Name: הדמיה תלת מימדית של רקמה נושאת גידול באמצעות הלבנה איטרטיבית מרחיבה את גישת המולטיפלקסיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T13:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: חקור הדמיה תלת מימדית של רקמה נושאת גידול באמצעות הלבנה איטרטיבית. פרוטוקול זה מאפשר אפיון ארכיטקטורת גרורות פריטונאליות ומספק תובנות לגבי מיקרו-סביבת הגידול לחקר אימונותרפיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Anderson, N. M., Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment.</a> Curr Biol. 30 (16), R921-R925 (2020).</li>
<li>Li, Z., Li, J., Bai, X., Huang, X., Wang, Q. Tumor microenvironment as a complex milieu driving cancer progression: A mini-review. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLi%2C+Z+%22Clin+Transl+Oncol%22">Clin Transl Oncol</a>. , (2024).</li>
<li>Fridman, W. H., Zitvogel, L., Sautes-Fridman, C., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+contexture+in+cancer+prognosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">The immune contexture in cancer prognosis and treatment.</a> Nat Rev Clin Oncol. 14 (12), 717-734 (2017).</li>
<li>Roma-Rodrigues, C., Mendes, R., Baptista, P. V., Fernandes, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+tumor+microenvironment+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Targeting tumor microenvironment for cancer therapy.</a> Int J Mol Sci. 20 (4), 840(2019).</li>
<li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence%3A+A+powerful+tool+in+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence: A powerful tool in cancer immunotherapy.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3086(2023).</li>
<li>Bollhagen, A., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+tissue+imaging+in+precision+oncology+and+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed tissue imaging in precision oncology and translational cancer research.</a> Cancer Discov. 14 (11), 2071-2088 (2024).</li>
<li>Jin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+spatial+transcriptomics+and+its+applications+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Advances in spatial transcriptomics and its applications in cancer research.</a> Mol Cancer. 23 (1), 129(2024).</li>
<li>Kashyap, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+tumor+heterogeneity%3A+From+data+acquisition+to+metric+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Quantification of tumor heterogeneity: From data acquisition to metric generation.</a> Trends Biotechnol. 40 (6), 647-676 (2022).</li>
<li>Chang, Q., Hedley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+applications+of+flow+cytometry+in+solid+tumor+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Emerging applications of flow cytometry in solid tumor biology.</a> Methods. 57 (3), 359-367 (2012).</li>
<li>Zhang, L., et al. Single-cell analyses inform mechanisms of myeloid-targeted therapies in colon cancer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+L+%22Cell%22">Cell</a>. 181 (2), 442-459.e29 (2020).</li>
<li>Wang, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+predictors+of+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatial predictors of immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> Nature. 621 (7980), 868-876 (2023).</li>
<li>Maestri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+proximity+of+tumor-immune+interactions+predicts+patient+outcome+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Spatial proximity of tumor-immune interactions predicts patient outcome in hepatocellular carcinoma.</a> Hepatology. 79 (4), 768-779 (2024).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tumor+microenvironment+in+cancer+progression+and+therapeutic+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Med%22%5BJournal%5D)">Role of tumor microenvironment in cancer progression and therapeutic strategy.</a> Cancer Med. 12 (10), 11149-11165 (2023).</li>
<li>Veninga, V., Voest, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+organoids%3A+Opportunities+and+challenges+to+guide+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor organoids: Opportunities and challenges to guide precision medicine.</a> Cancer Cell. 39 (9), 1190-1201 (2021).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+3d+atlas+of+state+transitions+and+immune+interaction+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multiplexed 3d atlas of state transitions and immune interaction in colorectal cancer.</a> Cell. 186 (2), 363-381.e19 (2023).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+An+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Ibex: An iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nat Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ibex%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Ibex: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Van Baal, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histophysiology+and+pathophysiology+of+the+peritoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">The histophysiology and pathophysiology of the peritoneum.</a> Tissue Cell. 49 (1), 95-105 (2017).</li>
