Name: Protocol עבור הבחנה של תאים גזעיים Pluripotent Indoced האדם לתוך תרבויות מעורבות של נוירונים וגליה עבור בדיקה נוירוטוקסיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 2 s
Description: חקור שיטה להבחנת תאי גזע pluripotent אנושיים לתרבות מעורבת של נוירונים ותאי גליה. פרוטוקול זה מאפשר בדיקת נוירוטוקסיות של תרופות וכימיקלים במודל אנושי תלת-ממדי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לד&quot;ר מארק Peschanski (I-Stem, Évry, צרפת), על מתן IMR90-hiPSCs; ד&quot;ר ג&#39;ובאנה לזארי וד&quot;ר סילביה קולוני (Avantea srl, קרמונה, איטליה); ד&quot;ר סימון האפט (אוניברסיטת בון, גרמניה); ד&quot;ר Tiziana Santini (המכון האיטלקי לטכנולוגיה, רומא), למתן ייעוץ על הערכת מכתים immunofluorescence; ד&quot;ר בנדטה אקורדי, ד&quot;ר אלנה רמפאצו וד&quot;ר לוקה פרסאנו (אוניברסיטת פאדובה, איטליה), על תרומתם לניתוח ה- RPPA ולאימות הנוגדן. מימון: עבודה זו נתמכה על ידי האיחוד האירופי במימון פרויקט &quot;SCR &amp; Tox&quot; (הסכם מענק מס &#39;266753).

