תגובת μl 100 השקע דואר של T-החתיכה ולצרף את הקצה השני של סליל התגובה לגלאי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים בארגז סליל התגובה בתנור טור ולהגדיר את טמפרטורת תנור עמודה עד 60 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את-Vis UV גלאי DPPH • 520 ננומטר. </li></ol> 4. הגדרה של טור כוחות הביטחון הפלסטיניים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הכניסה של כוחות הביטחון הפלסטיניים לעמודת מכשיר HPLC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את היציאה המרכזית לגלאי MS, באמצעות אורך 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר יציאה היקפית לגלאי UV-Vis באמצעות אורך 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר אחר יציאה היקפית לT-פיסת מערכת איתור DPPH • שימוש באורך 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חסום את היציאה ההיקפית שאינו בשימוש באמצעות פקק טור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את קצב הזרימה של משאבת HPLC לדקות 1 מיליליטר -1 ב 100% קו B - מתנול 100% (0.1% חומצה פורמית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן את העמודה עם 100% ph הנייד מתנולASE עבור 20 דקות לx 250 מ&quot;מ אורך טור 4.6 id מ&quot;מ. הפעם ישתנה בהתאם לממדים של עמודות אחרות המשתמש יכול להעסיק. </li></ol> 5. כוונון טור כוחות הביטחון הפלסטיניים לאיתור Multiplexed <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את המסה של לפחות שני כלי אוסף ריקים (אחד ליציאה המחוברת לגלאי UV-Vis ואחד לגלאי DPPH •) באמצעות איזון אנליטיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף שלב נייד מUV-Vis ויציאות DPPH • לשני כלים נפרדים,-שקל מראש אוסף (5.1). רשום את פרק זמן לאיסוף. לאסוף לפחות 500 מ&quot;ג של ממס בכל כלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את כלי האיסוף ולקבוע את המסה של שלב נייד. בהתחשב בצפיפות של מתנול הוא .791 מיליליטר ז -1, לקבוע את עוצמת הקול של שלב נייד שנאסף מכל יציאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על ידי הבדל, כלומר, סט קצב זרימת משאבה נומינלית בניכוי קצב הזרימה דרך • DPPH ו- UV-Vis detectoזרימת יציאות R, לקבוע את קצב הזרימה לגלאי MS. הגעה כל תזרים פרופורציה כאחוז מהסך כל הזרימה. הערה: באופן אידיאלי, זרימת האחוזים הם: לטרשת הנפוצה היא 18% מכלל קצב הזרימה, לUV-Vis 22%, לגלאי DPPH • 60%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם לא, להתאים את זרימת אחוזים על ידי שינוי הלחץ שוב על גלאי UV-Vis. לדוגמא, אם את הזרימה לUV-Vis היא גבוהה מדי, להפחית את השיעור על ידי הוספה להוסיף סעיף 15 סנטימטר של צינורות id 0.13 מ&quot;מ ליציאה של גלאי UV-Vis. אז לחזור על שלבי 5.1 עד 5.5. </li></ol> 6. תנאי התקנה סופיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קצב הזרימה של המשאבה מגיב DPPH • לאותו קצב זרימת יציאת היציאה לשקע מחוברת לגלאי DPPH •. הערה: טור כוחות הביטחון הפלסטיניים multiplexed עם UV-Vis, DPPH • וMS מוכן לניתוח עכשיו. </li></ol>