<li>Bridda, A., Padoan, I., Mencarelli, R., Frego, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+mesothelioma%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22MedGenMed%22%5BJournal%5D)">Peritoneal mesothelioma: A review.</a> MedGenMed. 9 (2), 32(2007).</li>
<li>Demuytere, J., Ernst, S., Van Ovost, J., Cosyns, S., Ceelen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+immune+microenvironment+in+peritoneal+carcinomatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The tumor immune microenvironment in peritoneal carcinomatosis.</a> Int Rev Cell Mol Biol. 371, 63-95 (2022).</li>
<li>Wang, Q., et al. Heterogeneity of tertiary lymphoid structures predicts the response to neoadjuvant therapy and immune microenvironment characteristics in triple-negative breast cancer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang%2C+Q+%22Br+J+Cancer%22">Br J Cancer</a>. , (2024).</li>
<li>Kepenekian, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+mesothelioma%3A+Systematic+review+of+hyperthermic+intraperitoneal+chemotherapy+%28HIPEC%29+protocol+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Peritoneal mesothelioma: Systematic review of hyperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC) protocol outcomes.</a> Indian J Surg Oncol. 14 (Suppl 1), 39-59 (2023).</li>
<li>Mcquade, C., Renton, M., Chouhan, A., Macdermott, R., O'brien, C. Review of imaging peritoneal disease and treatment. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcquade%2C+C+%22Can+Assoc+Radiol+J%22">Can Assoc Radiol J</a>. , (2024).</li>
<li>Kenerson, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+slice+culture+as+a+biologic+surrogate+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor slice culture as a biologic surrogate of human cancer.</a> Ann Transl Med. 8 (4), 114(2020).</li>
<li>Arrizabalaga, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+slice+culture+system+for+ex+vivo+immunotherapy+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor slice culture system for ex vivo immunotherapy studies.</a> Methods Cell Biol. 189, 55-69 (2024).</li>
<li>Neumeister, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+effect+of+preanalytic+cold+ischemic+time+on+protein+expression+in+breast+cancer+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of effect of preanalytic cold ischemic time on protein expression in breast cancer tissues.</a> J Natl Cancer Inst. 104 (23), 1815-1824 (2012).</li>
<li>Panchuk-Voloshina, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alexa+dyes%3A+A+series+of+new+fluorescent+dyes+that+yield+exceptionally+bright%2C+photostable+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Alexa dyes: A series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 47 (9), 1179-1188 (1999).</li>
<li>Rajaram, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+strategies+to+capture+single-cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Sampling strategies to capture single-cell heterogeneity.</a> Nat Methods. 14 (10), 967-970 (2017).</li>
<li>Bella, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+peritoneal+carcinomatosis+to+develop+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Mouse models of peritoneal carcinomatosis to develop clinical applications.</a> Cancers (Basel). 13 (5), 963(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor Plus 750 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A30105</td><td>F-actin dye</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 אנטי אנושי CD206 (MMR) נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>321114</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 אנטי אנושי CD31 נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>303110</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 אנטי אנושי נוגדן CD4</td> נוגדן <td>BioLegend</td><td>300519</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Alexa Fluor 488 נוגדן HLA-DR אנטי אנושי</td><td>נוגדן BioLegend</td><td>307656</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Alexa