Name: זיהוי של תרופות בסביבה המימית באמצעות HPLC-ESI-Q-תוף-MS וחיסול של אריתרומיצין דרך צילום-Induced השפלה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-01T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: חקור זיהוי תרופות במים באמצעות HPLC-ESI-QTOF-MS והשפלת אריתרומיצין בקרינת UV. שיטה זו מאפשרת זיהוי מזהמים תרופתיים בריכוזים נמוכים ומספקת כלים להגנת הסביבה המימית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

וויגט מלאני היא אסירת תודה על מלגה מן Promotionskolleg של מדעי Niederrhein האוניברסיטה של חלה. המחברים תודה שלהם במוסד לחולי הלאה מהקצבות.

1. הכנה לדוגמה: מיצוי מעבדתי
<ol><li>לאסוף כ 1 ליטר מים עבור הכנת הדגימות.</li>
	<li>לסנן את הדגימה מעל מסנן הפס הכחול עם גודל הנקבוביות של 2 מיקרומטר, כדי להסיר חלקיקי גס.</li>
	<li>Equilibrate את מיכל הדיו SPE באמצעות 3 מ"ל של מתנול, 3 מ ל מים הנדסה גנטית.</li>
	<li>להחיל את פילטרט של (1 ליטר) לתוך הדיו SPE ולהגביר את מהירות הזרימה באמצעות שואב אבק מתון, למשל., משאבה הסרעפת. הערה: מספר המחסניות SPE ניתן להפעיל במקביל.</li>
	<li>לשטוף את הדגימה עם 3 מ ל מים הנדסה גנטית.</li>
	<li>Elute את analytes מן מחסנית sorbate עם 3 מ"ל של מתנול.</li>
	<li>לרכז את eluate 3 מ ל יבש באמצעות המאדה.</li>
	<li>להמיס את השאריות של 1 מ"ל של מים הנדסה גנטית.</li>
	<li>לסנן את הפתרון דרך מסנן מזרק ואחסן אותם בבקבוקון לניתוח שאינן ממוקדות על ידי HPLC-ESI-Q-תוף-MS.</li>
</ol>2. HPLC-ESI-Q-תוף-MS שיטת שאינו ממוקד וניתוח ממוקד, MS/MS
<ol><li>להעביר את המבחנה תעשיה HPLC-ESI-Q-תוף-MS.</li>
	<li>להגדיר כל הפרמטרים הרלוונטיים (טבלה 1) עבור HPLC-ESI-Q-תוף-MS. הערה: אם נעשה שימוש של אנרגיית התנגשות סופית, כלומר., בשל התנגשות אנרגיה (CE) 0, יונים לפיצול. מצב זה מתאים לשיטת MS/MS יישוב.</li>
	<li>להתחיל את המדידה.</li>
	<li>לנתח את chromatograms שנוצר ואת המוני ספקטרה.</li>
</ol>3. UV הקרנה ניסויים
<ol><li>להמיס המתחם לאנטיביוטיקה, למשל, אריתרומיצין (750 מ"ג/ליטר), במים הנדסה גנטית-ריכוז סופי של 20 מ ג/ליטר.</li>
	<li>למלא את photoreactor 1 ליטר, עטוף בנייר אלומיניום, עם 750 מ של הפתרון.</li>
	<li>מציגים את המנורה מתן 15 W בכוח לתוך הכור.</li>
	<li>להחיל את פלב-500 סל ד.</li>
	<li>התאם את ערך ה-pH הערך הרצוי 3-4, 6-7 או 8-9 על ידי תוספת dropwise של HCl (0.1 M) או NH3 (0.1 M) במידת הצורך. ה-pH 6-7 משמש כדוגמה.</li>
	<li>לקחת 2 מ"ל של הפתרון התגובה כדוגמה בזמן 0 באמצעות מזרק והעבר אותו לתוך בקבוקון זכוכית 2 מ"ל.</li>