<ol><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+a+new+concept+chromatography+column%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology%3A+Parallel+segmented+outlet+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations%3A+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> 35 (3), 410-415 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology%3A+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111, 3-7 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography%3A+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+active+flow+technology+HPLC+columns+as+a+platform+for+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection.</a> Microchem. J. 110, 473-479 (2013).</li>
<li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns%3A+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+%27virtual%27+narrow+bore+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).</li>
<li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116, 230-234 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection%3A+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מחקר זה כלל האפיון ואפיון של קפה באמצעות HPLC עם גילוי ריבוב העסקת עמודה מקבילה זרימה מפולחת (כוחות הביטחון הפלסטיניים). המרובב HPLC באמצעות עמודות כוחות הביטחון הפלסטיניים מאפשר אפיון וזיהוי של גורמים כימיים מפתח על ידי הפחתת מורכבות נתוני המדגם תוך קבלת מידה רבה יותר של מידע מולקולה ספציפית בתוך שבריר של הזמן שלוקח באמצעות תהליכים רב-גילוי קונבנציונליים. טור כוחות הביטחון הפלסטיניים לא רק מאפשר פלטפורמה לגילוי מרובב, אלא גם שילוב של שניהם גלאים הרסניים ולא הרסניים, ללא נפח מת נו...