Fluor 488 נוגדן CD44 אנושי נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>103016</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 נוגדן CD45 אנטי אנושי</td><td>BioLegend</td><td>304060</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 נוגדן נגד קלרטינין [EP1798]</td><td>Abcam</td><td>ab214244</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 נוגדן CD3 אנטי אנושי</td><td>נוגדן</td> <td>BioLegend</td><td>300416</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 נוגדן CD8 אנטי אנושי נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>344726</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 נוגדן פודופלאנין אנטי אנושי</td><td>נוגדן BioLegend</td><td>337007</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 נוגדן נגד וימנטין</td><td>BioLegend</td><td>677807</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Alexa Fluor 647 CD68 נוגדן (KP1)</td><td>סנטה קרוז</td><td>sc-20060AF647</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 750 ציטוקרטין, נוגדן פאן (AE-1/AE-3)</td> <td>נובוס</td><td>NBP2-33200AF750</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Alexa Fluor 750 אנושי שריר חלק אקטין</td><td>נוגדן R& D</td><td>IC1420S</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 CD20 נוגדן חד שבטי (L26) eBioscience</td><td>Thermo Fisher</td><td>53-0202-82</td><td>נוגדן</td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה-אנטימיקוטית</td><td>Gibco</td><td>15240096</td><td>תוסף קציר בינוני</td></tr><tr><td>BioMed Clear Resin (Form 3)</td><td>FormLabs</td><td>RS-F2-BMCL-01</td><td>שרף המשמש לפלטפורמה + צלחת דגירה</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906-500g</td><td>רכיב פתרון חסימה</td></tr><tr>חומר <td>אקרילי יצוק בעובי</td><td></td><td></td> 1/32 אינץ' <td>המשמש לחיתוך מחוון</td></tr><tr><td>CleanStation DT3&nbsp;</td>עיבוד פוסט <td>Stratasys</td><td>DT3</td><td>לכוונון גובה ומיכל מכסה חיצוני</td></tr><tr><td>, דגימה&nbsp;</td><td>McKesson</td><td>870203</td><td>העברת רקמה משולחן הכנה לשולחן הכנה</td></tr><tr><td>CorelDraw&nbsp;</td>תוכנת <td>CorelDRAW</td><td></td><td>להכנת קובץ העיצוב מבוסס וקטור לחיתוך בלייזר</td></tr><tr><td>Cytofix</td><td>BD Bioscience</td><td>554655</td><td>צלחת קיבוע</td></tr><tr><td>15 ס"מ</td><td>צלחת 353025 פלקון</td><td></td><td>בשימוש במהלך ההרכבה</td></tr><tr><td>צלחת 35 מ"מ מס' 1.5 כיסוי 14 מ"מ קוטר זכוכית לא מצופה</td><td>Matek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td>צלחת הדמיה</td></tr><tr><td>DMEM (ללא גלוקוז)</td><td>Gibco</td><td>11966025</td><td>קציר בינוני</td></tr><tr><td>Fc בלוק</td><td>BD Bioscience</td><td>564220</td><td>רכיב פתרון חסימה</td></tr><tr><td>טופס 3B +</td> <td>Formlabs</td><td>טופס 3B +</td> <td>מדפסת המשמשת לפלטפורמה + צלחת דגירה</td></tr><tr><td>Form Cure</td><td>Formlabs</td><td>FH-CU-01</td><td>עיבוד פוסט לפלטפורמה + צלחת דגירה</td></tr><tr><td>טופס Wash</td><td>Formlabs</td><td>FH-WA-01</td><td>עיבוד לאחר פלטפורמה + צלחת</td></tr> <tr>דגירה<td>GrabCAD הדפסה</td><td>GrabCAD</td> תוכנת <td>הדפסה GrabCAD</td><td>להכנת דגמים למדפסות Stratasys</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 10 מ"ג / מ"ל</td><td>ביוטיום</td><td>40046</td><td>צבע גרעיני</td></tr><tr><td>J826 מדפסת תלת מימד פריים</td><td>מדפסת Stratasys</td><td>J826</td><td>המשמשת לכוונון גובה ומכסה חיצוני</td></tr><tr><td>LAS X</td><td>Leica</td><td>LAS X</td><td>תוכנת קונפוקל</td></tr><tr><td>מערכת חיתוך לייזר&nbsp;</td><td>מערכות לייזר אוניברסליות</td><td>ULS PLS6.150D</td><td>CO2 חיתוך לייזר המשמש למחוון</td></tr><tr><td>ליתיום בורוהידריד</td><td>STREM Chemicals</td><td>93-0397</td><td>כימיקל הלבנה</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>בסיס מאגר לשטיפה, חסימה, צביעה</td></tr><tr><td>PreForm</td><td>FormLabs</td><td>PreForm</td><td>תוכנה להכנת דגמים למדפסות Formlab</td></tr><tr><td>תפרי משי&nbsp; 2-0&nbsp;</td><td>אתיקון</td><td>A305. O35</td><td>להצמיד רקמה לפלטפורמה</td></tr><tr><td>Stellaris 8 WLL מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Leica</td><td>STELLARIS 8</td><td>הדמיה קונפוקלית&nbsp;</td></tr><tr><td></td><td></td><td>מסנן מסנן מזרק</td><td>תמיסת ab Triton</td></tr><tr><td>X-100</td><td>American Bio</td><td>AB02025-00100</td><td>מגיב פרמבליזציה, חסימת רכיב תמיסה</td></tr><tr><td>Vero ContactClear</td><td>Stratasys</td><td>CTT610, שרף 4 ק"ג</td><td>המשמש לכוונון גובה ומכסה חיצוני</td></tr><tr><td>מגש חימום</td><td>קפיץ ארה"ב</td><td>ST-1220</td><td>שומר על חום המדיה והרקמות</td></tr><tr><td>מים, מזוקקים</td><td>מדלל Gibco</td><td>15230-170</td><td>עבור LiBH4</td></tr></tbody></table>