	<li>להדליק את מנורת UV, לשמור על מעקב אחר של הזמן elapsing. הערה: מועדי הקרנה 10 דקות הם לעתים קרובות מספיק. אם השלמות של photoreaction רצוי, סדרה בניסוי השני ייתכן שתצטרך להקליטו באמצעות התוצאות של הסדרה הראשונה. התראה: הקרנת UV עלול להוביל לעיוורון.</li>
	<li>לצייר מדגם 2 mL מהפתרון כל 30 s במהלך הראשון 5 דקות. . אז, קח דגימה כל 60 s עד סוף הניסוי. להעביר את הדגימות לתוך מבחנות 2 מ"ל.</li>
	<li>לאחסן את הבקבוקונים עד HPLC-ESI-Q-תוף-MS ניתוח ב-4 ° c</li>
	<li>לנתח את הדגימות 16 באמצעות HPLC-ESI-Q-תוף-MS בשיטות המתוארות בשלב 2.</li>
</ol>4. קינטיקה ניתוח
<ol><li>להכין תוכנה מתאימה כגון-פריסטלטיות בארגז הכלים של MATLAB R2016b.</li>
	<li>מתאים לאזור בנפח גדול לעומת נתוני זמן צילום-induced השפלה של אנטיביוטיקה האב מורכבים על פי קינטיקה מסדר ראשון, לראות את הציוד 242,43 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq1.jpg">(2) הריכוז <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq2.jpg"> מתייחס הריכוז ההתחלתי של educt A, cA לריכוז בפועל מעל ה-זמן התגובה t עם קצב קבוע k1 מהצעד הראשון התגובה א' לנקודה ב'.</li>
	<li>שתתאים לשטח המסה לעומת הזמן עקומות של degradates באמצעות הציוד 3 ו-4, כפי שהם יכולים להיות מתואר intermediates רצופים או עוקבות המשך לתגובה, כלומר., מוצר ב' או ג' על פי התגובה דגם ד → C →B ← <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq3.jpg">(3) <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq4v5.jpg">(4) ריכוז cB ו- cC להפנות intermediates B ו- C; ו- k2,k3 כדי הקבועים שיעור המקביל B ל- C, C עד ד'.</li>
	<li>השתמש הציוד 5 כדי להתאים לנתונים, אם הזמן הקרנה לא הספיק להתבונן ההשפלה של צילום-מוצר. זה degradate יכולים להיות מטופלים כמו המוצר הסופי D עם ריכוז CD להשגת קצב קבועים. <img alt="Equation 6" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq6.jpg">(5)<ol>
<li>חשב את ריכוז B באמצעות הציוד 6 במקום הציוד 3, אם התגובה מסתיימת ב- B. אם C הוא המוצר הסופי, לחשב את הריכוז של C לפי הציוד 7 במקום הציוד 4. <img alt="Equation 7" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq7.jpg">(6) <img alt="Equation 8" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq8.jpg">(7)</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש הציוד 8 הקביעה של מחצית החיים t1/2. <img alt="Equation 10" src="/files/ftp_upload/57434/57434eq10.jpg">(8)</li>
</ol>