<ol><li>NRC. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Toxicity+Testing+in+the+21st+Century%3A+A+Vision+and+a+Strategy%22">Toxicity Testing in the 21st Century: A Vision and a Strategy</a>. , National Academy Press. Washington, DC. (2007).</li>
<li>Drews, K., Jozefczuk, J., Prigione, A., Adjaye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+induced+pluripotent+stem+cells--from+mechanisms+to+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Human induced pluripotent stem cells--from mechanisms to clinical applications.</a> J Mol Med (Berl). 90 (7), 735-745 (2012).</li>
<li>Ho, P. J., Yen, M. L., Yet, S. F., Yen, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+of+human+pluripotent+stem+cells%3A+possibilities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Current applications of human pluripotent stem cells: possibilities and challenges.</a> Cell Transplant. 21 (5), 801-814 (2012).</li>
<li>Krueger, W. H., Swanson, L. C., Tanasijevic, B., Rasmussen, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+and+artificial+routes+to+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Natural and artificial routes to pluripotency.</a> Int J Dev Biol. 54 (11-12), 1545-1564 (2010).</li>
<li>Pistollato, F., Bremer-Hoffmann, S., Healy, L., Young, L., Stacey, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+pluripotent+stem+cell+cultures+for+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Metab+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Standardization of pluripotent stem cell cultures for toxicity testing.</a> Expert Opin Drug Metab Toxicol. 8 (2), 239-257 (2012).</li>
<li>Pistollato, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+pluripotent+stem+cell+derived+neuronal+model+to+identify+chemically+induced+pathway+perturbations+in+relation+to+neurotoxicity%3A+effects+of+CREB+pathway+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Development of a pluripotent stem cell derived neuronal model to identify chemically induced pathway perturbations in relation to neurotoxicity: effects of CREB pathway inhibition.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 280 (2), 378-388 (2014).</li>
<li>Zagoura, D., Canovas-Jorda, D., Pistollato, F., Bremer-Hoffmann, S., Bal-Price, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+rotenone-induced+activation+of+the+Nrf2+pathway+in+a+neuronal+model+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the rotenone-induced activation of the Nrf2 pathway in a neuronal model derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Neurochem Int. , (2016).</li>
<li>Standard operating procedure for differentiation of human induced pluripotent stem cells into post-mitotic neurons and glial cells. EURL ECVAM. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-differentiation-of-human-induced-pluripotent-stem-cells-into-post-mitotic-neurons-and-glial-cells-%28mixed-culture%29-protocol-no.-165/key/p_1570">https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-differentiation-of-human-induced-pluripotent-stem-cells-into-post-mitotic-neurons-and-glial-cells-%28mixed-culture%29-protocol-no.-165/key/p_1570</a> (2016).</li>
<li>Standard operating procedure for expansion of rosette-derived neural stem cells. EURL ECVAM. , Available from:
	 <a target="_blank" href="https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-expansion-of-rosette-derived-neural-stem-cells-protocol-no.-166/key/p_1571">https://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/methods-and-protocols/protocol/standard-operating-procedure-for-expansion-of-rosette-derived-neural-stem-cells-protocol-no.-166/key/p_1571</a> (2016).</li>
<li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C%28T%29+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).</li>
<li>Brien, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+concordance+of+drug-induced+human+hepatotoxicity+with+in+vitro+cytotoxicity+measured+in+a+novel+cell-based+model+using+high+content+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Toxicol%22%5BJournal%5D)">High concordance of drug-induced human hepatotoxicity with in vitro cytotoxicity measured in a novel cell-based model using high content screening.</a> Arch Toxicol. 80 (9), 580-604 (2006).</li>
<li>Accordi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+protein+network+activation+mapping+reveals+new+potential+molecular+drug+targets+for+poor+prognosis+pediatric+BCP-ALL%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional protein network activation mapping reveals new potential molecular drug targets for poor prognosis pediatric BCP-ALL.</a> PLoS One. 5 (10), e13552(2010).</li>
<li>Vassallo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multi-laboratory+evaluation+of+microelectrode+array-based+measurements+of+neural+network+activity+for+acute+neurotoxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">A multi-laboratory evaluation of microelectrode array-based measurements of neural network activity for acute neurotoxicity testing.</a> Neurotoxicology. , (2016).</li>
<li>Shamblott, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+germ+cell+derivatives+express+a+broad+range+of+developmentally+distinct+markers+and+proliferate+extensively+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Human embryonic germ cell derivatives express a broad range of developmentally distinct markers and proliferate extensively in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (1), 113-118 (2001).</li>
<li>Bryan, H. K., Olayanju, A., Goldring, C. E., Park, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nrf2+cell+defence+pathway%3A+Keap1-dependent+and+-independent+mechanisms+of+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The Nrf2 cell defence pathway: Keap1-dependent and -independent mechanisms of regulation.</a> Biochem Pharmacol. 85 (6), 705-717 (2013).</li>
<li>Tufekci, K. U., Civi Bayin, E., Genc, S., Genc, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nrf2%2FARE+Pathway%3A+A+Promising+Target+to+Counteract+Mitochondrial+Dysfunction+in+Parkinson%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">The Nrf2/ARE Pathway: A Promising Target to Counteract Mitochondrial Dysfunction in Parkinson's Disease.</a> Parkinsons Dis. , 314082(2011).</li>
<li>Kovac, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nrf2+regulates+ROS+production+by+mitochondria+and+NADPH+oxidase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Nrf2 regulates ROS production by mitochondria and NADPH oxidase.</a> Biochim Biophys Acta. 1850 (4), 794-801 (2015).</li>
<li>Lee, J. M., Shih, A. Y., Murphy, T. H., Johnson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF-E2-related+factor-2+mediates+neuroprotection+against+mitochondrial+complex+I+inhibitors+and+increased+concentrations+of+intracellular+calcium+in+primary+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">NF-E2-related factor-2 mediates neuroprotection against mitochondrial complex I inhibitors and increased concentrations of intracellular calcium in primary cortical neurons.</a> J Biol Chem. 278 (39), 37948-37956 (2003).</li>
<li>Itoh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Nrf2%2Fsmall+Maf+heterodimer+mediates+the+induction+of+phase+II+detoxifying+enzyme+genes+through+antioxidant+response+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">An Nrf2/small Maf heterodimer mediates the induction of phase II detoxifying enzyme genes through antioxidant response elements.</a> Biochem Biophys Res Commun. 236 (2), 313-322 (1997).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nrf2%2FARE+pathway+activation%2C+HO-1+and+NQO1+induction+by+polychlorinated+biphenyl+quinone+is+associated+with+reactive+oxygen+species+and+PI3K%2FAKT+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol+Interact%22%5BJournal%5D)">Nrf2/ARE pathway activation, HO-1 and NQO1 induction by polychlorinated biphenyl quinone is associated with reactive oxygen species and PI3K/AKT signaling.</a> Chem Biol Interact. , 56-67 (2014).</li>
<li>Cannon, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+reproducible+rotenone+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">A highly reproducible rotenone model of Parkinson's disease.</a> Neurobiol Dis. 34 (2), 279-290 (2009).</li>
<li>Sherer, T. B., Kim, J. H., Betarbet, R., Greenamyre, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+rotenone+exposure+causes+highly+selective+dopaminergic+degeneration+and+alpha-synuclein+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous rotenone exposure causes highly selective dopaminergic degeneration and alpha-synuclein aggregation.</a> Exp Neurol. 179 (1), 9-16 (2003).</li>
<li>Testa, C. M., Sherer, T. B., Greenamyre, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotenone+induces+oxidative+stress+and+dopaminergic+neuron+damage+in+organotypic+substantia+nigra+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Mol+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Rotenone induces oxidative stress and dopaminergic neuron damage in organotypic substantia nigra cultures.</a> Brain Res Mol Brain Res. 134 (1), 109-118 (2005).</li>
<li>Tukey and Dunnett methods. GraphPad. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.graphpad.com/guides/prism/7/statistics/index.htm?stat_the_methods_of_tukey_and_dunne.htm">http://www.graphpad.com/guides/prism/7/statistics/index.htm?stat_the_methods_of_tukey_and_dunne.htm</a> (2017).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+induction+of+neural+conversion+in+human+ESCs+and+human+induced+pluripotent+stem+cells+with+a+single+chemical+inhibitor+of+transforming+growth+factor+beta+superfamily+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">High-efficiency induction of neural conversion in human ESCs and human induced pluripotent stem cells with a single chemical inhibitor of transforming growth factor beta superfamily receptors.</a> Stem Cells. 28 (10), 1741-1750 (2010).</li>
<li>Topol, A., Tran, N. N., Brennand, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Guide+to+Generating+and+Using+hiPSC+Derived+NPCs+for+the+Study+of+Neurological+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Guide to Generating and Using hiPSC Derived NPCs for the Study of Neurological Diseases.</a> J Vis Exp. (96), e52495(2015).</li>
<li>Jiang, Y., Zhang, M. J., Hu, B. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+functional+neurons+and+glia+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Specification of functional neurons and glia from human pluripotent stem cells.</a> Protein Cell. 3 (11), 818-825 (2012).</li>
<li>Parsons, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+derivation+of+human+neuronal+progenitors+and+neurons+from+pluripotent+human+embryonic+stem+cells+with+small+molecule+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient derivation of human neuronal progenitors and neurons from pluripotent human embryonic stem cells with small molecule induction.</a> J Vis Exp. (56), e3273(2011).</li>
<li>Shi, Y., Kirwan, P., Livesey, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+cerebral+cortex+neurons+and+neural+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells to cerebral cortex neurons and neural networks.</a> Nat Protoc. 7 (10), 1836-1846 (2012).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+region-specific+neurons+including+forebrain+glutamatergic+neurons+from+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Specification of region-specific neurons including forebrain glutamatergic neurons from human induced pluripotent stem cells.</a> PLoS One. 5 (7), e11853(2010).</li>
<li>Zeng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+human+dopaminergic+neurons+derived+from+embryonic+stem+cells%3A+MPP%2B+toxicity+and+GDNF+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of human dopaminergic neurons derived from embryonic stem cells: MPP+ toxicity and GDNF neuroprotection.</a> Neuropsychopharmacology. 31 (12), 2708-2715 (2006).</li>
<li>Paşca, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cortical+neurons+and+astrocytes+from+human+pluripotent+stem+cells+in+3D+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional cortical neurons and astrocytes from human pluripotent stem cells in 3D culture.</a> Nat Methods. 12 (7), 671-678 (2015).</li>
<li>Almeida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+key+pathological+features+of+frontotemporal+dementia+with+C9ORF72+repeat+expansion+in+iPSC-derived+human+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Modeling key pathological features of frontotemporal dementia with C9ORF72 repeat expansion in iPSC-derived human neurons.</a> Acta Neuropathol. 126 (3), 385-399 (2013).</li>
<li>Urbán, N., Guillemot, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+embryonic+and+adult+brain%3A+same+regulators%2C+different+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the embryonic and adult brain: same regulators, different roles.</a> Front Cell Neurosci. 8, 396(2014).</li>
<li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annu Rev Neurosci. 32, 149-184 (2009).</li>
<li>Krencik, R., Weick, J. P., Liu, Y., Zhang, Z. J., Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specification+of+transplantable+astroglial+subtypes+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Specification of transplantable astroglial subtypes from human pluripotent stem cells.</a> Nat Biotechnol. 29 (6), 528-534 (2011).</li>
<li>Krencik, R., Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+functional+astroglial+subtypes+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of functional astroglial subtypes from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 6 (11), 1710-1717 (2011).</li>
<li>Nguyen, T., Nioi, P., Pickett, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Nrf2-antioxidant+response+element+signaling+pathway+and+its+activation+by+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The Nrf2-antioxidant response element signaling pathway and its activation by oxidative stress.</a> J Biol Chem. 284 (20), 13291-13295 (2009).</li>
<li>Bal-Price, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+adverse+outcome+pathways+relevant+to+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Putative adverse outcome pathways relevant to neurotoxicity.</a> Crit Rev Toxicol. 45 (1), 83-91 (2015).</li>
<li>Cabezas, R., El-Bacha, R. S., Gonzalez, J., Barreto, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+functions+in+astrocytes%3A+neuroprotective+implications+from+oxidative+damage+by+rotenone%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial functions in astrocytes: neuroprotective implications from oxidative damage by rotenone.</a> Neurosci Res. 74 (2), 80-90 (2012).</li>
<li>Swarnkar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+activation%3A+a+key+step+in+rotenone+induced+cytotoxicity+and+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Astrocyte activation: a key step in rotenone induced cytotoxicity and DNA damage.</a> Neurochem Res. 37 (10), 2178-2189 (2012).</li>
<li>Canovas-Jorda, D., Louisse, J., Pistollato, F., Zagoura, D., Bremer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+toxicology%3A+the+role+of+stem+cells+in+the+development+of+chronic+toxicities%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Metab+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Regenerative toxicology: the role of stem cells in the development of chronic toxicities.</a> Expert Opin Drug Metab Toxicol. 10 (1), 39-55 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