הדמיה תלת מימדית של רקמה נושאת גידול באמצעות הלבנה איטרטיבית מרחיבה את גישת המולטיפלקסיות

Three-Dimensional Imaging of Tumor-Bearing Tissue Using the Iterative Bleaching Extends Multiplexity Approach

הצפק הוא מבנה קרומי בעובי של פחות מ-1 מ"מ המצפה את פני דופן הבטן וצמוד למשטחי איברי הבטן. הוא מורכב ממזותל פני השטח ורקמת חיבור בסיסית המשובצת בתאי שומן, לימפוציטים, מקרופאגים ופיברובלסטים, כמו גם כלי דם ולימפה. ממאירויות צפקיות נובעות לרוב מגרורות של גידולי בטן (למשל, סרטן השחלות או סרטן הקיבה)18 או, בתדירות נמוכה יותר, יכולות להיות גידולים ראשוניים של הצפק (למשל, מזותליומה)19. נגעי גידול קטנים אלה (&lt;1 ס"מ) הם מורכבים ביותר אך ניתנים לאפיון תלת מימדי באמצעות הטכניקה המתוארת. הקרנה מקסימלית של חמישה חלקים קונפוקליים משמשת לצפייה בדגימה כולה המותקנת על פלטפורמה (איור 4, משובץ בפינה השמאלית העליונה). שלושה נוגדנים מצומדים עיקריים (AF488-CD44, AF594-CD45 ו-AF647-Podoplanin) יחד עם הצבע הגרעיני Hoechst שימשו לסבב הראשון של IBEX (IBEX1, איור 4). נגעי גידול ניכרים על ידי מבנים דמויי שושנה שהם חיוביים כפולים ל-CD44 ופודופלנין ומראים סידור של גרעינים האופייניים למזותליומה פפילרית.
תאי גידול זוהו באמצעות מורפולוגיה של תאים ושני נוגדנים מכיוון שגם אנטי-פודופלנין וגם אנטי-CD44 מזהים תאים שאינם גידוליים, כפי שמעידים איתור כלי לימפה באמצעות אנטי-פודופלנין וקשירת נוגדן CD44 לתת-קבוצות של תאים חיסוניים. אזורי עניין קטנים יותר (ROI) נלכדים לאחר מכן באמצעות פורמט סריקת אריחים ברזולוציה גבוהה יותר בגדלים ממוטבים של צעד-Z עבור עיבוד הקרנות תלת-ממדיות (איור 5A). הפלטפורמות נלקחו דרך הליכי הצביעה האיטרטיביים, ואותם החזר ROI צולמו במחזורי IBEX 1-6. תמונות מייצגות עבור ממשקי גידול (קופסה צהובה) ומבנה לימפה שלישוני של גידול (TLS) (קופסה כחולה) מורכבות באיור 5B-M. 
נוכחות TLS וצפיפות של תאים חיוביים ל-CD3 מצביעים על חדירה משמעותית של תאי חיסון20 ואולי היענות לתרופות אימונומודולטוריות21. יש לציין כי TLS ורוב נגעי הגידול נמצאים בעומקי Z שונים של הרקמה, כפי שמודגם בהשוואת הקרנות מחסנית של חתכים אופטיים שונים באיור 6, תוך הדגשת היתרונות של הדמיה תלת מימדית והביולוגיה הפוטנציאלית שהוחמצה כאשר הדמיה דו-ממדית מיושמת על מבנים תלת מימדיים. האופי התלת-ממדי של הנגעים הללו בולט יותר בקבצי הסרטים (סרט 1-12), המתארים עיבודי נפח של הנגעים הבודדים באיור 5.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig01.jpg"> 
איור 1: זרימת עבודה מהדפסת תלת מימד להדמיה תלת מימדית של גידולי צפק. הפרוטוקול מורכב מרצף של חמישה שלבים להכנת תמונות מרובות תלת מימד מרקמת הצפק הנושאת גידול. (1) הדפסת פלטפורמות לקבלת רקמות, חלקי מתאם הדמיה וצלחת דגירה. (2) נהלי רכש והרכבה של רקמות. (3) קיבוע עם פרפורמלדהיד. (4) מחזורי צביעה והדמיה של IBEX. (5) שחזור תלת מימד באמצעות תוכנת הדמיה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig02.jpg"> 
איור 2: רכיבי חומרה עם ממשק רקמות עבור הדמיה תלת-ממדית. (A) תרשים סכמטי של הרכבת פלטפורמה בתוך מתאם הדמיה. (B) צלחת דגירה עם 9 בארות. (ג) תצלומים של רכיבי מתאם תמונה עם הרכבה. (D) צפק נושא מזותליומה כפי שנצפה במהלך לפרוסקופיה אבחנתית. (ה) הרכבת רקמה על הרציף. (ו,ז) צפק נושא גידול מותקן על פלטפורמות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig03.jpg"> 