המחברים מצהירים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

הדוגמה של ניתוח שאינו ממוקד שהוצגו בדוח הפגינו את הזיהוי של תרופות במים עיליים באמצעות HPLC-ESI-Q-תוף-MS, MS/MS והשוואה עם הפניה סטנדרטים כמו ההוכחה הסופית. הכוח של ניתוח שאינו ממוקד באמצעות תוף-MS מבוסס על זיהוי כל יונים נוכח בכל זמן נתון השמירה, רמת דיוק מסה גבוהה מה שמוביל התחזית של הנוסחה המולקולרית במצב tentative. כחלופה בספקטרומטר תוף, היישום של מלכודת יונים מסלולית תואר לניתוח מזהם ב מים44. התחזית נוסחה מולקולרית שימש כנקודת ההתחלה כדי לבחור במהירות את הפניה לתקנים. היישום של השיטה MS יישוב של Q-תוף-MS הכלי מותר הגילוי של תרכובות מסוימות, מאז רק שנבחרו מראש יונים להעביר את המסנן פאול. באופן כללי ניתוח ממוקד מתבצעת באמצעות ספקטרומטר מסה פאול טריפל גם בתוך המים ניתוח45. כדי לפצות על הסטייה מן המסה תיאורטי עקב פגמים פלייבק, השוואה כרומטוגרפי עם הפניה רגיל יכול להתבצע. השיטה MS/MS ממוקד עשוי להיבחר גם לניתוח זיהוי. . הנה, יונים נבחרו, מקוטעת וזוהה קטעים שלהם. מאז MS/MS הוא פחות רגיש יותר MS, הריכוז של התרופות בדגימות מים ובדוקים הייתה נמוכה מדי להניב שברים משמעותיים. עם זאת, אם קטעים מזוהים, ניתן לזהות תרכובות עם ביטחון עצמי גבוה יותר. ניתן יהיה להתגבר על הרגישות לא מספיקות על ידי ריכוז נפח גדול יותר של דגימת מים הראשונית. בנוסף, המדידה צריכה להתבצע בהקדם האפשרי לאחר דגימה בגלל פוטנציאל כילוי46,47,48,49. אחרת, דוגמאות צריך להיות מאוחסן ב-20 ° C כדי לא לכלול מתחם השפלה או תגובה.
לעיתים מופיעים אותם ערכים מ/z במועדים שמירה שונה. זה עשוי להיות בשל כך isomers דורשים שונים בשיטות אנליטיות. זה יכול להתרחש גם כי אין תרכובות עלול להתגלות בכלל, אשר לא בהכרח מוכיח היעדרות שלהם. הם אולי לא טופס יונים או להתרחש מתחת לגבול של זיהוי. סוג מים תרגילים גם השפעה על הנוכחות של תרופות. תרופות נדירות הזן מקור מים ומי תהום לעומת מי קולחין ומי ביוב שפכים טיפול צמחים48,50,51,52,53.
על הניסויים השפלה, המקור הקרנה צריך להתאפיין מראש, מאז שטף הפוטונים או פוטון שיעור הכשרון של המנורה תורם משמעותית ההשפלה, המנגנון של השפלה. כנראה על ניסיונות הראשונית, מנורה VUV/UVC, מנורת כספית בלחץ נמוך הוא מספיק. באופן כללי, התוספת של חמצן, H2O2, מאיצה את השפלה27,36,37,54. כאשר מנורה שונים, למשל., מנורה UVA, משמש, היווצרות של רדיקלים הידרוקסיל צריך להבטיח, למשל., באמצעות התוספת של טיטניום דו-חמצני 23,24,30, 31. עבור תרכובות רבות, כגון אריתרומיצין, או רדיקלים ולא צילום-תגובתיות של התרופות עצמה27הם המינים בתדר השפלה.
עבור קביעת הפרמטרים קינטי, האזור של האותות ב chromatograms מזוהה מסה, המייצגת ריכוז, מותווים לעומת זמן הקרנה. כדי להתאים את הנתונים, מומלץ להשתמש בתוכנה מתאימה. כאן, הכלי עיקול התאמה של MATLAB שימשה, אשר מותר לחשב ובמהירות להתאים לנתונים עם המשוואות הנכונות. קינטי של-intermediates נקבעת לפי משוואות מורכבות יותר. הפרמטרים איכות עבור ההתאמה, כלומר., R2 ו- RMSE, כמו גם ברצון התקבלו.
מחקר זה הוכיח הניתוח של מי הנהר כדי לאתר ולזהות מזהמים התרופות, את photodegradation של אריתרומיצין במים הנדסה גנטית. במים סביבתיים, כגון מים עיליים, במהירויות שונות השפלה וקבועים קצב מתקבלת עקב קליטת חומרים, כגון humins האור. על פי הניסיון של המחברים, השפלה לעיתים קרובות מתרחש יותר לאט, אבל לפעמים ב41,המחירים דומים56.
הבעיה ברחבי העולם של תרופות, במיוחד אנטיביוטיקה, הסביבה התת-מימית, הסיכונים וכתוצאה מכך עדיין ממשיכות לגדול1. בשל מגוון ורב -גוניותה של כימיקלים, מטבוליטים, ו degradates הימנו, ניתוח שאינו ממוקד יהפכו כלי אנליטי החשוב ביותר לגילוי שלהם בתוך הסביבה57. עבור חיסול יעיל, הרומן שלבים לטיפול בשפכים יהיה עליך להיות מעוצב בהתבסס על תהליכי חמצון מתקדם, הקרנת UV אשר עשוי להיות חלק.