עבודה זו מתארת ​​פרוטוקול חזק ומהיר יחסית עבור בידול של IMR90-hiPSCs לתוך נוירונים פוסט מיטוטי ותאי גלייה. פורסמו בעבר פרוטוקולים בידול נוירונים המבוססים על hESCs ו hiPSCs בדרך כלל תשואה אחוזים גבוהים של מבשרי עצבים 25 , 26 ו מספר משמעותי של תאים היעד העצבית 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 . באופן אנלוגי, פרוטוקול ההבחנה המתואר כאן מתאים ליצירת תרבויות הטרוגניות של תאים עצביים של GABAergic, glutamatergic ו- dopaminergic, יחד עם גליה ושיעור דיסקרטי של תאי Nestin + . נוכחות של תאים עצביים גלוטמטריים (~ 35-42%) ו GABAergic (~ 15-20%) עצביים עולה כילתרבות זו יש תכונות של המוח הקדמי, כמו קליפת המוח, ונוכחות של מספר דיסקרטי של נוירונים דופאמינרגיים (~ 13-20%) עשויה גם להצביע על סגוליות של המוח התיכון. בנוסף, הקביעות של אחוז קטן של תאים + nestin עשוי להוכיח מתאים לחקר neurogenesis ואת ההשפעות האפשריות של כימיקלים על NSCs, אשר מוגבלים בעיקר הן את ההיפוקמפוס ואת אזור subventricular (SVZ) של forebrain 34 . ניתוח נוסף immunocytochemical ו ביטוי גנים יעזור להגדיר טוב יותר את הספציפיות האזורית של נגזרות תא מובחן. שני הצעדים הקריטיים ביותר בפרוטוקול ההבחנה המתואר במסמך זה הם: (i) חיתוך מושבות hiPSC לשברים הומוגניים (קריטיים לדור EBS עם גודל הומוגני) ו- (ii) חיתוך מבנים נוירו-אוקטרומלים (שושנות) ) עבור בידול NSC, הדורש מיומנות ידנית משמעותיתואת דיוק כדי למנוע איסוף mesodermal ו תאים endodermal שעלולים להפחית את הפרופורציות של נוירונים ותאי גלייה שהושגו על בידול. זה חיוני כדי לאפיין את פנוטיפים של התאים במהלך ההתרחבות (כמו מושבות לא מובחנות או NSCs) ובמהלך כל הצעדים בידול. בפרט, הגן פרופילים ביטוי חלבון של נגזרות תא עצבי / גליה צריך להראות upregulation והפעלה של מסלולי איתות נוירון הקשורים, ואילו הביטוי של סמנים pluripotency צריך להיות מופחת. הדור של EBS ונגיפים neuroectodermal (רוזטות) יכול להיות מאתגר באופן ידני נוטה השתנות. מסיבה זו, פיתחנו פרוטוקול להרחבת NSCs נגזר רוזטה והבחנה נוספת שלהם לתוך תאים עצביים / גליה. המגבלות האפשריות של פרוטוקול זה בידול הם בעיקר (i) אחוז נמוך יחסית של דנגזרים גליליים שונים ו - (ii) היעדר פונקציות רשת נוירונים בוגרים (כפי שמוצג על ידי חוסר התפרצויות). יתר על כן, subpopulations ספציפיים של astrocytes יכול לתפקד כמו אבות ראשוניים או NSCs 35 . בעוד Nestin / GFAP תאים חיוביים פעמיים לא נצפו בתרבות תאים מובחנת זו (נתונים לא מוצג), הוא שיערו כי GFAP + תאים אלה תרבויות מעורבות הם אבות astrocytic ו astrocytes. סביר כי על ידי הארכת הזמן של בידול, מספר האסטרוציטים עשוי להגדיל, המורפולוגיה שלהם עשוי להיות יותר בוגרת, כפי שכבר צוין על ידי עבודות קודמות של הקבוצה של ג &#39;אנג 36 , 37 . בפרדיגמת בדיקת הרעילות החדשה, הידע על הפרעות ביולוגיות של נתיבים ביולוגיים הוא בעל חשיבות עליונה בהערכת מצוקות כימיות. לכן, במבחנה מערכות הבדיקה צריכה להיות מסוגלתמתייחסים לתופעות שליליות להפרעות של מסלולי איתות, בהתאם למושג של מסלול התוצאה השלילית (AOP). כמו הוכחה של קונספט, rotenone ניתן להשתמש כדי להעריך את ההפעלה של נתיב Nrf2, אשר מעורב בהגנה הסלולרית נגד מתח חמצוני או electrophilic 38 , ואת הלחץ החמצוני הוא אירוע מפתח חשוב משותף ב- AOPs שונים הרלוונטיים נוירוטוקסיות התפתחותית ומבוגרת 39 . Rotenone צריך לעורר את ההפעלה של נתיב Nrf2, אשר ניתן להוכיח על ידי Nrf2 חלבון טרנסלוקציה גרעינית ביטוי מוגבר של אנזימים היעד Nrf2, כולל NQO1 ו SRXN1. נמצא כי rotenone גורם לגידול תלוי מינון של רמות חלבון GFAP, המעיד על הפעלת אסטרוציטים 40 , 41 . Rotenone גם מקטין את מספר תאים dopaminergic (TH + ), אשר עולה בקנה אחד עם previOus במבחנה ובבדיקות vivo המציגות רוטנון תלוי במוות דופאמינרגי, שכן סוג זה של נוירון רגיש במיוחד למתח חמצוני 21 , 22 , 23 . לסיכום, זה hiPSC הנגזרות נוירונים ותאי גלייה התרבות מודל הוא כלי רב ערך כדי להעריך את ההשפעות הנוירוטוקסיות של כימיקלים המעוררים מתח חמצוני וכתוצאה מכך הפעלה נתיב Nrf2. כמו פרוטוקול הבחנה זה מאפשר את הדור של תרבויות מעורבות של תאים עצביים (GABAergic, dopaminergic, ו נוירונים glutamatergic) ו astrocytes, זה עשוי להוכיח מתאים ללמוד את crosstalk בין נוירונים וגליה בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים, כגון מחלות נוירודגנרטיבית ( למשל, מחלת פרקינסון). יתר על כן, הנוכחות של חלק משמעותי של NSCs עשוי לעזור להעריך את ההשפעות האפשריות של כימיקלים על פרווה עצביתEnitors, אשר ידוע להיות היעד העיקרי של מוטציות הנגרמות כימית או זיהומים ויראליים 42 .