איור 3: סכימת ציר הזמן של מחזורי IBEX. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig04.jpg"> 
איור 4: סקירה כללית של הפלטפורמה לאחר הדגירה עם פאנל IBEX1. הקרנה מקסימלית של הפלטפורמה כולה לאחר הדגירה עם פאנל IBEX1 (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 ו-AF647-Podoplanin). העיגול המקווקו מדגיש את הגידול. שיבוץ: תצלום של הצפק הנושא גידול המותקן על פלטפורמת ההדמיה. סרגל קנה מידה: 1 מ"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig05.jpg"> 
איור 5: תמונות אימונופלואורסצנטיות ברזולוציה גבוהה של אזורי פלטפורמה נבחרים. (A) הקרנה מקסימלית של תמונת Z-stack ממוזגת בת 56 אריחים שנרכשה לאחר הדגירה עם פאנל IBEX1 (Hoechst, AF488-CD44, AF594-CD45 ו-AF647-Podoplanin). מלבן צהוב: נגע גידול המוצג בפאנלים (B-G). מלבן כחול: ממשק מבנה לימפואיד גידול-שלישוני המוצג ב- (H-M). (ב-ז) נגע גידול בודד אחד עם פאנל IBEX 1-6 בעיבוד נפח. (B) IBEX1, ירוק: CD44, אדום: CD45, ציאן: פודופלנין. (C) IBEX2, ירוק: CD20, אדום: F-actin, ציאן: CD3. (D) IBEX3, ירוק: CD8, אדום: CD4, ציאן: panCK. (E) IBEX4, ירוק: CD31, ציאן: CD68. (F) IBEX5, ירוק: CD206, ציאן: קלרטינין. (G) IBEX6, ירוק: וימנטין, אדום: HLADR. (ח-מ) ממשק מבנה לימפואיד יחיד של גידול-שלישוני עם פאנל IBEX 1-6 בעיבוד נפח. (H) IBEX1, ירוק: CD44, אדום: CD45, ציאן: פודופלנין. (I) IBEX2, ירוק: CD20, אדום: F-actin, ציאן: CD3. (J) IBEX3, ירוק: CD4, אדום: panCK, ציאן: CD8. (K) IBEX4, ירוק: CD31, אדום: SMA, ציאן: CD68. (L) IBEX5, ירוק: CD206, ציאן: קלרטינין. (M) IBEX6, ירוק: HLADR, ציאן: Vimentin. כל הפאנלים, כחול: Hoechst. פסי קנה מידה: (A, 1 מ"מ); (B-M, 250 מיקרומטר). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67869/67869fig06.jpg"> 
איור 6: הדמיה דו-ממדית מדומה. השוואה בין הקרנות מוגבלות (10 קטעים אופטיים) וערימה מלאה (102 חתכים אופטיים) מאשרת אובדן הקשר רקמה בסימולציה דו-ממדית. (א) הקרנה מקסימלית של קטעים 30-40 (10 מיקרומטר). (ב) הקרנה מקסימלית של קטעים 85-95 (10 מיקרומטר). (ג) הקרנה מקסימלית של סעיפים 1-102 (~100 מיקרומטר). כל הפאנלים, IBEX2 (Hoechst, AF488-CD20, AF647-CD3, AF790-phalloidin). סרגל קנה מידה: 200 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/67869fig06large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה 1: נוגדנים המשמשים לפאנלים הבודדים של IBEX. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Table%201_IBEX%20panels.xlsx" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת טבלה זו.</a>
סרטון 1: עיבוד נפח מונפש של הנגע הבודד עם פאנל IBEX 1 (כחול: Hoechst, ירוק: CD44, אדום: CD45, ציאן: Podoplanin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie1_IBEX1.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 2: עיבוד נפח מונפש של הנגע הבודד עם פאנל IBEX 2 (כחול: Hoechst, ירוק: CD20, אדום: F-actin, ציאן: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie2_IBEX2.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 3: עיבוד נפח מונפש של הנגע הבודד עם לוח IBEX 3 (כחול: Hoechst, ירוק: CD8, אדום: CD4, ציאן: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie3_IBEX3.