עמודות זרימת טכנולוגיה פעילה עמודות כרומטוגרפיה טכנולוגית זרימה פעילה (AFT) פותחו לאחרונה להתגבר חוסר יעילות בהפרדות הקשורים זרימת ההטרוגניות 1-6 וגם כדי לאפשר זיהוי מרובב. בפירוט שתקשורת מסוים זה התהליך התפעולי של המקביל מפולח זרימת טור (PSF) עם זיהוי מרובב. היתרונות הפונקציונליים המפתח של טור כוחות הביטחון הפלסטיניים הם: (1) התזרים מאזור המרכז הרדיאלי של מיטת העמודה מבודד מאזור הפריפריה או קיר של זרימה, (2) הנפח של שלב נייד שחייבים להיות מעובד על ידי זיהוי מקור מצטמצם, וניתן multiplexed מקורות (3) זיהוי להרחיב מידע מדגם ללא הקניית עיכובי זיהוי פני כל תהליך זיהוי, או לאחר מכן מחייבים את הפיצול של זרימת זרם פוסט עמודת 7,8. התכונה המרכזית בעיצוב של עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים, המאפשרת לdvantage של זיהוי מרובב היא ההרכבה הראויה וfrit לשקע רומן. איור 1 הוא תצלום של טור AFT בהשוואה לטור קונבנציונלי. חשוב להבין כי תהליך הפיצול הושג באמצעות זרימה מפולחת עמודות מקבילות הוא לא אותו הדבר כמו פיצול זרימת הודעה טור זרם. בזרימה הודעה טור זרם לפצל את הלהקה כולה מדגם מהמוביל הקצה לגפיים של הזנב נדגם באותה מידה (כלומר, צירי), ובכך, כל תזרים זרם שווה ביחס ליעילות ורגישות; סדר הגודל של הרגישות ובכך הם מחולקים במספר הפיצולים. בכוחות הביטחון הפלסטיניים, לעומת זאת, דגימות תהליך פיצול הלהקה רדיאלית, לא צירי. ככזה, הדגימות המרכזיות נמל שיא השיא - האזור מרוכז ביותר של השיא. לפיכך, הרגישות כאן היא גבוהה ביותר כשיא אינו מדולל על ידי האזור המפוזר עוקב. מדגם משחררי מהנמלים ההיקפיים הוא לא יעיל כמו בCENTRAאזור l, אבל, מאז הלהקה נדגם רדיאלית, ולא צירי, הרוחב של השיא הוא צר יותר יהיה המקרה לתהליך דגימה שחלק השיא בכיוון הצירי, כלומר, פיצול הודעה עמודה. מכאן הרגישות עם גלאים תלויים ריכוז לא מצטמצמת. בעמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים, ראוי לשקע כולל יציאות יציאה מרובות ועל החלק הפנימי של סוף זה מתאים לשם שוכן frit טבעתי. החלק הפנימי של ערוצי frit טבעתיים זה לזרום החוצה מהטור דרך יציאת השקע המרכזית רדיאלי, ואילו החלק החיצוני של רדיאלי ערוצי frit לשקע לזרום החוצה של העמודה באמצעות הזרימה לשקע יציאות היקפי או קיר אזור. החלקים הפנימיים וחיצוניים של frit לשקע מופרדים על ידי מחסום בלתי חדיר המונע זרימה צולבת בין זרימת האזורים אלה 2. כתוצאה מעיצוב זה זרימת רדיאלי הזרם המרכזי במיטת העמודה מופרד מזרימת תוספות קיר האזורהחביא את הטור. החלק היחסי של זרימה משני אזורים אלה יכול להיות מגוון כמעט לכל יחס רצוי באמצעות ניהול לחץ כדי לייעל את ההיבטים שונים פונקציונליים של טכנולוגית העמודה, כגון יעילות הפרדה או רגישות זיהוי. במהותה, העיצוב הזה ביעילות קובע במסגרת טור הפורמט הגדול עמודה &quot;וירטואלית&quot;, שקוטר פנימי צר, ולכן פונקציות טור כעמודת קיר-פחות נכונה, להתגבר על ההטרוגניות מיטת טור וקיר ההשפעות 9,10. היתרונות העיקריים של כוחות הביטחון הפלסטיניים עמודות שיפורים ביעילות טור, מזעור עיבוד הממס למקור זיהוי (ים) ומאפשר זיהוי מרובב. עם זאת, יתרון נוסף הוא שמאז tailing והאזורים בחזית של כל להקה יוסרו מelution הכולל פרופיל המומס בelution או זיהוי נמצא בריכוז גבוה יותר מאשר היה להיות שנצפה לאותו יםolute הזרקה ועומס ריכוז על עמודה קונבנציונלית, בהתאם ליחס הפילוח המועסק. כתוצאה מכך יש הוא נצפה לעתים קרובות רווח בעוצמת אות להפרדות שנערכו בטורי כוחות הביטחון הפלסטיניים 2. למעשה, אם יחס הפילוח מותאם כך שעל 25% מתזרים יציאות מכל אחת מארבע יציאות היציאה, עוצמת האות שנצפתה באמצעות זיהוי Ultra-סגולה (UV) מראה כמעט זהה עוצמת האות המדויקת כלכאורה באמצעות קונבנציונלי