Name: השיטה הכמותית האוטומטית לקביעת שיעורי הסינתזה של חלבון מוחי בVivo (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: למד שיטת אוטורדיוגרפיה כמותית לבדיקת שיעורי סינתזת חלבון אזוריים במוח בחיות ערות ופעילות. שיטה זו מאפשרת מדידות מדויקות בו-זמנית באזורים שונים במהלך פיתוח ונוירופלסטיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להכיר Zengyan Xia עבור הגנוזה של העכברים, טום בורלין לעיבוד של חומצות אמינו וסרטים, מיי צ'ין לביצוע כמה ניסויים rCPS. מחקר זה נתמך על ידי תוכנית מחקר תוך-ציור של NIMH, ZIA MH00889. RMS גם נתמך על ידי אוטיזם מדבר המענק 8679 ו המענק FRAXA פוסט דוקטורט.

<ol><li>West, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+regulation+of+neuronal+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Calcium regulation of neuronal gene expression.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 11024-11031 (2001).</li>
<li>Siegel, G., Agranoff, B., Albers, R. W., Fisher, S., Uhler, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSiegel%2C+G+%22Basic+Neurochemistry%22">Basic Neurochemistry</a>. , 6th ed, Lippincott-Raven. New York. (1999).</li>
<li>Nguyen, P. V., Abel, T., Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+of+a+critical+period+of+transcription+for+induction+of+a+late+phase+of+LTP%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Requirement of a critical period of transcription for induction of a late phase of LTP.</a> Science. 265, 1104-1107 (1994).</li>
<li>Mao, Z., Bonni, A., Xia, F., Nadal-Vicens, M., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity-dependent+cell+survival+mediated+by+transcription+factor+MEF2%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity-dependent cell survival mediated by transcription factor MEF2.</a> Science. 286, 785-790 (1999).</li>
<li>Pfeiffer, B. E., Huber, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+advances+in+local+protein+synthesis+and+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+the+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Current advances in local protein synthesis and synaptic plasticity.</a> The Journal of Neuroscience: the Official Journal of the Society for Neuroscience. 26, 7147-7150 (2006).</li>
<li>Smith, C. B., Deibler, G. E., Eng, N., Schmidt, K., Sokoloff, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+local+cerebral+protein+synthesis+in+vivo%3A+influence+of+recycling+of+amino+acids+derived+from+protein+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Measurement of local cerebral protein synthesis in vivo: influence of recycling of amino acids derived from protein degradation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 85, 9341-9345 (1988).</li>
<li>Schmidt, K. C., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution%2C+sensitivity+and+precision+with+autoradiography+and+small+animal+positron+emission+tomography%3A+implications+for+functional+brain+imaging+in+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Resolution, sensitivity and precision with autoradiography and small animal positron emission tomography: implications for functional brain imaging in animal research.</a> Nuclear Medicine and Biology. 32, 719-725 (2005).</li>
<li>Banker, G., Cotman, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+different+amino+acids+as+protein+precursors+in+mouse+brain%3A+advantages+of+certain+carboxyl-labeled+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Biochemistry+and+Biophysics%22%5BJournal%5D)">Characteristics of different amino acids as protein precursors in mouse brain: advantages of certain carboxyl-labeled amino acids.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 142, 565-573 (1971).</li>
<li>Frerichs, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+protein+synthesis+in+brain+during+hibernation+involves+inhibition+of+protein+initiation+and+elongation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Suppression of protein synthesis in brain during hibernation involves inhibition of protein initiation and elongation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95, 14511-14516 (1998).</li>
<li>Abrams, R. M., Burchfield, D. J., Sun, Y., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rates+of+local+cerebral+protein+synthesis+in+fetal+and+neonatal+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Rates of local cerebral protein synthesis in fetal and neonatal sheep.</a> The American Journal of Physiology. 272, R1235-R1244 (1997).</li>
<li>Nakanishi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+correlations+between+cerebral+protein+synthesis+rates+and+deep+sleep+in+Macaca+mulatta%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Positive correlations between cerebral protein synthesis rates and deep sleep in Macaca mulatta.</a> The European Journal of Neuroscience. 9, 271-279 (1997).</li>
<li>Sun, Y., Deibler, G. E., Sokoloff, L., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+regional+rates+of+cerebral+protein+synthesis+adjusted+for+regional+differences+in+recycling+of+leucine+derived+from+protein+degradation+into+the+precursor+pool+in+conscious+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Determination of regional rates of cerebral protein synthesis adjusted for regional differences in recycling of leucine derived from protein degradation into the precursor pool in conscious adult rats.</a> Journal of Neurochemistry. 59, 863-873 (1992).</li>
<li>Scammell, T. E., Schwartz, W. J., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+evidence+for+a+circadian+rhythm+of+protein+synthesis+in+the+rat+suprachiasmatic+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">No evidence for a circadian rhythm of protein synthesis in the rat suprachiasmatic nuclei.</a> Brain Research. 494, 155-158 (1989).</li>
<li>Smith, C. B., Eintrei, C., Kang, J., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+thiopental+anesthesia+on+local+rates+of+cerebral+protein+synthesis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of thiopental anesthesia on local rates of cerebral protein synthesis in rats.</a> The American Journal of Physiology. 274, E852-E859 (1998).</li>