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 4: עיבוד נפח מונפש של הנגע הבודד עם לוח IBEX 4 (כחול: Hoechst, ירוק: CD31, ציאן: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie4_IBEX4.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 5: עיבוד נפח מונפש של הנגע הבודד עם לוח IBEX 5 (כחול: Hoechst, ירוק: CD206, ציאן: קלרטינין). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie5_IBEX5.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 6: עיבוד נפח מונפש של הנגע הבודד עם לוח IBEX 6 (כחול: Hoechst, ירוק: Vimentin, אדום: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie6_IBEX6.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 7: עיבוד נפח מונפש של ממשק מבנה-נגע לימפואיד שלישוני עם פאנל IBEX 1 (כחול: Hoechst, ירוק: CD44, אדום: CD45, ציאן: Podoplanin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie7_TLS_IBEX1.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 8: עיבוד נפח מונפש של ממשק מבנה-נגע לימפואיד שלישוני עם פאנל IBEX 2 (כחול: Hoechst, ירוק: CD20, אדום: F-actin, ציאן: CD3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie8_TLS_IBEX2.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 9: עיבוד נפח מונפש של ממשק מבנה לימפואיד שלישוני עם פאנל IBEX 3 (כחול: Hoechst, ירוק: CD8, אדום: CD4, ציאן: panCK). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie9_TLS_IBEX3.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 10: עיבוד נפח מונפש של ממשק מבנה-נגע לימפואיד שלישוני עם פאנל IBEX 4 (כחול: Hoechst, ירוק: CD31, אדום: SMA, ציאן: CD68). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie10_TLS_IBEX4.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 11: עיבוד נפח מונפש של ממשק מבנה-נגע לימפואיד שלישוני עם פאנל IBEX 5 (כחול: Hoechst, ירוק: CD206, ציאן: Calretinin). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie11_TLS_IBEX5.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
סרטון 12: עיבוד נפח מונפש של ממשק מבנה-נגע לימפואיד שלישוני עם פאנל IBEX 6 (כחול: Hoechst, ירוק: Vimentin, אדום: HLADR). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/Movie12_TLS_IBEX6.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.</a>
קובץ משלים 1: הדפס קובץ עבור צלחת הדגירה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/incubation_plate.form" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 2: הדפס קובץ עבור 36 הפלטפורמות הבודדות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/platform_x36.form" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 3: הדפס file עבור טבעת כוונון הגובה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_heightAdjuster.STL" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 4: הדפס file עבור המכסה החיצוני. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/SMART_imaging_petriDishLid_35mm.STL" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>
קובץ משלים 5: קובץ חיתוך לייזר עבור המחוון. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67869/imaging_platform_slider.DWG" target="_blank">אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.</a>