תכשירים רפואיים נמצאים באופן קבוע הסביבה הימית1,2,3,4,5. מקור חשוב הם מי קולחין שפכים טיפול צמחים (WWTP)6,7,8,9. המופע של תרופות ב לאורך כל מחזור המים נחקר exemplarily אגן נהר Turia10. בין היתר, אנטיביוטיקה מייצגים שיעור מסוכנים מסוים של תרופות, מאז הם לעיתים קרובות לעבור את השלב הביולוגי של WWTPs מזויפת, עלולה לגרום resistances חיידקי סביבה11,12,13 . Macrolides מהווים מחלקה של תרופות אנטיביוטיות המוחלות האדם והן ברפואה וטרינרית. נציגיהם נמצאו ריכוז עד 1 µg/L מי קולחין14,15,16,17,18,19. אחד מהם הוא אריתרומיצין (ערבויות)20,21. במים, אריתרומיצין מלווה לעיתים קרובות על-ידי anhydroerythromycin (ערבויות א - H2O),22,dehydrate23. חיסול מים מ אריתרומיצין הוא יציבות חומצה. היחס של אריתרומיצין לעומת anhydroerythromycin תלויה pH24,25,26,27.
מבחינה כימית, macrolides להכיל macrocylic לקטון לסוכר שונים אשר מחוברים moieties, למשל., desosamine, cladinose או mycaminose. מאז macrolides עוברות שינוי כימי מוצרים טבעיים של תהליכי תסיסה, הם לעיתים קרובות קיימים כמו תערובות. המין הנקרא A, B, C, וכו '., נבדלים substituents הסוכר. מצב הפעולה של macrolides28,29אחראים moieties סוכר את והמיקום שלהם-לקטון. על מנת למזער מפגע סביבתי, זה רצוי לחלוטין mineralize התרופות לפני הכניסה את הסביבה הימית27,30,31,32.
החלק הראשון של המחקר עוסק הגילוי של תרופות על פני המים, וזה חשוב לניטור מי קולחין ומים פתוח. כדי לחפש מגוון רחב של חומרים לא מזוהים בטווח מיקרוגרם של מטריצות שונות, שאינן ממוקדות ניתוח הוא שיטת הבחירה20,33,34,35. בכרומטוגרפיה נוזלית, מיוחד, בעל ביצועים גבוהים (HPLC) ספקטרומטריית electrospray יינון פאול שעת הטיסה ספקטרומטר מסה (HPLC-ESI-Q-תוף-MS) הוכח של ערך יוצא דופן בשל ירידה לפרטים שלה רגישות. לאחר הזיהוי של החומר, רגישות יכול עוד להיות מורחב באמצעות MS יישוב גישה עם פאול המופעלים במצב בחירה ולא אנרגיית התנגשות בתוך התא התנגשות מוגדר כאפס. לפיכך, יונים מגיעים לא מפוצלים הגלאי TOF.
המוקד השני של עבודה זו היא חיסול של אריתרומיצין. עבור חיסול של התרופות, משמשים תהליכי חמצון מתקדם כביכול (AOPs), למשל., המופעלת על ידי הקרנה עם UV אור36,37,38. חיוני ההשפלה היא היווצרות של רדיקלים הידרוקסיל מן המים על ידי VUV / הקרנה UVC בעקבות הציוד 1.
H2O + hν(< 200 ננומטר) ← H2O * ← H. + . הו (1)
הידרוקסיל רדיקלים בעלי פוטנציאל חמצון גבוהה של 2.8 V, אשר תורמת באופן חיובי ההשפלה של36,חומרים37.
. הנה, ההשפלה של אריתרומיצין באמצעות ואקום/UVC-הקרנת UV במים מתוארת השפעות ה-pH התחשבות. היווצרות של מוצרים מסוכנים אף יותר הוא האמין להיות חיסרון השימוש39,AOPs40. לכן, חשוב להאיר. עד מינרליזציה מלאה של התרופות. להעריך טוב יותר את הזמן הקרנה, מודל קינטי של התגובה, את קבועי קצב התגובה, מחצית החיים נקבעים עבור התרופה הראשונית והן עבור photodegradates שלה. למטרה זו, זמן-ריכוז (c-t) מגרש היו נגזר מדידות HPLC-ESI-Q-תוף-MS, לעומת מודלים קינטיקה כימית באמצעות MATLAB. קינטיקה השפלה המשיך לפי מסדר ראשון, photodegradates תוארו כמו מוצרי ביניים של27,41רצופים או עוקבות תגובה להמשך טיפול.