<li>Sun, Y., Deibler, G. E., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+axotomy+on+protein+synthesis+in+the+rat+hypoglossal+nucleus%3A+examination+of+the+influence+of+local+recycling+of+leucine+derived+from+protein+degradation+into+the+precursor+pool%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Effects of axotomy on protein synthesis in the rat hypoglossal nucleus: examination of the influence of local recycling of leucine derived from protein degradation into the precursor pool.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13, 1006-1012 (1993).</li>
<li>Smith, C. B., Yu, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rates+of+protein+synthesis+in+the+regenerating+hypoglossal+nucleus%3A+effects+of+testosterone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">Rates of protein synthesis in the regenerating hypoglossal nucleus: effects of testosterone treatment.</a> Neurochemical Research. 19, 623-629 (1994).</li>
<li>Orzi, F., Sun, Y., Pettigrew, K., Sokoloff, L., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acute+and+delayed+effects+of+prior+chronic+cocaine+administration+on+regional+rates+of+cerebral+protein+synthesis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Effects of acute and delayed effects of prior chronic cocaine administration on regional rates of cerebral protein synthesis in rats.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 272, 892-900 (1995).</li>
<li>Nadel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+exercise+regionally+augments+rates+of+cerebral+protein+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Voluntary exercise regionally augments rates of cerebral protein synthesis.</a> Brain Research. 1537, 125-131 (2013).</li>
<li>Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rates+of+local+cerebral+protein+synthesis+in+the+rat+during+normal+postnatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Rates of local cerebral protein synthesis in the rat during normal postnatal development.</a> The American Journal of Physiology. 268, R549-R561 (1995).</li>
<li>Smith, C. B., Sun, Y., Sokoloff, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+aging+on+regional+rates+of+cerebral+protein+synthesis+in+the+Sprague-Dawley+rat%3A+examination+of+the+influence+of+recycling+of+amino+acids+derived+from+protein+degradation+into+the+precursor+pool%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Effects of aging on regional rates of cerebral protein synthesis in the Sprague-Dawley rat: examination of the influence of recycling of amino acids derived from protein degradation into the precursor pool.</a> Neurochemistry International. 27, 407-416 (1995).</li>
<li>Ingvar, M. C., Maeder, P., Sokoloff, L., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+aging+on+local+rates+of+cerebral+protein+synthesis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Monographs+in+Neural+Sciences%22%5BJournal%5D)">The effects of aging on local rates of cerebral protein synthesis in rats.</a> Monographs in Neural Sciences. 11, 47-50 (1984).</li>
<li>Sare, R. M., Huang, T., Burlin, T., Loutaev, I., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+rates+of+cerebral+protein+synthesis+measured+in+vivo+in+a+mouse+model+of+Tuberous+Sclerosis+Complex%3A+unexpected+consequences+of+reduced+tuberin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Decreased rates of cerebral protein synthesis measured in vivo in a mouse model of Tuberous Sclerosis Complex: unexpected consequences of reduced tuberin.</a> Journal of Neurochemistry. 145, 417-425 (2018).</li>
<li>Liu, Z. H., Huang, T., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lithium+reverses+increased+rates+of+cerebral+protein+synthesis+in+a+mouse+model+of+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Lithium reverses increased rates of cerebral protein synthesis in a mouse model of fragile X syndrome.</a> Neurobiology of Disease. 45, 1145-1152 (2012).</li>
<li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+cerebral+protein+synthesis+in+fragile+X+syndrome%3A+studies+in+human+subjects+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%3A+Official+Journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Altered cerebral protein synthesis in fragile X syndrome: studies in human subjects and knockout mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 33, 499-507 (2013).</li>
<li>Qin, M., Kang, J., Burlin, T. V., Jiang, C., Smith, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postadolescent+changes+in+regional+cerebral+protein+synthesis%3A+an+in+vivo+study+in+the+FMR1+null+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+the+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Postadolescent changes in regional cerebral protein synthesis: an in vivo study in the FMR1 null mouse.</a> The Journal of Neuroscience: the Official Journal of the Society for Neuroscience. 25, 5087-5095 (2005).</li>
<li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((R-Baclofen+Reverses+a+Social+Behavior+Deficit+and+Elevated+Protein+Synthesis+in+a+Mouse+Model+of+Fragile+X+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">R-Baclofen Reverses a Social Behavior Deficit and Elevated Protein Synthesis in a Mouse Model of Fragile X Syndrome.</a> The International Journal of Neuropsychopharmacology. 18, pyv034(2015).</li>
<li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+protein+synthesis+in+a+knockin+mouse+model+of+the+fragile+X+premutation%5BTitle%5D)+AND+%22ASN+Neuro%22%5BJournal%5D)">Cerebral protein synthesis in a knockin mouse model of the fragile X premutation.</a> ASN Neuro. 6, (2014).</li>
<li>Smith, C. B., Kang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+protein+synthesis+in+a+genetic+mouse+model+of+phenylketonuria%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Cerebral protein synthesis in a genetic mouse model of phenylketonuria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 11014-11019 (2000).</li>
<li>Reivich, M., Jehle, J., Sokoloff, L., Kety, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+regional+cerebral+blood+flow+with+antipyrine-14C+in+awake+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of regional cerebral blood flow with antipyrine-14C in awake cats.</a> Journal of Applied Physiology. 27, 296-300 (1969).</li>
</ol>

למחברים אין קונפליקטים של עניין לגלות.