טור שבו כל (100%) של השלב הנייד מנותח 7. יתר על כן, כוונון עדין של היחס בין שקע זרימת האזורים המרכזיים וקיר מאפשר את יעילות הטור להיות מותאמת. הרווחים ביעילות טור נצפו באמצעות עמודות AFT לא ניתן לומר לערך יחיד, מאז רווחים יעילות אלה הם פונקציה של שלושה גורמים: (1) קצב הזרימה, (2) יחס הפילוח, ו- (3) גורם השימור המומס . עם זאת, עלייה ביעילות בהשוואה למרהעמודות entional כמעט תמיד הם נצפו, ולפעמים רווחים אלה במספר הצלחות התיאורטיות 1,2 יותר מ -100%. היכולת לכוון את יחס הפילוח מאפשר למטפל להתאים את הקוטר של הטור &quot;הווירטואלי&quot; ביעילות, ואת זה הוא גורם חשוב ביחס לתהליך זיהוי. לדוגמא, קוטר עמודה וירטואלית 2.1 מ&quot;מ פנימית (ID) הוקמה מעמודת id 4.6 מ&quot;מ פיזי כאשר יחס הפילוח הוא 21% משלב נייד משחררי מנמל היציאה המרכזי רדיאלי. בתנאים אלה, עמודת id 2.1 מ&quot;מ הווירטואלי מבצעת עם יעילות שעשויה להיות יותר מ -70% יותר מעמודת id 2.1 מ&quot;מ הקונבנציונלי, בהתאם לקצב זרימה, וגורם שימור מומס 10. עיצוב עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים הנוכחי המשמש לגילוי ריבוב משלב 4 יציאות לשקע מתאימות, אבל הטור יכול להיות מצויד עם 2 יציאות מתאימות גם הסוף, עם זאת, זה לא מגביל את זיהויo רק שני גלאים. הפעולה הבסיסית של עמודות אלה, עם זאת, אותו, מלבד יכולים להיות יחד כי ארבעת גלאים במקביל לטור כוחות הביטחון הפלסטיניים שקע 4 יציאות הרחבת ההיקף לאיתור מרובב. מלבד צינורות חיבור טור לפני ואחרי, הדרישות נוספות רק לפעול עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים הוא צינור שיכול להיות מחובר ליציאות לשקע ההיקפיים, ואמצעים שבם הסכום של שלב נייד עובר צינור אחד ניתן למדוד, בדרך כלל גם מדידת מסה או מדידת נפח. על מנת להקל על כוונון, הקוטר הפנימי של כל הזרימה לשקע צינורות צריך להיות זהה. זרימת היחס בין יציאות יציאה המרכזיות ההיקפית ורדיאלי אז מגוון באמצעות ניהול לחץ, פשוט על ידי שינוי האורך של הצינור ממוקם בשקע ההיקפי המתאים, או האורך של הודעה צינורות גלאי בפתח היציאה המרכזית רדיאלי. מרובב איתור שימוש בעמודות כוחות הביטחון הפלסטיניים </strong&gt; יתרון חשוב של עמודות כוחות הביטחון הפלסטיניים הוא שכל אחד מנמלי יציאת השקע יכול להיות מחובר למקור איתור ישירות, ובכך לאפשר זיהוי מרובב. במערכת איתור מעוצבת היטב ניתוח יחיד עם זיהוי מרובב יכול לספק מידע משמעותי בכל הקשור לטבע של הרכיבים בתוך המדגם. חשוב לציין, ניתן לבצע בדיקות הרסניות ולא הרסניות בדיוק באותו הזמן, ללא דיחוי זיהוי. זה מאפשר הקצאה המוחלטת של, למשל, נוגדי חמצון באמצעות מגיב DPPH •, עם רכיבים שנצפו לelute עם UV ו / או תגובות זיהוי ספקטרוסקופיית מסות (MS) 7,11. לכן, יכולים להיות מופעלים על ארבעה גלאים עצמאיים בו זמנית עם חלקים מתאימים של זרימה מופנים לכל גלאי באמצעות כל אחת מארבע היציאות לשקע. מאז את הזרימה דרך יציאות אלה יכול להיות מותאמות כמות מומסת להגיע כל הגלאים בקלות יכולה להיות מותאם לחליפההרגישות של מקור הגלאי נתון. יש לציין, עם זאת, כי ההגירה מומסת היעילה ביותר שנצפתה דרך פתח היציאה המרכזית רדיאלי. כל אחד מהנמלים ההיקפיים מציע יעילות הפרדה שווה ערך, שכאשר נקבעו ל- 25% בכל יציאה, היא רק מעט פחות יעיל מאשר טור קונבנציונלי. ככזה, חשוב שהגלאים כמותיים להיות מוגדרים לנתח דגימה מנמל היציאה המרכזית רדיאלי. בעת הגדרת עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים לצורך זיהוי ריבוב יש מספר השיקולים שצריכים להיעשות כדי להשיג תוצאות יעילה ואיכותיות; שממדי צינור לכל יציאה, בחירה של שיציאה לסוג של גלאי וזרימת התאמה. מימדי צינור לכל יציאה בכרומטוגרפיה האורך של צינורות הודעה עמודה ממלא תפקיד