<table><tbody><tr><td>מתנול לכרומטוגרפיה נוזלית LiChrosolv</td><td>Merck</td><td>1060181000</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פורמית</td><td>Fluka</td><td>94318</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Riedel-de Haen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NH3</td><td>Riedel-de Haen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פשטות 185 מערכת טיהור מים</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td>לייצור</td></tr><tr><td>אריתרומיצין</td> <td>מים MilliQBioChemica AppliChem</td><td>A2275,0005</td><td></td></tr><tr><td>מסנן רוטילבו-פילטר, טיפוס 113A</td><td>Roth</td><td>AP78.1</td><td></td></tr><tr><td>SPE-Cartridges Oasis HLB 3cc (60 מ"ג)</td> <td>Waters</td><td>WAT094226</td><td></td></tr><tr><td>BAKER SPE-12G</td><td>J.T.</td> משאבת ממברנה בייקר <td></td><td></td></tr><tr><td>PC3001 VarioPro&nbsp;</td>מאייד סיבובי <td>Vacuubrand</td><td></td><td></td></tr><tr><td>; מזרק Laborota 4000 יעיל</td><td>Heidolph Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 2 מ"ל</td> מסנני מזרק <td>ניילון Terumo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Target2</td><td>Thermo Scientific</td><td>10301345</td><td></td></tr><tr><td>C-18 עמודת CoreShell 50 מ"מ x 2.1 מ"מ מידות, 2.6 &mu; m גודל חלקיקים</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC 1200</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ESI-Q-ToF-MS 6530</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>photoreactor, UV Labor Reactor System 3</td><td>Peschl Utraviolet GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>VUV/UVC-lamp , TNN 15/32, 15 W</td><td>Heraeus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH-meter, pH pH 1100L</td><td>vwr</td><td>662-1657</td><td></td></tr><tr><td>מערבל מגנטי</td><td>Heidolph Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MassHunter Workstation B.06.00</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MATLAB R2016b</td><td>Mathworks</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

זיהוי של תרופות בסביבה המימית באמצעות hplc-esi-q-תוף-ms וחיסול של אריתרומיצין דרך צילום-induced השפלה

Identification of Pharmaceuticals in The Aquatic Environment Using HPLC-ESI-Q-TOF-MS and Elimination of Erythromycin Through Photo-Induced Degradation

ניטור תרופות במהלך מחזור מים הופך להיות חשוב יותר ויותר על הסביבה התת-מימית ובסופו של דבר לבריאות האדם. ממוקד, ניתוח שאינו ממוקד אמצעי של היום הבחירה. למרות ממוקד ניתוח שנערך בדרך כלל עם העזרה של פאול משולשת ספקטרומטר מסה עשויים להיות רגישים יותר, ניתן לזהות רק תרכובות שבחרת בעבר. הניתוח שאינן ממוקדות החזקים ביותר מתבצע דרך שעת הטיסה ספקטרומטרים המוני (תוף-MS) מורחב על ידי מנתח המוני פאול (Q), משמש במחקר זה. לפניו מיצוי מעבדתי, ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC), הגישה שאינן ממוקדות מאפשר לזהות את כל חומרים ionizable עם רגישות גבוהה, סלקטיביות. ניצול מלא של המכשיר Q-תוף-MS, ספקטרומטר מסה tandem (MS/MS) ניסויים להאיץ וכדי להקל על הזיהוי בזמן שיטה MS יישוב משפר את הרגישות אך מסתמך על סטנדרטים למטרות זיהוי. הזיהוי של ארבע תרופות מן המים נהר הריין הוא הפגין. נהר הריין מקורו ב- Tomasee, Graubünden, שוויץ, הנשפך לים הצפוני, ליד מפרץ בדרום, הולנד. אורכו מסתכם ק מ 1232.7. מאז זה עניין עיקרי לחסל ביעילות התרופות של מחזור המים, הקרנה UV-C האפקט הוכח בקנה מידה מעבדה. שיטה זו מאפשרת השפלה מהיר של תרופות, אשר מוצג exemplarily עבור האריתרומיצין לאנטיביוטיקה המקרולידים. שימוש בשיטת HPLC-Q-תוף-MS לעיל, דיאגרמות ריכוז-הזמן מתקבלים עבור התרופה האב ומוצרים photodegradation שלהם. לאחר הקמת את המשוואות לתגובות רציפים מסדר ראשון, התאמה חישובית מאפשר קביעת פרמטרים קינטי, אשר עשוי לעזור כדי לחזות הקרנה פעמים ואת התנאים כאשר פוטנציאל נחשב השלב הרביעי בתוך טיפול בשפכים.