אנו מציגים שיטה כמותית לקביעת שיעורי האזור של סינתזה חלבון מוחין (rCPS) בvivo בבעלי חיים ניסיוניים. לשיטה זו יתרונות ניכרים בשיטות הקיימות: 1. מדידות מועצמות בחיה המתתעוררת, ולכן הן משקפות תהליכים מתמשכים במוח התפקודי. 2. מדידות מושמעות באמצעות כמותי אוטומטי מאפשר את היכולת לקבוע rCPS בכל האזורים ואזורי המשנה של המוח בו זמנית. 3. המודל הקינטי של השיטה לוקח בחשבון את האפשרות של מיחזור של חומצות אמינו ללא תווית שנגזר השפלה חלבון הרקמה ואת השפעתו על הבריכה קודמן עבור סינתזה חלבון6.
<p class="jove...

סינתזה חלבון הוא תהליך ביולוגי חשוב הנדרש עבור שינוי לטווח ארוך מסתגלת במערכת העצבים1. מעכב הסינתזה של חלבון חוסם לטווח ארוך אחסון זיכרון בשני חסרי חוליות ובעלי חוליות2. סינתזה של חלבון היא חיונית לתחזוקת השלבים המאוחרים של כמה צורות של הפוטנציאל לטווח ארוך (ltp) ודיכאון לטווח ארוך (בע מ)3, הישרדות עצבית במהלך פיתוח4, ולתחזוקה כללית של העצב וה חיבורים סינפטית5. מדידה של שיעורי סינתזה חלבון המוח עשוי להיות כלי חשוב שבו ללמוד שינויים גמישים, כמו גם הפרעות נוירותפתחותיות והפרעות הקשורות ללמידה וזיכרון.
פיתחנו שיטה לכמת שיעורי סינתזה חלבון מוחין בvivo בחיה ערה המציעה יתרונות הטבועות על פני טכניקות אחרות הערכת שיעורי vivo ex או ההכנות מחוץ לבית של רקמת המוח6. בראש ובראשונה, תחולתה למדידות במוח השלם בבעל חיים ער. זהו שיקול מפתח כי זה מאפשר מדידות עם מבנה סינפטית תפקוד במקום וללא חששות לאחר השפעות לאחר המוות. כמו-כן, הגישה האוטומטית הכמותית שאנו מעסיקים משיגה מידה גבוהה של לוקליזציה מרחבית. בעוד האנרגיה של 14ג הוא כזה שאנחנו לא יכולים להתאים את מכשיר המעקב ברמה subcellular או הסלולר, אנחנו יכולים למדוד את התעריפים בשכבות התא ואזורי מוח קטנים כגון גרעיני היפותלמי, עם בערך 25 יקרומטר רזולוציה7.
אתגר אחד של מדידות vivo עם רדיומשדרים היא להבטיח כי radiolabel נמדד הוא במוצר של תגובת הריבית ולא הגיבו מקודדד או מוצרים אחרים מטבולית המסומנים בתווית6. בחרנו L-[1-14ג]-leucine כמו חומצת אמינו מעקב כי הוא משולב בחלבון או במהירות מטבוליזם כדי 14CO2, אשר מדולל בבריכה גדולה של שיתוף בלתי מתויג2 במוח כתוצאה משיעור גבוה של חילוף חומרים אנרגיה8. יתר על כן, כל 14ג ' לא משולבים לחלבון קיים בעיקר בחינם [14ג]-leucine, אשר במשך התקופה 60 min ניסיוני, הוא כמעט לחלוטין נקי מן הרקמה6. חלבונים הם לאחר מכן מקובעים רקמה עם פורמלין ולאחר מכן שטף עם מים כדי להסיר כל חינם [14ג]-לאוצין לפני האדיגרפיה האוטומטית.
שיקול חשוב נוסף הוא הנושא של דילול הפעילות הספציפית של בריכת חומצת אמינו מקודמת על ידי חומצות אמינו ללא תווית הנגזרות רקמות פרוטפוליזיס. הצגנו כי בעכברוש מבוגר עכבר, על 40% של בריכת לאוצין מקודמן לסינתזה חלבון במוח מגיע חומצות אמינו נגזר התמוטטות חלבונים6. זה חייב להיות כלול בחישוב של שיעורי האזור של סינתזה חלבון מוחין (rCPS) ויש לאשר במחקרים שבהם קשר זה עשוי להשתנות. הבסיס התיאורטי וההנחות של השיטה הוצגו בפרוטרוט במקומות אחרים6. במאמר זה, נתמקד בסוגיות הפרוצדוראליות של יישום מתודולוגיה זו.
שיטה זו הועסק לקביעת rcps בסנאים הקרקע9, כבשים10, רזוס קופים11, חולדות12,13,14,15,16 , מיכל בן 17 , מיכל בן 18 , מיכל בן 19 , מיכל בן 20 , 21, מודל העכבר של מורכב טרשת מורכבת22, מודל עכבר של תסמונת X שביר23,24,25,26, שברירי X עכברים מוטציה27, ו מ העכבר דגם של פנילקטונוריה28. בכתב יד זה, אנו מציגים את ההליכים למדידה של Rssl עם vivo האוטומטי-[1-14ג]-שיטת הלוצין. אנו מציגים את השוכרים באזורי. המוח של עכבר שליטה ער אנו גם להדגים כי בניהול vivo של anisomycin, מעכב של תרגום, ביטול סינתזה חלבון במוח.