מכריע ביעילות וביצועים של ההפרדה. DEA הגדולד-נפח כתוצאה מצינורות id ארוכים או רחבים משקע עמודה לגלאים יגרום להפסד של יעילות, רזולוציה ורגישות. כך, ממדי צינורות מתאימים חייבים להיות מנוצלים בעת הגדרת עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים כדי להשיג את הפוטנציאל המרבי במתן הפרדה יעילה תוך מתן היתרונות של ריבוב. נמל לגלאים איור 2 הוא דוגמה להתקנת דוגמא של גילוי ריבוב (ויולט-גלוי Ultra (U-Vis), ספקטרומטר המסה (MS) ו2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH •) זיהוי). האיור מציג את הנמל המרכזי מחובר לגלאי MS, ואילו • DPPH וגלאי UV-Vis מחוברים ליציאות ההיקפיים. מאז MS הוא הגלאי רגיש ביותר של שלוש, תזרום לגלאי זה הופנה מנמל היציאה המרכזי. כגילוי DPPH • הוא סלקטיבית לpresencדואר של נוגדי חמצון, ורגיש לפחות וסובלני ביותר להרחבת להקה, תזרום לגלאי זה הופנה מנמל היקפי. UV-Vis היה גלאי &#39;גנריות &quot;משניים, כך יזרום לגלאי זה הופנה מנמל היקפי שני. זרימת התאמה ברגע שהצינור המתאים כבר מחובר מיציאה לגלאי, זרימת יציאה מכל אחד מהגלאים יכולה להיות מותאמת לסכום הנדרש. דרך פשוטה למדוד את כמות זרימת יציאה מכל גלאי היא לשקול את הסכום של שלב נייד שelutes דרך כל יציאה על תקופת זמן נתונה. זרימת אחוז ובכך ניתן לקבוע, ויכולים להיות מותאם זרימת היחסים או על ידי קיצור או הארכת צינורות המחוברים לקו לשקע בגלאים בהתאם כדי שיתאים לדרישות של הגלאים של בחירה. יש גלאים שונים יש דרישות שונים של זרימה, למשל, תא הזרימה שלגלאי הקרינה (FLD) אינו קצב הזרימה מוגבל, אך יש להקפיד להימנע על-שמירת לחץ של תא הזרימה. מכאן השליטה של ​​זרימה דרך FLD בדרך כלל השיגה על ידי התאמת הירידה בלחץ על פני הגלאים האחרים ואת יתרת הזרימה אז עוברת דרך FLD. גלאי שרגיש לכמות הזרימה שמועברת הוא הטרשת הנפוצה. בדרך כלל, ספקטרומטרים המוניים סוף גבוה הנוכחיים יכולים בקלות לעבד סביב 1 עד 1.5 מיליליטר / דקה של שלב המימי בינוני נייד. מעל קצב זרימה זו, הצפה של המקור עלולה להפוך את MS שמיש. עם זאת, רגישות זיהוי ברוב ספקטרומטרים מסה נהנתה באמצעות ספיקות נמוכות יותר; ומכאן יכולות פיצול זרימת כוחות הביטחון הפלסטיניים הן מאוד שימושיות עבור יישומים הכוללים איתור טרשת נפוצה. יכולות להיות מנוצלת עמודה גבוהה ספיקות נפח, אבל עם המון נפח נמוך הועברו לגלאי MS. כוונון הזרימה לגלאי MS, לעומת זאת, חייבת להתבצע על ידי התאמת הירידה בלחץ לפניגלאי MS, MS ולא הודעה. כאן, השימוש בצינורות צרים נשא (id 0.1 מ&quot;מ) הוא מאוד שימושי, כמו הלחץ יכול להיות מותאם בקלות מבלי להוסיף נפח מת שאינו הולם. בהתאם לסוג של גלאי ההתאמה של יחס הפילוח ניתן לעשות גלאי או לפני או אחרי. אם גלאי אינו הרסני, כגון משמש UV-Vis, זרימת אחוז יהיה מדוד ומכוון פוסט גלאי. אם גלאי הרסני אחת משמש בקומפלקס להגדיר את זרימת אחוז נקבע על ידי החישוב לאחור ביחס לזרימת נמל האחוזים אחרים. אם גלאי מבוסס מגיב משמש כגון DPPH •, זרימת אחוז נמדד הודעה גלאי ללא התוספת של מגיב; ואם שניים או יותר הרסני גלאים משמשים, אז זרימת היחס נמדד מראש גלאי. איתור מערכות שעשויות לדרוש מכשור נוסף, DPPH • כאמור, יהיה לחץ מערכת נוסף שעשויות לשנות את הזרימהאחוז מצורף פעם אחת למערכת האיתור. לכן, שיקול דעת צריכה להיות משולם על לחץ במערכת של גלאים הרסניים, מראש גלאי בעת כוונון זרימת אחוז. ללא קשר ליחס הזרימה שמוגדר דרך כל היציאות, יש לקבל מידע כמותי באמצעות תקינה מתאימה. ברגע שזרימת היחסים מוגדרים, לעומת זאת, הם חזקים, והם לא ישתנו גם בתנאי elution שיפוע 7, פרוטוקול וידאו מפורט המלווה את כתב היד הזה נועד להראות כיצד להשתמש ומנגינת תפקוד עמודת כוחות הביטחון הפלסטיניים במצב ריבוב של זיהוי.

