זיהוי של תרופות בסביבה המימית באמצעות HPLC-ESI-Q-תוף-MS וחיסול של אריתרומיצין דרך צילום-Induced השפלה

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בהגנה על הסביבה, כגון מודעות לאנטיביוטיקה בסביבה הימית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יכולה לזהות מזהמים פרמצבטיים בריכוזים נמוכים מאוד ולזהות אותם בו זמנית. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי תרופות והשפעת שפכים ומי נהרות, ניתן ליישם אותה גם על מערכות אחרות, כגון חומרי הדברה או חומרים דמויי הורמונים בסביבה המימית.

כדי להתחיל בהליך זה, אספו כליטר מים להכנת הדגימות. סנן את הדגימה מעל מסנן פס כחול כדי להסיר חלקיקי מסלול. לאחר מכן, הוסף שלושה מיליליטר מתנול למחסנית מיצוי הפאזה המוצקה כדי לאזן אותה.

המתן עד שהמתנול יעזוב את המחסנית, ולאחר מכן הוסף שלושה מיליליטר מים טהורים במיוחד. לאחר שהמים עזבו את המחסנית, יש למרוח את המסנן ולהשתמש במשאבת דיאפרגמה, או בוואקום מתון אחר, כדי להגביר את מהירות הזרימה. אז ריכוז מוקדם הוא מאוד חשוב.

הקפד להשתמש במחסנית חילוץ פאזה מוצקה עם הפאזה המוצקה הנכונה. שוטפים את הדגימה בשלושה מיליליטר מים טהורים במיוחד. לאחר מכן השתמש בשלושה מיליליטר אתנול כדי לסלק את האנליטים מהסורבט של המחסנית.

בעזרת מאייד סיבובי יש לרכז ולייבש את האנליטים המנופחים. ממיסים את השאריות המתקבלות במיליליטר אחד של מים טהורים במיוחד. לאחר מכן, סנן את התמיסה דרך פילטר מזרק.

אחסן אותם בבקבוקון עד שהם מוכנים לבצע ניתוח לא ממוקד על ידי HPLC-ESI-QTOF-MS. כדי להתחיל בניסויי הקרנת UV, יש להמיס את התרכובת האנטיביוטית המעניינת במים אולטרה-טהורים כדי להגיע לריכוז סופי של 20 מיליגרם לליטר. העבר 750 מיליליטר מתמיסה זו לכור הפוטו-ריאקטור של ליטר אחד.

לאחר מכן, הוסף מערבל מגנטי והכניס מנורת UV של 15 וואט לכור. התחל לערבב ב -500 סל"ד. בעזרת תוספת טיפתית של חומצה הידרוכלורית או אמוניה, התאם את ה-pH לערך הרצוי.

השתמש במזרק כדי להעביר שני מיליליטר מתמיסת התגובה לבקבוקון זכוכית של שני מיליליטר. סמן את הבקבוקון הזה כמדגם בזמן אפס. לאחר מכן, הפעל את מנורת ה-UV והתחל לעקוב אחר הזמן שחלף.

צייר דגימה של שני מיליליטר כל 30 שניות במהלך חמש הדקות הראשונות. לאחר מכן, קחו דגימה כל 60 שניות למשך שארית הניסוי. אחסן את הבקבוקונים בארבע מעלות צלזיוס עד שהם מוכנים לניתוח.

כדי להתחיל LC MS, העבר את הבקבוקון לדגימה האוטומטית. הגדר את כל הפרמטרים הרלוונטיים כמפורט בטבלה הראשונה של פרוטוקול הטקסט, והתחל את המדידה. שימוש ב-MS ברזולוציה גבוהה וקו רוחב MS/MS הוא הטכניקה המבטיחה ביותר לניתוח לא ממוקד של תרופות במים.

לאחר מכן בצע ניתוח קינטי והתאמת עקומה כמתואר בפרוטוקול הטקסט. במחקר זה, דגימות מי נהר ומים טהורים במיוחד מנותחות כדי לזהות ולזהות מזהמים פרמצבטיים. לאחר מיצוי שלב מוצק, כל דגימת מי נהר נראית בצבע צהבהב או ירוק כהה, המעיד על נוכחות של חומרים המכילים כלורופיל.

דגימות מים אולטרה-טהורים נותרו צלולות, כצפוי. כרומטוגרמה של שיא בסיס עבור דגימות מי הנהר המייצגות הכילה יותר מ-25 פסגות, כל אחת משקפת תרכובת אחרת. חומרים אלה מזוהים לאחר מכן על ידי גזירת הנוסחאות המולקולריות והשוואתם לתקני הייחוס הזמינים.

השוואה זו חושפת את נוכחותן של מספר תרופות הנמצאות במים עיליים בגרמניה, כולל חוסם הבטא מטופרולול, משכך הכאבים קרבמזפין, כמו גם האנטיביוטיקה המקרוליד אריתרומיצין A, והנגזרת שלה אנדרואריתרומיצין A.UVC ניסויי הקרנה מבוצעים לאחר מכן בערכי pH שונים כדי לקבוע תנאי סילוק יעילים באמצעות אריתרומיצין כדוגמה. דיאגרמות זמן ריכוז מראות כי הפירוק המהיר ביותר מתרחש ב-pH 7, בעוד שהאיטי ביותר נראה ב-pH 3, מה שמצביע על כך שפירוק המושרה על ידי פוטו עבור אנטיביוטיקה זו צריך להתבצע ב-pH ניטרלי. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו SESP-NMR arbitrip MS-OTUC על מנת לענות על שאלות נוספות כמו חמצון של degradates ו-tip-off ollization.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לנתח תרופות בגופי מים מלאכותיים וסביבתיים וכיצד לחקור את החיסול המושרה על ידי הקרנת אור. אל תשכח שעבודה עם כימיקלים, תרופות ומי נהר או שפכים עלולה להיות מסוכנת ואמצעי זהירות, כגון ביגוד מגן אישי, ציוד חיצוני, ובמקרה של שפכים, יש לקחת חיסונים תמיד בזמן או לפני ביצוע הליך זה.