<table><tbody><tr><td>עכברים</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>003024</td><td>Fmr1 נוקאאוט זוגות רבייה</td></tr><tr><td>Anisomycin</td><td>Tocris Bioscience</td><td>1290</td><td></td></tr><tr><td>Microhematocrit Tubes</td><td>Drummond Scientific</td><td>1-000-3200-H</td><td>צינורות נימיים</td></tr><tr><td>Critoseal איטום צינורות נימיים</td><td>Leica Microsystems</td><td>39215003</td><td>איטום מרק</td></tr><tr><td>זכוכית מוסיף</td><td>Agilent</td><td>5183-2089</td><td>המשמש לאיסוף דגימות דם</td></tr><tr><td>Digi-Med Blood Pressure Analyzer</td><td>Micro-Med Inc.</td><td>מנתח לחץ דם</td> <td>BPA-400</td></tr><tr><td>Bayer Breeze 2 מערכת ניטור סוכר בדם</td><td>Bayer Breeze</td><td>9570A</td><td>מד סוכר</td></tr><tr><td>מזרק אטום לגזים</td><td>המילטון ושות'.</td><td>1710</td><td>מזרק זכוכית טוברקולין</td></tr><tr><td>HeatMax HotHands-2 מחממי ידיים</td><td>HeatMax</td><td>דגם HH2</td><td>רפידות חימום</td></tr><tr><td>Heparin Lock Flush Solution</td><td>Fresenius Kabi USA, LLC</td><td>504505</td><td>heparin מלח</td></tr><tr><td>מיכל בעלי חיים ברור</td><td>Instech</td><td>MTANK / W</td><td>מתחם בעלי חיים</td></tr><tr><td>קשירה קפיץ</td><td>Instech</td><td>PS62</td><td>צינור קטטר / חיבור מכרסם</td></tr><tr><td>מסתובב</td><td>Instech</td><td>375/25</td><td>ווים לקשירת קפיץ</td></tr><tr><td>זרוע מסתובבת ותושבת</td> ווים <td>Instech</td><td>SMCLA</td><td>לסיבוב ומארז בעלי חיים</td></tr><tr><td>כפתור קשירה</td><td>Instech</td><td>VAB62BS/22</td><td>מתחבר לתחתית קשירה קפיצית</td></tr><tr><td>צינור נירוסטה</td><td>מיוצר בבית</td><td>N/A</td><td>המשמש לנחש צנתרים דרך עכבר</td></tr><tr><td>Matrx VIP 3000</td><td>Matrx</td><td>91305430</td><td>וופורייזר איזופלורן</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Stoelting Co.</td><td>50207</td><td>סופח איזופלורן/הלוטן</td></tr><tr><td>קוצץ</td><td>גימור אוסטר</td><td>דגם 59</td><td></td></tr><tr><td>ווי עור כירורגיים</td><td>תוצרת בית (??)</td><td>לא ישים (??)</td><td></td></tr><tr><td>0.9% נתרן כלורי מלח</td><td>APP Pharmaceuticals LLC</td><td>918610</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>מיקרומספריים</td> כלי <td>מדע עדינים</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>תפרי משי כירורגיים אחדים</td><td>AD כירורגי</td><td>#S-S618R13</td><td>6-0 USP, </td></tr><tr><td>צינורות פוליאתילן PE-8</td> שאינם נספגים <td>SAI Infusion Technologies</td><td>PE-8-25</td><td></td></tr><tr><td>מזרק</td><td>בקטון דיקינסון ושות'.</td><td>309659</td> צינורות פוליאתילן <td>1 סמ"ק/מ"ל</td></tr><tr><td>PE-10</td><td>קליי אדמס</td><td>427400</td><td></td></tr><tr><td>MCID Analysis</td><td>Imaging Research Inc.</td><td>גרסה 7.0</td><td>ניתוח צפיפות אופטית</td></tr><tr><td>שקופיות מצופות ג'לטין (75x25 מ"מ)</td> <td>FD Neurotechnologies</td><td>PO101</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM1850</td><td></td></tr><tr><td>Super RX-N סרט רנטגן רפואי</td><td>Fuji</td><td>47410-19291</td><td></td></tr><tr><td>היפרקסטות (8x10 אינץ')</td> <td>Amersham Pharmacia Biotech</td><td>11649</td><td></td></tr> <tr><td>[1-14C] לאוצין</td><td>Moravek</td><td>MC404E</td><td></td></tr><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה</td><td>Sarstedt Aktiengesellschaft & Co.</td><td>72.692.005</td><td>משמש לדה-פרוטאיניזציה של דגימות דם</td></tr><tr><td>פיפטה פסטר זכוכית</td><td>Wheaton</td><td>357335</td><td></td></tr><tr><td>צמר זכוכית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>18421</td><td></td></tr><tr><td>חנקן</td><td>NIH מרכז אספקה</td><td>6830009737285</td><td></td></tr><tr><td>נוזל נצנוץ</td><td>CytoScint</td><td>882453</td><td></td></tr><tr><td>מונה סינטלציה נוזלי</td><td>Packard Tri-Carb</td><td>2250CA</td><td></td></tr><tr><td>מנתח חומצות אמינו</td><td>Pickering Laboratories</td><td>Pinnacle PCX</td><td></td></tr><tr><td>HPLC unit</td><td>Agilent Technologies</td><td>1260 Infinity</td><td>כולל 1260 משאבה ביו-אינרטית</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>M650</td><td></td></tr><tr><td>חומצה סולפוסליצילית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MKBS1634V</td><td>5-sulfosalicylic acid dihydrate</td></tr><tr><td>Norleucine</td><td>Sigma</td><td>N8513</td><td></td></tr><tr><td>1.0 N HCl</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H9892</td><td></td></tr><tr><td>[H3]לאוצין</td><td>Moraevk</td><td>MC672</td><td></td></tr><tr><td>צינור פלקון</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td></td><td>339652 50 מ"ל צינורות צנטריפוגה חרוטיים</td></tr><tr><td>שעון עצר</td><td>Heuer Microsplit</td><td>דגם 1000</td><td>1/100 דקות</td></tr><tr><td>פתרון המתת חסד</td><td>וטרינר אחד</td><td>H6438</td><td></td></tr><tr><td>נורת'רן לייט דיוק אימינטור</td><td>מחקר הדמיה בע"מ</td><td>דגם B95</td><td>קופסת אור פלורסנט</td></tr><tr><td>Micro-NIKKOR 55 מ"מ f/2.8</td><td>מצלמת CDD</td> <td>של Nikon</td><td>1442</td></tr></tbody></table>