המועצה הלאומית למחקר של ארה&quot;ב דו&quot;ח 1 חזה חדש בדיקת רעילות פרדיגמה שבה בדיקות רעילות רגולטורית יועברו מתוך גישה להסתמך על שינויים פנוטיפי שנצפה בבעלי חיים לגישה המתמקדת מבחני מבחנה מכניסטית באמצעות תאים אנושיים. נגזרות של תאי גזע Pluripotent (PSC) עשויות לייצג חלופות למודלי תאים סרטניים, שכן התאים המתקבלים עשויים להיות דומים יותר לתנאים הפיזיולוגיים של רקמות האדם ולספק כלים רלוונטיים יותר לחקר השפעות שליליות הנגרמות על ידי כימי. שני סוגים עיקריים של תרבויות PSC כי הם המבטיחים ביותר לבדיקת רעילות הם תאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) ו האדם המושרה בתאי גזע pluripotent (hiPSCs), אשר נמצאים בשימוש נרחב בתחומי מחקר בסיסי רפואה משובי 2 , 3 . מומחיות זו יכולה כעת להיות רתום לפיתוח של סוג חדש של toxicoloGical במבחנה בדיקות שמטרתן לזהות את המסלולים הפיזיולוגיים מוטרד מעורב עם התפתחות של תופעות לוואי in vivo . עם זאת, שיטות בדיקה עבור הערכות בטיחות רגולטורית המבוססת על hESCs יהיה סביר להתקבל על ידי כל המדינות החברות באיחוד האירופי ועל ידי מדינות ברחבי העולם בשל חששות אתיים אפשריים ומדיניות החקיקה הלאומית מגוונים המסדיר את השימוש בתאים הנגזרים העובר. HiPSCs לשתף מאפיינים דומים hESCs 4 , 5 ו להחזיק פוטנציאל גדול לשיטות חוץ גופית , הן לזיהוי מטרות טיפוליות, כמו גם עבור הערכות בטיחות. בנוסף, הטכנולוגיה hiPSC מפחית את האילוצים של מאגר התורם מוגבל ואת החששות האתיים הקשורים תאים הנגזרות העובר. האתגר העיקרי עבור hiPSCs היא ההוכחה כי תאים אלה יכולים reproducibly ליצור מגוון משמעותי של נגזרות תאים הרלוונטיים מבחינה רעילה,עם מאפיינים ותגובות אופייניות לרקמות אנושיות. רמות מוגדרות מראש של סמנים נבחרים משמשים בדרך כלל לאפיון אוכלוסיות תאים לאחר תהליך ההבחנה ולספק תובנות לגבי היציבות של תהליך ההבחנה. עבודות קודמות העריכו התאמה של hiPSCs ליצירת תרבויות מעורבות של תאים עצביים ותאי גלייה, ולהעריך את ההשפעות של רוטנון, מעכב של המורכבות הנשימתיות המיטוכונדריאליות I, בהפעלת נתיב Nrf2, וסת רגולציה של מנגנוני הגנה נוגדי חמצון סוגי תאים רבים 6 , 7 . עבודה זו מתארת ​​פרוטוקול המשמש להבחנה של hiPSCs לתוך תרבויות מעורבות נוירונים וגליאלי, מתן פרטים על מסלולי איתות (רמת גן וחלבון) המופעלים על בידול נוירוני / גליאלי. בנוסף, העבודה מראה נציג תוצאות המדגים כיצד זהHiPSC הנגזרות תאים תאיים נוירונים ותאי גלייה ניתן להשתמש כדי להעריך Nrf2 הפעלת איתות המושרה על ידי טיפול אקוטי (24 שעות) עם rotenone, המאפשר הערכה של אינדוקציה מתח חמצוני. IMR90 fibroblasts היו מתוכנתים לתוך hiPSCs ב I-Stem (צרפת) על ידי התמרה ויראלי של 2 גורמי שעתוק (Oct4 ו Sox2) באמצעות וקטורים pMIG 6 . מודלים hiPSC אנלוגי יכול להיות מיושם גם. הפרוטוקולים המתוארים להלן מסכמים את כל השלבים של ההבחנה בין hiPSCs לתאי גזע עצביים (NSCs) ובין תרבויות מעורבות של נוירונים פוסט-מיטוטיים ותאי גלייה (שלבים 1 ו -2, ראו גם את האתר של EURL ECVAM DBALM לתיאור מפורט של הפרוטוקול) 8 . פרוטוקול נוסף לבידוד, הרחבה, cryopreservation, והבחנה נוספת של NSCs לתוך נוירונים מעורבים ותאי גלייה מפורטת בשלבים 3 ו 4 (גם מתייחסים EURL ECVAM DBALM אנחנוBsite לתיאור מפורט של פרוטוקול זה) 9 . שלב 5 מתאר את הניתוחים שניתן לעשות כדי להעריך את הזהות פנוטיפי של התאים במהלך שלבים שונים של מחויבות בידול.