אנו מציגים פרוטוקול לניתוח שאינן ממוקדות באמצעות שעת הטיסה ספקטרומטר מסה כמו הכלי המושלם כדי לזהות תרופות במים. נדגים את היישום של הקרנת UV לחיסול שלהם. ניתוח מעורבים הקרנה, מתחם בידוד, זיהוי, דגמי קינטי של הפרופילים השפלה מודגם.

זיהוי של תרופות בסביבה המימית באמצעות HPLC-ESI-Q-תוף-MS וחיסול של אריתרומיצין דרך צילום-Induced השפלה

Monitoring pharmaceuticals throughout the water cycle is becoming increasingly important for the aquatic environment and eventually for human health. ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בהגנה על הסביבה, כגון מודעות לאנטיביוטיקה בסביבה הימית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יכולה לזהות מזהמים פרמצבטיים בריכוזים נמוכים מאוד ולזהות אותם בו זמנית. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי תרופות והשפעת שפכים ומי נהרות, ניתן ליישם אותה גם על מערכות אחרות, כגון חומרי הדברה או חומרים דמויי הורמונים בסביבה המימית.כדי להתחיל בהליך זה, אספו כליטר מים להכנת הדגימות. סנן את הדגימה מעל מסנן פס כחול כדי להסיר חלקיקי מסלול. לאחר מכן, הוסף שלושה מיליליטר מתנול למחסנית מיצוי הפאזה המוצקה כדי לאזן אותה.המתן עד שהמתנול יעזוב את המחסנית, ולאחר מכן הוסף שלושה מיליליטר מים טהורים במיוחד. לאחר שהמים עזבו את המחסנית, יש למרוח את המסנן ולהשתמש במשאבת דיאפרגמה, או בוואקום מתון אחר, כדי להגביר את מהירות הזרימה. אז ריכוז מוקדם הוא מאוד חשוב.הקפד להשתמש במחסנית חילוץ פאזה מוצקה עם הפאזה המוצקה הנכונה. שוטפים את הדגימה בשלושה מיליליטר מים טהורים במיוחד. לאחר מכן השתמש בשלושה מיליליטר אתנול כדי לסלק את האנליטים מהסורבט של המחסנית.בעזרת מאייד סיבובי יש לרכז ולייבש את האנליטים המנופחים. ממיסים את השאריות המתקבלות במיליליטר אחד של מים טהורים במיוחד. לאחר מכן, סנן את התמיסה דרך פילטר מזרק.אחסן אותם בבקבוקון עד שהם מוכנים לבצע ניתוח לא ממוקד על ידי HPLC-ESI-QTOF-MS. כדי להתחיל בניסויי הקרנת UV, יש להמיס את התרכובת האנטיביוטית המעניינת במים אולטרה-טהורים כדי להגיע לריכוז סופי של 20 מיליגרם לליטר. העבר 750 מיליליטר מתמיסה זו לכור הפוטו-ריאקטור של ליטר אחד.לאחר מכן, הוסף מערבל מגנטי והכניס מנורת UV של 15 וואט לכור. התחל לערבב ב -500 סל"ד. בעזרת תוספת טיפתית של חומצה הידרוכלורית או אמוניה, התאם את ה-pH לערך הרצוי.השתמש במזרק כדי להעביר שני מיליליטר מתמיסת התגובה לבקבוקון זכוכית של שני מיליליטר. סמן את הבקבוקון הזה כמדגם בזמן אפס. לאחר מכן, הפעל את מנורת ה-UV והתחל לעקוב אחר הזמן שחלף.צייר דגימה של שני מיליליטר כל 30 שניות במהלך חמש הדקות הראשונות. לאחר מכן, קחו דגימה כל 60 שניות למשך שארית הניסוי. אחסן את הבקבוקונים בארבע מעלות צלזיוס עד שהם מוכנים לניתוח.כדי להתחיל LC MS, העבר את הבקבוקון לדגימה האוטומטית. הגדר את כל הפרמטרים הרלוונטיים כמפורט בטבלה הראשונה של פרוטוקול הטקסט, והתחל את המדידה. שימוש ב-MS ברזולוציה גבוהה וקו רוחב MS/MS הוא הטכניקה המבטיחה ביותר לניתוח לא ממוקד של תרופות במים.לאחר מכן בצע ניתוח קינטי והתאמת עקומה כמתואר בפרוטוקול הטקסט. במחקר זה, דגימות מי נהר ומים טהורים במיוחד מנותחות כדי לזהות ולזהות מזהמים פרמצבטיים. לאחר מיצוי שלב מוצק, כל דגימת מי נהר נראית בצבע צהבהב או ירוק כהה, המעיד על נוכחות של חומרים המכילים כלורופיל.דגימות מים אולטרה-טהורים נותרו צלולות, כצפוי. כרומטוגרמה של שיא בסיס עבור דגימות מי הנהר המייצגות הכילה יותר מ-25 פסגות, כל אחת משקפת תרכובת אחרת. חומרים אלה מזוהים לאחר מכן על ידי גזירת הנוסחאות המולקולריות והשוואתם לתקני הייחוס הזמינים.השוואה זו חושפת את נוכחותן של מספר תרופות הנמצאות במים עיליים בגרמניה, כולל חוסם הבטא מטופרולול, משכך הכאבים קרבמזפין, כמו גם האנטיביוטיקה המקרוליד אריתרומיצין A, והנגזרת שלה אנדרואריתרומיצין A.UVC ניסויי הקרנה מבוצעים לאחר מכן בערכי pH שונים כדי לקבוע תנאי סילוק יעילים באמצעות אריתרומיצין כדוגמה. דיאגרמות זמן ריכוז מראות כי הפירוק המהיר ביותר מתרחש ב-pH 7, בעוד שהאיטי ביותר נראה ב-pH 3, מה שמצביע על כך שפירוק המושרה על ידי פוטו עבור אנטיביוטיקה זו צריך להתבצע ב-pH ניטרלי. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו SESP-NMR arbitrip MS-OTUC על מנת לענות על שאלות נוספות כמו חמצון של degradates ו-tip-off ollization.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לנתח תרופות בגופי מים מלאכותיים וסביבתיים וכיצד לחקור את החיסול המושרה על ידי הקרנת אור. אל תשכח שעבודה עם כימיקלים, תרופות ומי נהר או שפכים עלולה להיות מסוכנת ואמצעי זהירות, כגון ביגוד מגן אישי, ציוד חיצוני, ובמקרה של שפכים, יש לקחת חיסונים תמיד בזמן או לפני ביצוע הליך זה.