השיטה הכמותית האוטומטית לקביעת שיעורי הסינתזה של חלבון מוחי בvivo

Quantitative Autoradiographic Method for Determination of Regional Rates of Cerebral Protein Synthesis In Vivo

סינתזה חלבון נדרש לפיתוח ותחזוקה של תפקוד עצבי והוא מעורב שינויים גמישים במערכת העצבים. יתר על כן, הוא חשב כי דיסתקנה של סינתזה חלבון במערכת העצבים עשוי להיות פנוטיפ ליבה בכמה הפרעות התפתחותיות. מדידה מדויקת של שיעורי סינתזה חלבון מוחין במודלים בעלי חיים חשוב להבנת הפרעות אלה. השיטה שפיתחנו תוכננה להיות מיושמת על חקר בעלי חיים מתעוררים ומתנהגים. זוהי שיטת אדיקסוגרפית כמותית, כך שהיא יכולה להניב שיעורי בכל אזורי המוח בו זמנית. השיטה מבוססת על שימוש בחומצת אמינו מנותב, L-[1-14ג]-לאוצין, ודגם קינטי של התנהגות ה-L-לאוצין במוח. בחרנו L-[1-14ג]-לאוצין כעוקב כי זה לא מוביל למוצרי חילוף חומרים חיצוניים עם תוויות. הוא משולב בחלבון או במהירות מטבוליזם כדי להניב 14CO2 אשר מדולל בבריכה גדולה של ושות בלתי מתויג2 במוח. השיטה ואת המודל גם לאפשר את התרומה של לאוצין בלתי מסומן נגזר רקמות פרוטפוליזיס של רקמת הבריכה מקודע לסינתזה חלבון. השיטה יש את הרזולוציה המרחבית כדי לקבוע את שיעורי סינתזה החלבון בתא ושכבות נוירופיל, כמו גם היפותלמי וגרעיני עצבי הגולגולת. כדי לקבל נתונים כמותיים אמין ולאחר, חשוב לדבוק בפרטים פרוצדורליים. כאן אנו מציגים את ההליכים המפורטים של השיטה האוטומטית הכמותית-[1-14ג]-שיטת לאוצין לקביעת שיעורי הסינתזה של החלבון בvivo.

כאן אנו מראים ניסוי מייצג הממחיש את ההשפעות של הממשל הקודם של חלבון סינתזה מעכבי על rCPS. Anisomycin בתמיסת מלח רגיל היה מנוהל מבוגר C57/BL6 זכר פראי-סוג העכבר תת-עורי (100 mg/ק"ג) 30 דקות לפני החניכה של הנחישות rCPS. ההשפעות של הטיפול anisomycin לעומת הרכב מטופלים בקרת בעל חיים להראות כי rCPS הוא כמעט בלתי ניתן לגילוי בעכבר anisomycin מטופלים (איור 4). נתונים אלה מייצגים אימות כי vivo האוטומטי-[1-14ג]-שיטת לאוצין מודד שיעורי סינתזה של חלבון במוח.<...

סינתזה חלבונים היא תהליך ביולוגי קריטי עבור תאים. במוח, זה נדרש עבור שינויים גמישים. מדידת שיעורי סינתזה של חלבון במוח שלמה מחייבת שיקולים מתודולוגיים זהירים. כאן אנו מציגים את L-[1-14ג]-השיטה האוטומטית לאוצין כמותי לקביעת שיעורי הסינתזה של חלבון מוחי בvivo.

השיטה הכמותית האוטומטית לקביעת שיעורי הסינתזה של חלבון מוחי בVivo

Protein synthesis is required for development and maintenance of neuronal function and is involved in adaptive changes in the nervous system. Moreover, it ...