protocol עבור הבחנה של תאים גזעיים pluripotent indoced האדם לתוך תרבויות מעורבות של נוירונים וגליה עבור בדיקה נוירוטוקסיות

Protocol for the Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells into Mixed Cultures of Neurons and Glia for Neurotoxicity Testing

האדם בתאי גזע pluripotent יכול להבדיל סוגים שונים של תאים שניתן ליישם את האדם מבוסס מבחני רעילות מבחנה . אחד היתרונות העיקריים הוא שתכנות מחדש של תאים סומטיים לייצר תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרשים על ידי האדם (hiPSCs) נמנעים מהנושאים האתיים והחקיקתיים הנוגעים לשימוש בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC). HiPSCs ניתן להרחיב ו הבדיל ביעילות לסוגים שונים של תאים עצביים ותאי גלייה, המשמשים מערכות בדיקה לבדיקת רעילות, בפרט, לצורך הערכת מסלולים שונים המעורבים neurotoxicity. עבודה זו מתארת ​​פרוטוקול ההבחנה של hiPSCs לתוך תרבויות מעורבות של תאים עצביים ותאי גלייה. מסלולי האיתות המווסתים ו / או מופעלים על ידי הבחנה נוירונים מוגדרים. מידע זה הוא קריטי ליישום המודל התא כדי פרדיגמה חדשה בדיקת רעילות, שבו כימיקלים מוערכים על בסיס יכולתם peRturb מסלולים ביולוגיים. כהוכחה לקונספט, rotenone, מעכב של מיטוכונדריה מורכבת I, שימש כדי להעריך את ההפעלה של נתיב איתות Nrf2, רגולטור מפתח של מנגנון נוגד חמצון תגובה אלמנט - (ARE) מונע מנגנון הגנה הסלולר נגד מתח חמצוני .