identification-pharmaceuticals-aquatic-environment-using-hplc-esi-q

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

מוצג פרוטוקול למיצוי וריכוז מראש של אסטרדיול מדגימות מים באמצעות מערכת אוטומטית וממוזערת.

שיטה פשוטה למיצוי שלב המוצק האוטומטי של דגימות מים לניתוח החיסוני של מזהמים קטנים

תרכובות לשבש האנדוקרינית (EDC) להוות סיכון ממשי של הסביבה המימית. מתקני טיהור שפכים עירוניים הם תורמים עיקריים העצמה אסטרוגניים של מים עיליים. המתודולוגיה הניתן במאמר זה מאפשר הערכה של היעילות וההתאמה של תהליכי טיפול בשפכים ביחס להסרת EDC.

שימוש בסוללה של שיטות כימיות Ecotoxicological עבור הערכת היעילות של תהליכי טיפול בשפכים להסיר אסטרוגניים און

שרשרת פולימראז משופר שיטת פולימורפיזם תגובת הגבלה שבר אורך עבור genotyping מיני נפוחיתיים ידי ספקטרומטריית נוזלי כרומטוגרפיה / מסה מתוארת. טור מונולית סיליקה הפוכה פאזיים מועסק להפרדת amplicons מתעכל. שיטה זו יכולה להבהיר את המוני monoisotopic של oligonucleotides, אשר הוא כלי שימושי לזיהוי רכב בסיס.

שרשרת פולימראז משופר אורך קטע התגובה הגבלת Genotyping פולימורפיזם של נפוחיתיים רעילים ידי נוזלי כרומטוגרפיה / ספקטרומטריית מסה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד ולאפיין את המבנה, חוש הריח, והכוחות תגובה התנהגותית של תרכובות פרומון בשם של הים lampreys.