מדידה של שיעורים אזוריים של סינתזת חלבון במוח יכולה לעקוב אחר התגובה של המוח לשינויים ארוכי טווח כאלה המתרחשים במהלך התפתחות ונוירופלסטיות. לשיטה שלנו יש את היתרונות כי המדידות הן כמותיות לחלוטין, והן נעשות בבעלי החיים המתנהגים ערים. הטכניקה האוטוביוגרפית הכמותית מאפשרת מדידות בכל אזורי המוח בו זמנית.הדגימה של ההליך תהיה אניטה טורוסיאן, עמיתה לתואר ראשון במעבדה שלי, ונטינג'יאן הואנג, מנתח החיות שלנו. התחל הליך זה עם הכנה לניתוח כמפורט בפרוטוקול הטקסט. פעם אחת על שלב הניתוח, להשתמש במספריים כירורגיים כדי להפוך חתך סנטימטר אחד מן החלק המדיאלי העליון של הירך השמאלית rostrally לכיוון קו האמצע חושף את עורק הירך ואת וריד.לסגת עור רופף עם ווים עור כירורגי מעל משני צדי החתך. לאבטח את ווים העור על ידי הקלטת אותם לשלב הניתוח. יש למרוח 0.9% נתרן כלורי סטרילי על האזור החשוף כדי לשמור על לחות נאותה.השתמש מטלפים כדי לנתח קהה, הפרדת רקמת החיבור סביב קטע קטן של עורק הירך והווריד. בזהירות להפריד את העורק ואת וריד. עכשיו להשתמש במקלות להשחיל גדיל אחד של תפר נספג תחת וריד הירך ועורק בנקודה הצדדית ביותר של החתך.משוך את התפר באמצע הדרך כך הקצוות הם אפילו. בנקודה פרוקסימלית יותר למפשעה, השתמש במלקיחות כדי להשחיל תפר שני מתחת לווריד הירך בלבד. לקשור בעדינות חצי קשר שישמש להגבלת זרימת הדם.בנקודה בין גדיל A ו strand B, להשתמש מדפים להשחיל תפר שלישי תחת רק את וריד הירך. לקשור בעדינות קשר מלא שישמש להגבלת זרימת הדם. תיזהר לא לקרוע את הוריד.משוך בעדינות על גדיל B כדי להגביל את זרימת הדם. השתמש בהמוסטט כדי למשיכה עדינה של גדיל B כדי לשמור על הגבלת דם. עכשיו, לחבר את הקצה הלא חתוך של צינורות PE למחט מד 32 ומזרק מילימטר אחד מלא מלוחים heparinized.לשטוף את הקטטר כדי להסיר בועות אוויר. חותכים חור קטן באזור המוגבל של וריד הירך עם מספריים מיקרו, ובזהירות להכניס את הקצה הזוויתי של צינורות PE שמונה סמוק לכיוון גדיל B.Once מוכנס, לשחרר את המתח של גדיל B ולהנחות את הקטטר עוד יותר במעלה הוריד. הדקו את הגדיל B סביב הוריד המכיל את הקטטר.באמצעות גדיל C, לקשור קשר נוסף סביב הקטטר. ודא קשר זה אינו לוכד את עורק הירך. בעדינות למשוך בחזרה על חבית מזרק כדי למלא חלקית את הצינורות בדם כדי להבטיח כי קטטר הושתל כראוי לפני החדרת PE 10 קטטר לתוך עורק הירך השמאלי באמצעות אותו הליך.לאחר שגם וריד הירך וגם קטטרים עורקים אובטחו, לקשור גדיל A לתוך קשר סביב שני קטטרים. לאחר חיתוך כל התפרים העודפים והסרת ווים בעור, לשטוף את קטטר העורקים עם מלוחים heparinized כדי למנוע קרישה. לצרוב את הקצוות של שני קטטרים כדי ליצור חותם.מניחים את העכבר במצב נוטה ולעשות חתך קטן בבסיס הצוואר החלת מלוחים על האזור החשוף. הכנס מוט מתכת חלול תת-מדרמלית מהחתך בצוואר לחתך הירך. נחש את הקטטרים דרך המוט החלול ומן החתך בצוואר.לאחר הסרת המוט החלול, סגור את החתך בירך עם תפר ואחריו משכך כאבים לאחר ניתוח. נחש את הקטטרים דרך צינור חלול גמיש 30 ס"מ כדי להפוך את קפיץ לקשור לפני תופר את הכפתור של קפיץ לקשור מתחת לעור ואחריו משכך כאבים לאחר הניתוח. להזיז את העכבר לתוך מיכל גלילי ברור עם הר מסתובב זרוע כדי לשכן את העכבר במהלך תקופת ההחלמה.מניחים יד חמה יותר מתחת למיכל כדי לשמור על העכבר חם. ודא שהעכבר נמצא במצב פיזיולוגי תקין בתחילת הניסוי על ידי לקיחת דגימות כמפורט בפרוטוקול הטקסט. כדי לנהל את מכשיר המעקב דרך הווריד, השתמש במחבר Y עם מזרק המחזיק את מכשיר המעקב לאוצין המסומן C 14 המחובר לזרוע אחת, ומזרק עם 100 עד 200 מיקרוליטרים של תמיסת מלח סטרילית כדי לשטוף את הקו הווריד המחובר לזרוע השנייה.חבר את מחבר ה- Y לקו הווריד. ליזום את המחקר על ידי בו זמנית מתחיל שעון להפסיק, הזרקת tracer, ואיסוף דגימות דם עורקי מתוזמן. לשטוף את הקו הווריד עם מלוחים מיד לאחר ההזרקה.