<table><tbody><tr><td>מכשיר</td><td></td><td></td> HPLC <td>גלאים מרובים לבחירה לזיהוי מרובה. גלאים לבחירה עשויים לדרוש מכשור נוסף, למשל , משאבה.</td></tr><tr><td>זרימה מפולחת מקבילה עמודת HPLC</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>לא מוגדר</td><td>בקרוב להיות ממוסחר</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>כל מותג</td><td></td><td>HPLC כיתה</td></tr><tr><td>PEEK צינורות</td><td>כל מותג</td><td></td><td>אורכים שונים ותעודת זהות.</td></tr><tr><td>פקקי עמודים</td><td>כל מותג</td><td></td><td>לחסימת יציאות היקפיות שאינן בשימוש.</td></tr><tr><td>חותך צינור הצצה</td><td>כל מותג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>איזון סולם אנליטי</td><td>כל מותג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>עצור שעון</td><td>כל מותג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלי איסוף Eluent</td><td>כל בקבוקוני</td><td>דגימה של מותג 1-2 מ"ל יכולים לשמש ככלי איסוף נוזלים</td><td></td></tr></tbody></table>

כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור multiplexed

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

טכנולוגיית זרימה אקטיבית (AFT) היא צורה חדשה של טכנולוגיית עמודות שתוכננה להתגבר על הטרוגניות זרימה כדי להגביר את ביצועי ההפרדה במונחים של יעילות ורגישות ולאפשר זיהוי מרובה. צורה זו של AFT משתמשת בעמודת זרימה מפולחת מקבילה (PSF). אביזר קצה לשקע עמוד PSF מורכב מ -2 או 4 יציאות, הניתנות לריבוב לחיבור של עד 4 גלאים. עמודת ה-PSF מאפשרת לא רק פלטפורמה לגילוי מרובה אלא גם שילוב של גלאים הרסניים ולא הרסניים כאחד, ללא צינורות נפח מת נוספים, בו זמנית. ניתן לכוונן את כמות הזרימה דרך כל יציאה גם באמצעות ניהול לחץ כך שתתאים לדרישות של גלאים ספציפיים. כדי להשיג זיהוי מרובה באמצעות עמודת PSF ישנם מספר פרמטרים הניתנים לשליטה כדי להבטיח ביצועי הפרדה אופטימליים ואיכות התוצאות; כלומר מידות צינור לכל יציאה, בחירת יציאה לכל סוג גלאי והתאמת זרימה. פרוטוקול זה נועד להראות כיצד להשתמש ולכוונן עמודת PSF המתפקדת במצב זיהוי מרובה.

ניתוח HPLC מרובב בוצע באמצעות טור AFT במצב כוחות הביטחון הפלסטיניים (איור 1) ולהגדיר כפי שמודגם באיור 2. סוג זה של התקנה אפשר קפה מדגם להיות מנותח בו זמנית באמצעות UV-Vis, DPPH • ו- MS בסך הכל רוזן יון מצב (TIC). התרכובות של קפה המדגם שהגיב לDPPH • אז יכולות להיות מתאימות בקלות עד UV-Vis וMS - תגובות TIC מבוססות על היישור של זמן שמירה כפי שמודגמות באיור 3, מאז chromatograms נרשמו בו זמנית. איפה תגובה חיובית ר...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להפעלה וכוונון של עמודות כרומטוגרפיה של זרימה מקוטעת מקבילה כדי לאפשר זיהוי מרובה.

כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור Multiplexed

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

המטרה הכללית של הליך HPLC זה היא לכייל עמודת זרימה מקבילית מקטעת כדי לאפשר זיהוי רב-ערוצי (multiplex). שיטה זו עונה על שאלות מפתח בתחומי הבריאות והרווחה, מדעי הסביבה, פורנזיקה וכל תחום הדורש ניתוח של דגימות מורכבות, כגון גילוי ביולוגי. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מקיף של הדגימה, ובו בזמן מספקת מידע על התכונות הכימיות והביואקטיביות של חומרים בתערובות מורכבות.פרוטוקולי הגילוי הרב-ערוציים מאפשרים גם ניתוח מהיר. שיטה זו מאפשרת פיתוח של אסטרטגיות להגדרת הטביעה הכימית של תערובות מורכבות, כגון קפה ויין, ובכך היא מאפשרת ליצרנים להבחין בין המוצרים שלהם לבין זני זיוף זולים. בתחילה, הדבר עשוי להיראות לא שגרתי בכך שלא שולחים את הדגימה כולה לגלאי אחד בלבד לצורך ניתוח מדויק.עם זאת, ריכוז האנליט בתוך כל זרם זרימה גבוה יותר מאשר בזרם הזרימה הכולל של עמודה קונבנציונלית. לתחילת הדברים, הגדירו את מכשיר ה-HPLC עם 100%UE water ומתנול טהור עבור הפאזות הניידות A ו-B בהתאמה. אם נעשה שימוש בגלאי MS, הוסיפו 0.1%formic acid לשתי הפאזות הניידות, ולאחר מכן בצעו פירג' (purge) למשאבות ה-HPLC בהתאם להוראות היצרן.יש להרכיב את גלאי ה-MS, ה-UV, ה-VS וה-DPPH בהתאם להוראות היצרן. יש לוודא כי הרכיבים מסודרים בצורה נכונה, כך שנפח המת (dead volume) בקווי הגילוי יהיה מינימלי.לאחר מכן, הגדירו את אורך הגל של גלאי ה-UV VISTA לאור

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

שיטה אוטומטית לזיהוי מתאימים הידרופובי כרומטוגרפיה אינטראקציה (היק) התקשורת כדי לשמש בתהליך של טיהור חלבון מוצג. השיטה משתמשת בינוני הלחץ כרומטוגרפיה נוזלית כולל מערכת מיזוג חיץ אוטומטי, הזרקת לולאה דגימה דינמי, בחירת העמודה רצף, רב גל ניתוח, חלק פיצול אוסף eluate.

הידרופובי אוטומטי אינטראקציה כרומטוגרפיה טור בחירה עבור שימוש ב טיהור חלבון

מוצג פרוטוקול לשימוש בעמודות כרומטוגרפיה נוזלית בעלות ביצועים גבוהים של זרימת תגובה לשיטות המשתמשות בנגזרת פוסט עמודה (PCD).

הודעת הטור derivatization שימוש ביצועים גבוהים תזרים תגובת עמודות נוזלת כרומטוגרפיה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להפעלה ואופטימיזציה של עמודת טכנולוגיית הזרימה הפעילה (AFT) במצב זרימת וילון (CF) לביצועי הפרדה משופרים.

הרמת מסך טור זרימה: אופטימיזציה של יעילות ורגישות

מוצג פרוטוקול מהיר לעיכול פרוטאוליטי עם מיקרו-ריאקטור טריפטי שנבנה בזרימה פנימית יחד עם ספקטרומטר מסה של יינון אלקטרו-ספריי (ESI). מתוארים ייצור המיקרו-כור, מערך הניסוי ותהליך רכישת הנתונים.