האדם המושרה בתאי גזע pluripotent (hiPSCs) נחשבים כלי רב עוצמה עבור סריקה וכימיים ההקרנה ופיתוח של מודלים חדשים במבחנה לבדיקת רעילות, כולל נוירוטוקסיטי. הנה, פרוטוקול מפורט עבור ההבחנה של hiPSCs לתוך נוירונים וגליה מתואר.

Protocol עבור הבחנה של תאים גזעיים Pluripotent Indoced האדם לתוך תרבויות מעורבות של נוירונים וגליה עבור בדיקה נוירוטוקסיות

Human pluripotent stem cells can differentiate into various cell types that can be applied to human-based in vitro toxicity assays. One major advantage is ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לגרום להבחנה של תאי גזע עצביים המופקים ממושבות של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים מושריים לכדי תרביות מעורבבות של תאים עצביים וגלייאליים. מודל זה מתאים לסריקת רעילות של תרופות וחומרים כימיים. ניתן להשתמש במודל in vitro זה להערכת הפרעות הנגרמות על ידי חומרים כימיים במסלולי איתות המופעלים במהלך תהליך ההבחנה העצבית והגלייאלית.היתרון המרכזי של מערכת זו הוא השימוש במודל אנושי המופק מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים (induced pluripotent stem cells), המהווה חלופה לתאי סרטן ולתרביות ראשוניות של בעלי חיים המקובלות באופן מסורתי, ומאפשר לחקור נוירוטוקסיות באוכלוסייה מעורבת של תאי עצב ותאי גליה. הפרוצדורה תודגם על ידי פרנצ'סקה פיסטולאטו, פוסט-דוקטורנטית במעבדה שלנו, וקרוליינה נונס, סטודנטית לתואר מתקדם מהמעבדה שלנו. התחילו בהעברה (passaging) של מושבות ה-hiPSC.בעבודה תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי בהגדלה של 4X בתוך תא זרימה למינרית, השתמשו במזרק של 1 מיליליטר עם מחט במידה 30. חתכו את מושבות תאי הגזע לריבועים של כ-200 מיקרון על 200 מיקרון. חיתוך המושבות דורש מיומנות ידנית טובה כדי להשיג פרגמנטים בגודל שווה.שימוש בכלי חיתוך זמינים מסחרית עשוי לסייע. לאחר מכן, השתמשו בפיפט של 200 µL כדי להפריד את שברי המושבה מפני השטח של הצלחת, על ידי פיפטור עדין של המצע שמתחתם כדי להרים את החלקים. העבירו כ-100 שברי מושבה לצלחת 60 מ"מ מצופה במטריקס DMEM F12, מלאה בארבעה מיליליטר של מצע hiPSC מלא.לאחר מכן, דגרו את הצלחת החדשה בטמפרטורה של 37 °C וב-5% carbon dioxide. בצעו החלפה מלאה של המצע מדי יום ובחנו את מורפולוגיית המושבות באמצעות מיקרוסקופ ניגודיות פאזה (phase contrast) בהגדלות של 4X ו-10X. ביום אפס של הליך הדיפרנציאציה, רעננו את מצע ה-hiPSC על ידי הוספה של 3 mL מצע לכל צלחת פטרי בקוטר 60 mm.לאחר מכן, גזרו ונתקו את הפסיקים בגודל 200 micron כפי שבוצע קודם לכן. העבירו בעזרת פיפטה את הפסיקים המנותקים ואת המצע לשפופרת של 15 milliliter. שטפו את הצלחת עם שני milliliters של מצע hiPSC מלא ואספו את כל הפסיקים.לאחר מכן, סבבו בצנטריפוגה ב-112 times G למשך דקה אחת. עם סיום הסבב, שאבו את supernatant והשביו בעדינות את הפרגמנטים בחמישה milliliters של מצע hiPSC EB מלא. העבירו את כל הנפח לצלוחית לתרבית רקמות של 60 millimeter עם היצמדות נמוכה במיוחד (ultra low attachment).דגרו את הצלחת למשך לילה ב-37 °C ו-5% carbon dioxide. למחרת, בדקו את התאים באמצעות מיקרוסקופ הפוך. הגלילים העובריים (embryoid bodies) ביום הראשון צריכים להיראות עגולים ונפרדים זה מזה, כפי שניתן לראות כאן.לאחר מכן, העבירו באמצעות פיפטה את גופי העוברים (embryoid bodies) ואת המצע מהצלחת למבחנה של 15 מיליליטר. סובבו את גופי העוברים בצנטריפוגה ב-112 ×g למשך דקה אחת. ביום השני, שאבו תמיסת ציפוי מטריצה סטנדרטית מתוך צלחת של 60 מילימטר שהוכנה מראש, והוסיפו לצלחת חמישה מיליליטר של מצע השראה נוירו-אפיתלי מלא, או NRI.בעבודה תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי בהגדלה של 4X ובאמצעות פיפט של 200 µL, אספו כ-50 גופי Embryoid צפים והעבירו אותם לצלחית מצופה אחת. לאחר מכן, הדגירו את הצלחית בטמפרטורה של 37 °C וב-5% carbon dioxide. למחרת, ביום השלישי של הליך הדיפרנציאציה, בדקו את הצלחית תחת המיקרוסקופ בהגדלה של 10X כדי לוודא שכל גופי ה-Embryoid נצמדו.לאחר מכן, בצעו בעדינות החלפה מלאה של המצע למצע NRI מלא. החליפו את מצע ה-NRI מדי יומיים עד ליום השביעי, כאשר צריכים להיות נראים אגרגטים נוירו-אפיתליים דמויי רוזטה. ביום השביעי, ציפו פלטה בעלת 96 בארות על ידי פיפטור של 100 microliters של matrix סטנדרטי המדולל במצע תרבית לתוך כל בארה.ביום השמיני, חתכו את האגרגטים הדמויי רוזטה לחתיכות תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי בהגדלה של 10X בתנאים סטריליים. שימו לב שהרוזטות נוטות להיפרד בקלות מהצלחת בעת מגע עם המחט. במקרה זה, פרקו חלקית את הרוזטה שהופרדה בעזרת קצה המחט.אם הרוזטות נותרות מחוברות חלקית, השתמשו בפיפט של 200 microliter כדי להשלים את ניתוק מקטעי הרוזטה. חיתוך רוזטות דורש מיומנות ידנית גבוהה ודיוק כדי להימנע מחיתוך של נגזרות נוירו-אקסודרמליות (neurexidermal derivatives). לאחר מכן, אספו את מקטעי הרוזטה ואת המדיום שלהם לתוך מבחנה קונית של 15 milliliter.שטוף את הצלחת עם שני milliliters של מצע NRI כדי להשיב את כל הפסיגמנטים. לאחר מכן, סובב את פסיגמנטים הרוזטה ב-112 times G למשך דקה אחת או שתיים. לאחר שאיבת הנוזל העליון, השהה בעדינות את המשקע בתוך מיליליטר אחד של 1X DPBS חומם מראש ללא סידן ומגנזיום.שאבו בעדינות את שברי הרוזטות למעלה ולמטה כדי לגרום לפירוק חלקי שלהם. לאחר מכן, הוסיפו ארבעה מיליליטרים של מצע NRI מלא וספרו את התאים באמצעות trypan blue וסופר תאים אוטומטי. לאחר מכן, שאבו את תמיסת הציפוי של המטריצה הסטנדרטית מלוח ה-96 בארות והעבירו את התאים לבארות בצפיפות של כ-15,000 תאים לסנטימטר רבוע במצע NRI.הדגרימו את הפלטה למשך לילה בטמפרטורה של 37 °C וב-5% carbon dioxide. ביום ה-10, בצעו החלפה מלאה של המצע באמצעות מצע דיפרנציאציה נוירונלית מלא. תמונה נציגה זו מראה רוזטות לאחר 12 ימים in vitro שצבעו עבור nestin בירוק ו-beta three tubulin באדום.כאן צבועו תאים שגודלו במשך 28 ימים in vitro עבור beta three tubulin באדום ו-NF200 בירוק. תמונה מייצגת זו מראה תאים עצביים שהתמיינו מ-NSCs לאחר 21 ימים in vitro, הצבועים עבור NF200 באדום ו-tow בירוק. כאן צבועים תאי גליה מאותה תרבית עבור GFAP באדום.היסטוגרמה זו משווה את הכמות של תאים חיוביים ל-nestin, MAP two, GFAP, gamma-amino butyric acid, vesicular glutamate transporter one ו-tyrosine hydroxylase בנגזרות של IMR90 hiPSC ובתאים שהבדילו מ-NSCs שנגזרו מ-IMR90 hiPSC. תמונות ניגודיות פאזה אלו, שצולמו באמצעות עדשה של 10X, מראות תאי גזע נוירונליים בתהליך הבדלה למשך 21 ימים. באמצעות ביצוע נהלים אלו, ניתן לבצע מדדים אחרים כגון quantitative real-time PCR וניתוח רב-צדדי על מנת להעריך את הפיזיולוגיה והפנוטיפ של תאים נוירונליים וגליאליים ולהעריך את השפעתם של כימיקלים.אל תשכחו כי עבודה עם תרכובות כימיות עלולה להיות מסוכנת ביותר. לכן, יש לנקוט תמיד באמצעי הזהירות הרלוונטיים, כולל שימוש במשקפי מגן, כפפות או מסכה תחת מנדף זרימה, במיוחד בעת ביצוע טיפולים כימיים. לאחר צפייה בסרטון זה, תשיגו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשיג אוכלוסייה מעורבת ומובחנת של נוירונים ותאי גלייה החל מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושריים אנושיים, המהווים מודל מתאים, מודל in vitro, לפיתוח בדיקות נוירוטוקסיות.