לאסוף דגימות דם אחד עד שבע ברציפות לאורך שתי הדקות הראשונות של הניסוי באותו אופן. לאחר איסוף שבע הדגימות, לאסוף 30 microliters של דם חלל מת לפני כל מדגם שנותר. דגימות שמונה עד 14 נאספות בשלוש, חמש, 10, 15, 30, 45 ו-60 דקות בהתאמה.בשלב מסוים במהלך הניסוי, לעבד שלושה צינורות עבור סטנדרטים פנימיים המכילים לצין טריטי ונורלאוקין כמפורט בפרוטוקול הטקסט. כדי לכמת ריכוזי לאוצין פלזמה, השתמש במערכת HPLC עם עמודת חילופי חיתוך נתרן ופרסם נגזרת עמודה עם אורתופתללדהיד וזיהוי קמח. האזור מתחת לעקומה לאוצין הוא פרופורציונלי לריכוז של לאוצין המדגם.השתמש בהשוואה עם תקנים לכמת ריכוזי לאוצין בדגימות. לאחר מכן השתמש מונה scintillation נוזלי לכמת התפוררויות לדקה של טריטיום ו C 14 בדגימות הפלזמה. השתמש בריכוזים אלה כדי לבנות את עקומת האישור של C 14 שכותרתו לאוצין מהמחזור ואת מסלול הזמן של הפעילות הספציפית שלה בפלזמה העורקית.מתוך הגרף, לחשב את משולב C 14 שכותרתו לאוצין פעילות ספציפית בפלזמה העורקית. כדי לבצע אוטוביוגרפיה כמותית, להכין את חלקי המוח 20 מיקרון בעובי. חלק המוח באמצעות קריוסטט במינוס 20 מעלות צלזיוס.הפשר חלקים על שקופיות מצופות ג'לטין. לאחר קיבעון של שקופיות, סדר שקופיות בקלטת סרט רנטגן יחד עם קבוצה של תקני מתיל מתאקרילאט מכוילים בעבר C 14. בחדר חשוך ותחת אור בטוח, מניחים חתיכת סרט רנטגן, צד אמולסיה למטה על הצדדים והסטנדרטים.אוטמים את הקלטת ומ מניחים אותה בשקית שחורה להחלפה. לפתח את הסרטים על פי הוראות היצרן. פיתוח אוטומטי של סרטים אינו מומלץ מכיוון שהרקע עשוי להיות לא אחיד ועשוי להשפיע על הכימות.לבנות עקומת כיול של צפיפות אופטית לעומת ריכוז רקמה C 14 בהתבסס על ערכי הצפיפות האופטית של סט התקנים המכוילים בסרט. התאם נתונים אלה למשוואה פולינומית. משוואה פולינומית מדרגה שנייה או שלישית מתאימה מאוד.כדי לנתח אזורי מוח ספציפיים, אתר את אזור העניין או את ההשקעה בשישה עד שמונה חלקים בהשוואה לאתלי המוח. רשום את הצפיפות האופטית של הפיקסלים בתוך דיסק ההשקעה בכל המקטעים. בהתבסס על עקומת הכיול, מחשב את ריכוז הרקמה C 14 בכל פיקסל.לבסוף, לחשב את המחירים האזוריים של סינתזת חלבון מוחי מן הרקמה הממוצעת C 14 ריכוז בהדרת ההשקעה בחלק האינטגרלי של היחסים של ריכוזי פלזמה עורקית של לאוצין ללא תווית ותיוג לפעמים t ו lamba. השבריר של לאוצין בבריכת מבשר הרקמות שמגיע מהפלזמה. להלן תמונות מייצגות של בעל חיים שטופל ברכב בהשוואה לחיה שטופלה באניסומיצין, מעכב סינתזת חלבונים.שיעורי סינתזת החלבון פרופורציונליים לרמת החושך בתמונה. אניסומיצין מפחית באופן דרסטי את שיעורי נמדד של סינתזת חלבון המוח המציין את הספציפיות של שיטה זו. כאן, אוסטרדיוגרמות דיגיטציה מוצגות מעכבר התנהגות ער ברמה של ההיפוקמפוס וההיפותלמוס.באזורים הכהים יותר יש שיעורים אזוריים גבוהים יותר של סינתזת חלבונים מוחיים. מוצג כאן הוא אוסטרדיוגרמה דיגיטציה מעכבר בקרת התנהגות ערה ברמה של ההיפוקמפוס הגבי. שיעורים של סינתזת חלבון מוחי מצופים בצבע בתמונות על פי סרגל הצבע.בעת ניסיון הליך זה, חשוב להיות בטוחים כי בעלי חיים נמצאים במצב פיזיולוגי תקין במהלך המדידות. המתודולוגיה שלנו כבר הוכיחה פירוק של סינתזת חלבונים בהפרעות נוירו-התפתחותיות כמו תסמונת X שברירית. זה עשוי להיות גם סמן שימושי עבור שינויים ניווניים ותנאים כמו מחלת אלצהיימר.ניתן להשתמש בשיטת סינתזת החלבון בשילוב עם היסטוכימיה חיסונית בחלקים מתחלפים כדי לתאם שינויים בסינתזת חלבונים עם שינויים אזוריים בחלבונים ספציפיים. לסיכום, שיטת הלוצין האוטוביוגרפית הכמותית L-1 C 14 אידיאלית לקביעה מדויקת של שיעורים אזוריים של סינתזת חלבונים ב- vivo. הוא מציע יתרונות ניכרים מבחינת דיוק ויישום שלו לתנאי vivo.