עיבוד אנזימתי תענית חלבונים עבור איתור MS עם microreactor זרימה דרך

זיהוי פלואורסצנטי רב צבעוני במיקרופלואידיקה טיפתית כולל בדרך כלל מערכות גילוי מבוססות מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי מגושמות ומורכבות. כאן אנו מתארים ערכת זיהוי רב-צבעונית קומפקטית ומודולרית המשתמשת במערך של סיבים אופטיים כדי לקודד זמנית נתונים רב-צבעוניים שנאספו על ידי גלאי פוטו יחיד.

ססגוניות קרינת איתור עבור מיקרופלואידיקה אגל באמצעות סיבים אופטיים

אנו מדגימים פלטפורמת microfluidic עם רשת האלקטרודה משטח משולבת המשלב חישת דופק התנגדות (RPS) עם הגישה מרובה חלוקת קוד (CDMA), לבצע ריבוב איתור אומדת חלקיקי ערוצי microfluidic מרובים.

פלטפורמת microfluidic עם איתור Multiplexed אלקטרוני למערכות מעקב מרחבית של חלקיקים

פרוטוקול זה מתאר את היישום של זמן א-סימטרי איתור למתוח מערכת מיקרוסקופית אופטית עבור הדמיה תא בודד זרימה microfluidic מהירים ויישומים שלה cytometry זרימת הדמיה.

Microfluidic דימות זרימת cytometry ידי אסימטרית איתור זמן למתוח אופטי מיקרוסקופית (ATOM)

פרוטוקול זה מדגים תפוקה גבוהה, עמיד ופשוט מולקולה בודדת מתיחה-זרימה assay עבור לומדת מימדי דיפוזיה (1 ד) של מולקולות לאורך הדנ א.

מולקולה בודדת פשוטה, חסון וגבוה התפוקה זרימה מתיחה Assay יישום לימוד התחבורה של מולקולות לאורך הדנ א

מפורט במסמך זה הם הפרוטוקולים מבצע והרכבה של פלטפורמה ההקרנה microfluidic מודולרי עבור האפיון שיטתית של מוליכים למחצה colloidal nanocrystal syntheses. דרך מערכת מתכוונן במלואו הסדרים, אוסף ספקטרה יעילים ביותר עשוי להתבצע על פני 4 סדרי גודל סולמות זמן התגובה בתוך מרחב הדגימה שבשליטת העברת מסה.

טכנולוגיה Microfluidic מודולרי עבור מחקרים שיטתיים של מוליכים למחצה Colloidal Nanocrystals

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור הליך אריזת העמודות הנימיות של FlashPack הממוטב. יישום פרוטוקול ממוטב להתקנת פצצת לחץ נפוצה של 100 ברים מאפשר אריזה וייצור מהירים פי 10 של עמודות נימיות ארוכות בעלות ביצועים גבוהים במיוחד.

ייצור עמודות נימי פשוטות עם ביצועים גבוהים במיוחד עם גישת FlashPack

ביוכימיה חזותית של מולקולה בודדת הנחקרת באמצעות תאים מיקרופלואידיים מקלה מאוד באמצעות קנה זכוכית, מזרקים אטומים לגז, חיבורים יציבים של צינורות לתאי זרימה, וחיסול בועות על ידי הצבת שסתומי מיתוג בין המזרקים והצינורות. הפרוטוקול מתאר מלכודות אופטיות כפולות המאפשרות הדמיה של עסקאות דנ"א ואינטראקציות בין-מולקולריות.

שימוש בפינצטה אופטית כפולה ומיקרופלואידיקה למחקרי מולקולות בודדות

למד כיצד לכוון טור HPLC עם זרימה מקוטעת מקבילה לאיתור מרובה. שיטה זו מאפשרת ניתוח מהיר של דגימות מורכבות כמו קפה ויין לזיהוי טביעת אצבע כימית ולהבחנה בין מוצרים אותנטיים לזיופים.

כוונון טור מקוטע זרימה מקבילה והפעלת איתור Multiplexed

גלה סרטונים נוספים