protocol-for-differentiation-human-induced-pluripotent-stem-cells

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

סרטון זה מציג טכניקה לתרבית משותפת של נוירונים גלוטמטרגיים ותאי גליומה בדרגה גבוהה (pHGG) בילדים בתוך התקן מיקרופלואידי. תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם מוחדרים למערכת המיקרופלואידית ומודגרים כדי לקדם את התמיינותם לנוירונים גלוטמטרגיים בוגרים בקליפת המוח. לאחר מכן, תאי pHGG מוחדרים לתאי העצב הבוגרים, יוצרים תרבית משותפת ומאפשרים אינטראקציות בין תאי עצב ותאי pHGG.

גידול משותף של נוירונים גלוטמטרגיים ותאי גליומה בילדים ברמה גבוהה

סרטון זה מדגים את הדור של תאי אב עצביים מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים שאינם מהונדסים ומהונדסים. hPSCs מתמיינים לתאי אב עצביים באמצעות מדיום התמיינות עצבי. בעוד התמיינות מושרית בתאים שאינם טרנסגניים באמצעות מולקולות קטנות, hPSCs טרנסגניים מתמיינים על ידי הוספת אנטיביוטיקה המשרה את המקדם עבור גורם שעתוק ספציפי התמיינות עצבית.