quantitative-autoradiographic-method-for-determination-regional-rates

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מדגים טכניקה במבחנה להערכת ספיגת חומצות אמינו על ידי תאי סטרומה שמקורם במח עצם. מובילי חומצות אמינו תלויי Na+ מתווכים את ספיגת חומצות האמינו המסומנות בקרינה בתוך התאים, והספיגה התאית נאמדת על ידי מדידת הרדיואקטיביות.

בדיקת ספיגת חומצות אמינו עם תווית רדיופונית לכימות ספיגה תאית של חומצות אמינו

טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים של בעלי חיים קטנים מאפשרת להעריך את שני מצעי האנרגיה העיקריים של המוח: גלוקוז וקטונים. בשיטה הנוכחית, 11C-acetoacetate ו-18F-fluorodeoxyglucose מוזרקים ברצף בכל בעל חיים, וספיגתם נמדדת כמותית באזורי מוח ספציפיים שנקבעו מתמונות התהודה המגנטית.

פרוטוקול PET-MRI Dual Tracer למדידה כמותית של קליטת מצעי אנרגיה אזוריים במוח בחולדה

סחר קרום עצבי דינמי שולט זמינה פלזמה קרום חלבון ומשמעותי עצבית משפיע. נכון להיום, זה כבר מאתגר למדוד סחר endocytic עצבי בנוירונים בוגרים. כאן אנו מתארים שיטה יעילה מאוד, כמוני למדידת שינויים מהירים בביטוי חלבון פני השטח vivo לשעבר בפרוסות מוח חריפות.

המוח פרוס Biotinylation:<em&gt; Ex Vivo</em&gt; גישה למדוד סחר חלבון פלזמה ממברנה אזור ספציפי בתאי עצב בוגרים

כאן אנו מציגים פרוטוקול לתיאור לוקליזציה של קולטני אנגיוטנסין II מסוג 1 במוח החולדה על ידי אוטורדיוגרפיה כמותית, דנסיטומטרית, קולטן במבחנה באמצעות אנלוגי יוד-125 של אנגיוטנסין II.

קולטן autoradiography פרוטוקול עבור ויזואליזציה המרוכזת של אנגיוטנסין II רצפטורים

אנו מציגים פרוטוקול למדידת קליטת [14C]-iodoantipyrine (IAP) ולהערכת ההפעלה של סובסטרטים עצביים המעורבים בכאב מרכזי לאחר שבץ מוחי (CPSP) במודל מכרסמים.

מדידות Autoradiographic של [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine ב במוח חולדה בעקבות מרכזי פוסט-שבץ כאב

השיטה של autoradiography נמצא בשימוש שגרתי ללמוד קשירה של radioligands על מקטעים של רקמות לקביעת פרמקולוגיה איכותי או כמותי.

Autoradiography כאל שיטה פשוטה ורבת -עוצמה עבור ויזואליזציה ואפיון של מטרות תרופתי

כאן, אנו מתארים גישה כמותית לקביעת ההתפלגות של חלבון סינפטית יחסית חלבון סמן באמצעות צביעת immunofluorescence ', ' מיקרוסקופיה קונפוקלית, וניתוח מבוססת מחשב.

לכימות ההתפלגות הטרוגנית של חלבון סינפטיים במוח העכבר בעזרת Immunofluorescence

כאן, אנו מציגים פרוטוקול העושה שימוש בצבעים ליד אינפרא-אדום בשילוב עם האימונוהיסטוכימיה וסריקה ברזולוציה גבוהה כדי לאשר את החלבונים באזורי המוח.

שימוש בקרוב-אינפרא אדום פלואורסצנטית ברזולוציה גבוהה סריקה למדוד חלבון הביטוי במוח מכרסם

רמת החלבון של נוזל השדרה הגבוה יכול להיות תוצאה של דיפוזיה של חלבון פלזמה על פני מחסום דם-מוח שונה או סינתזה התוך. פרוטוקול בדיקה מיטבי מוצג במאמר זה, המסייע להפלות את שני המקרים ומספק מדידות כמותית של חלבונים מסונתז באופן פנימי.

מדידה כמותית של מתוך מסונתז חלבונים בעכברים

שיטה זו מציגה טכניקה פשוטה לזיהוי של שחרור מונואמין אנדוגני באמצעות פרוסות מוח חריפות. ההתקנה משתמשת בלוח 48 באר המכיל מחזיק רקמות לשחרור מונואמין. מונואמין ששוחרר מנותח על ידי HPLC יחד עם זיהוי אלקטרוכימי. בנוסף, טכניקה זו מספקת שיטת סינון לגילוי סמים.

בסיס בסיס צלחת למדידת שחרור מונואמין אנדוגני בפרוסות מוח חריפות

הפרוטוקול הנוכחי מתאר ומשווה את ההליך לביצוע ניתוח של אזור מלא או תת-אזור עניין של מקטעי מוח של עכברי sagittal כדי לכמת את עומס העמילואיד-בטא במודל העכבר המהונדס APP/PS1 של מחלת אלצהיימר.

כימות מלא לעומת תת-אזורי של עומס עמילואיד-בטא על מקטעי מוח של עכבר

למד שיטת אוטורדיוגרפיה כמותית לבדיקת שיעורי סינתזת חלבון אזוריים במוח בחיות ערות ופעילות. שיטה זו מאפשרת מדידות מדויקות בו-זמנית באזורים שונים במהלך פיתוח ונוירופלסטיות.

השיטה הכמותית האוטומטית לקביעת שיעורי הסינתזה של חלבון מוחי בVivo

גלה סרטונים נוספים