הזיהוי של פרומונים ים עגולי הפה באמצעות מונחה Bioassay Fractionation

כאן נתאר שיטת תפוקה גבוהה למעקב סמים מקיף המאפשר רזולוציית משופרת וזיהוי של לוחות גדולים של סמים של התעללות מטבוליטים שלהם, עם בקרת איכות המבוססת על הזרקת multisegment-נים אלקטרופורזה-ספקטרומטריית.

מעקב סמים תפוקה גבוהה ומקיף באמצעות ספקטרומטר מסה אלקטרופורזה הזרקה-נימי Multisegment

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול כימות יישוב רציף וניתוח שאינן ממוקדות של תרכובות fluorinated במים באמצעות ספקטרומטר מסה. מתודולוגיה זו מספק רמות כמותית של תרכובות שטיח ידוע ומזהה כימיקלים לא ידוע בדגימות קשורים עם הערכות כמותיות למחצה של שפע שלהם.

זיהוי לכל-כימית Polyfluorinated מינים בזרימת עבודה משולבת יישוב, שאינו ממוקד-סינון ברזולוציה גבוהה ספקטרומטר מסה

מבנה כמותי-קשרי גומלין (QSAR) מידול הוא ביואינפורמטיקה מייצגת שיטה בסיוע בהקרנה רעילות. פרוטוקול זה מדגים כיצד להעריך מבחינה חישובית את הסיכונים של המשורים האנדוקריניים (עורכים) בסביבות מימיות. באמצעות כתיבת הכלים של ה-OECD QSAR, הפרוטוקול מיישם בתוך שיטת סיליקו, לניתוח רעילות של העורכים בדגים.

בשיטת מידול סיליקו לרעלים מימיים לחישוביות חישובית של משבנים אנדוקרינים: גישה מבוססת תוכנה באמצעות ארגז הכלים QSAR

כאן מתוארת בעיה רב-תחומית לגילוי מוקדם של פריחות ציאנובקטריאליות וציאנוטוקסינים נלווים. זה מאפשר זיהוי של ציאנובקטריה וציאנוקסינים הקשורים בדגימות מים ומטריצות אורגניות, כגון דגימות דו-כיווניות, תוך 24 שעות.

גילוי מוקדם של פריחות ציאנובקטריאליות וציאנוקסינים נלווים באמצעות אסטרטגיית זיהוי מהירה

מוצג כאן פרוטוקול לחקר סדרה אוניברסלית של הליכים ניסיוניים להערכת מעבדה מקיפה של פוטוזרזים בתחום הטיהור הסביבתי, תוך שימוש בדוגמה של הסרה פוטוקטליטית של מולקולות מזהמים אורגניים אנטיביוטיים ממים על ידי תרכובות פוספט כסף רגישות לפתלוציאנין.

שיטה מלאה להערכת הביצועים של photocatalysts עבור השפלה של אנטיביוטיקה בתיקון סביבתי

פרוטוקול זה מציג שיטת ספקטרומטריית מסה מאומתת של כרומטוגרפיה נוזלית - ניידות יון ברזולוציה גבוהה כדי לקבוע את נוכחותם של אלקלואידים ארגוט במזון בהתאם לתקנה של הנציבות (EU) 2023/915 שפורסמה לאחרונה.

זיהוי אלקלואידים ארגוטיים מוסדרים במטריצות מזון על ידי ספקטרומטריית ניידות יונים לכודים בכרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה בזמן טיסה

פיתחנו שיטת QuEChERS-HPLC שונה כדי להעריך את הרמות הפנימיות של 16 PAHs בעוברי דג הזברה.

שיטת QuEChERS-HPLC שונה לזיהוי פחמימנים ארומטיים פוליציקליים בעוברי דג זברה שנחשפו לחלקיקים עדינים

חקור זיהוי תרופות במים באמצעות HPLC-ESI-QTOF-MS והשפלת אריתרומיצין בקרינת UV. שיטה זו מאפשרת זיהוי מזהמים תרופתיים בריכוזים נמוכים ומספקת כלים להגנת הסביבה המימית.

זיהוי של תרופות בסביבה המימית באמצעות HPLC-ESI-Q-תוף-MS וחיסול של אריתרומיצין דרך צילום-Induced השפלה

גלה סרטונים נוספים