התמיינות תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים שאינם מהונדסים לתאי אב עצביים

סרטון זה מדגים את תהליך התמיינות גופים עובריים (EBs) לצברים נוירואפיתליאליים וחלוקתם לאחר מכן לתאי עצב וגלייה. שיטה זו מאפשרת יצירה יעילה של תאי עצב וגליה במבחנה, המשמשים כמערכות בדיקה לבדיקת רעילות וכן להערכה של מסלולים שונים המעורבים ברעילות עצבית.

יצירת תאי עצב ותאי גליה מגופי עובר פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם

הפרוטוקולים מתארים שתי מערכות במבחנת רעילות התפתחותית מבחן (UKK וUKN1) המבוססים על תאי גזע עובריים אנושיים ומחקרי transcriptome. מערכות הבדיקה לחזות סיכון לרעילות התפתחותית אדם, ועשויות לתרום לצמצום ניסויים בבעלי חיים, עלויות והזמן הנדרשים לבדיקת בטיחות כימית.

תאי גזע אנושיים pluripotent בהתבסס התפתחותית רעילות מבחני לביולוגיה הקרנה ומערכות בטיחות כימית נתונים דור

מתואר פרוטוקול מותאם אישית להבדיל תאי ES של עכברים לאוכלוסיות מוגדרות של נוירונים טהורים ביותר המציגים סינפסות מתפקדות והתנהגות רשת מתעוררת. ניתוח אלקטרופיזיולוגי מדגים את אובדן ההעברה הסינפטית בעקבות חשיפה לסרוטיפים של נוירוטוקסין בוטולינום /A-/G ורעלן עצבי טטנוס.

הערכה תפקודית של ביולוגי עצבי בתרבויות ברשת של תאי גזע שמקורם בנוירונים במערכת עצבים מרכזי

קוצים הדנדריטים של נוירונים פירמידה הם האתרים של רוב סינפסות המעוררות בקליפת המוח של יונקים. שיטה זו מתארת ​​ניתוח כמו 3D של מורפולוגיות עמוד השדרה בנוירונים glutamatergic הפירמידה אנושיים בקליפת המוח שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרה.

כימות תלת ממדיות של קוצים הדנדריטים מפירמידת נוירונים שמקורם בתאי גזע האנושי המושרה pluripotent

פרוטוקול זה מתאר הליך מפורט עבור השעיית מחדש ו culturing תא גזע אנושי נגזר שהיו הבדיל בעבר מושלתי עצביים בתוך מבחנה במשך שבועות מרובים. ההליך מאפשר הדמיה מבוססי מבוסס על neurites, סינפסות, וסמנים מאוחר ביטוי עצבי בפורמט תואם עם מיקרוסקופ אור והקרנת תוכן גבוה.

לאחר בידול מחדש של תא גזע האדם Pluriפוטנטי-הנוירונים הנגזרים עבור הקרנת תוכן גבוה של Neuritogenesis והתבגרות סינפסה

הובלה מיטוכונדריאלי לקויה ומורפולוגיה מעורבים במחלות ניווניות שונות. הפרוטוקול המוצג משתמש מושרה המושרה תא גזע הנגזרת הנוירונים המוח כדי להעריך הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה ב מפרסטית תורשתית. פרוטוקול זה מאפשר אפיון של סחר מיטוכונדריאלי לאורך אקסונים וניתוח של מורפולוגיה שלהם, אשר להקל על המחקר של מחלות ניווניות.

ניתוח הובלה מיטוכונדריאלי ומורפולוגיה בתאי גזע בעלי השפעה של האדם המושרה בנוירונים

אנו מתארים שיטה להבדיל בין אסטרוציטים ונוירונים שמקורם בחוט השדרה לבין אסטרוציטים ותאי עצב שמקורם בחוט השדרה, ואת התרבות המשותפת שלהם לצורך רישום אלקטרופיזיולוגי.

הקמת פלטפורמה אלקטרופיזיולוגית למידול ALS עם אסטרוציטים ונוירונים פלוריפוטנטיים פלוריפוטנטיים אנושיים ספציפיים לאזור

מחקר זה מדווח על גישה חדשנית למדידת פרמטרים תפקודיים מיטוכונדריאליים מרובים המבוססים על ציטומטריה של זרימה והכתמה כפולה עם שני מדווחים פלואורסצנטיים או נוגדנים כדי לזהות שינויים בנפח המיטוכונדריה, פוטנציאל קרום המיטוכונדריה, רמת מיני חמצן תגובתי, הרכב שרשרת הנשימה המיטוכונדריאלית ודנ"א מיטוכונדריאלי.

ניתוח ציטומטרי של זרימה של פרמטרים מיטוכונדריאליים מרובים בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי האדם ונגזרותיהם העצביות והגליליות

חקור שיטה להבחנת תאי גזע pluripotent אנושיים לתרבות מעורבת של נוירונים ותאי גליה. פרוטוקול זה מאפשר בדיקת נוירוטוקסיות של תרופות וכימיקלים במודל אנושי תלת-ממדי.

Protocol עבור הבחנה של תאים גזעיים Pluripotent Indoced האדם לתוך תרבויות מעורבות של נוירונים וגליה עבור בדיקה נוירוטוקסיות

גלה סרטונים נוספים