The spatial heterogeneity of the tumor microenvironment (TME) is a critical determinant of therapeutic response, particularly for immune-oncology agents, ...

three-dimensional-imaging-tumor-bearing-tissue-using-iterative

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סקירה מקיפה של טכניקות מעורב ביצירת מודל עכברי של סרטן הפה ניטור כמותי של הפלישה הגידול בתוך הלשון באמצעות מיקרוסקופ רב פוטון של תאים שכותרתו מוצג. מערכת זו יכולה לשמש פלטפורמה שימושי להערכת יעילות התרופה מולקולרית של תרכובות אנטי פולשנית.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

המוני רקמות מורכבים, מאיברים לגידולים, מורכבים מאלמנטים הסלולר שונים. אנו הובהר התרומה של פנוטיפים הסלולר בתוך רקמת ניצול עכברים הטרנסגניים ניאון רב שכותרתו בשילוב עם מכתים immunofluorescent multiparameter אחרי unmixing רפאים לפענח מוצא תא, כמו גם מאפייני תא המבוססים על ביטוי חלבון.

כמותיים Multispectral ניתוח בעקבות השתלת רקמות פלורסנט וליזואליזציה של מקורות ניידים, סוגים, ואינטראקציות

5 חלבוני ניאון קומבינטורית סימון של תאי גזע ואבות היווצרות הדם מאפשר במעקב משובט vivo באמצעות confocal ושני פוטונים במיקרוסקופ, מתן תובנות ארכיטקטורת hematopoietic מח העצם במהלך רגנרציה. שיטה זו מאפשרת מיפוי גורל לא פולשנית של תאים נגזרים HSPCs ספקטרלי מקודדים ברקמות שלמות לתקופות נרחבות של זמן לאחר השתלה.

במשובט מעקב vivo של גזע hematopoietic ובתאים המסומנים על ידי חמישה חלבונים ניאון באמצעות Confocal וmultiphoton מיקרוסקופית

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיקרוסקופ multiphoton לבצע הדמית הזמן לשגות מורחבת של אינטראקציות רבות-תאי בזמן אמת, in vivo ברזולוצית תא בודד.

זמן לשגות Extended הדמיה Intravital של Dynamics תאיים בזמן אמת ב microenvironment הגידול

כאן אנו מתארים שיטה עבור ברזולוציה גבוהה בזמן הדמיה multiphoton של תאים סרטניים במוח לפני ואחרי התערבות כירורגית פולשנית (למשל, ביופסיה) בתוך חיה חיה אותו. שיטה זו מאפשרת ללמוד את ההשפעה של אלה הליכים כירורגי פולשנית על תאים סרטניים ' נדידה, פולשנית, והתנהגות מתרבים ברמת תא בודד.

האורך הדמיה של התנהגות המוח תאים סרטניים בתגובה ביופסיה פולשנית כירורגית

תרגום ממצאי המיקרוסקופ התוך-חיוני מאותגר על ידי חדירת העומק הרדוד שלו לרקמה. כאן אנו מתארים מודל עכבר תא חלון גבי המאפשר רישום משותף של מיקרוסקופיה תוך חיונית ושיטות הדמיה ישימות קלינית (למשל, CT, MRI) למתאם מרחבי ישיר, מה שעשוי לייעל את התרגום הקליני של ממצאי מיקרוסקופ תוך חיוני.

מודל עכבר גידול בתא החלון הגבי למיקרוסקופיה תוך-חיונית משולבת והדמיית תהודה מגנטית בחקר סרטן תרגומי

כאן אנו מציגים טכניקת אולטרסאונד 5D המשלבת שחזור תלת ממדי רב מישורי ואיחוי דופלר צבע, המאפשר הדמיה סינכרונית של מידע מבני ותפקודי של בלוטת התריס. על ידי מזעור שטחים מתים, שיטה זו מאפשרת לוקליזציה מהירה ומדויקת של נגעים כדי לשפר את דיוק האבחון, במיוחד לטובת מטפלים מתחילים.

שחזור תלת-מישורי סינכרוני משולב עם מיפוי דופלר צבע ללוקליזציה מדויקת ומהירה של נגעי בלוטת התריס

מפות חמצן תלת-ממדיות כמותיות של גידולי עכברים צולמו באופן לא פולשני באמצעות תהודה פרמגנטית של אלקטרון דופק. אולטרסאונד B-mode ו-Power Doppler שימשו לאנטומיה ולמבנה כלי הדם. תמונות משתי השיטות הונחו על גבי ניתוח גידול רב-פרמטרי.

הערכת היפוקסיה של גידול: הדמיית חמצן תלת מימדית in vivo באמצעות תהודה פרמגנטית אלקטרונית 

כאן, אנו מתארים את היישום של שיטת ההלבנה האיטרטיבית מרחיבה את הריבוי (IBEX) תוך שימוש במכתימי רקמות אוטומטיים זמינים מסחרית ושיקולי אופטימיזציה לשימוש בריאגנטים מבוססי הגברת אותות טירמיד.

הלבנה איטרטיבית מרחיבה את הריבוי עם שימוש באוטומציה של צביעה עבור מתקני ליבה

היישום של טכניקת הקרנה פוטו-ארבלית בעלות נמוכה בשיטת IBEX הידנית מאפשר הדמיה אופטימלית של רקמות אנושיות עם אוטופלואורסצנציה טבעית משמעותית. פרוטוקול זה מפרט כיצד להשיג תמונות מרובות ושקופיות שלמות מדגימות קליניות בארכיון באמצעות מיקרוסקופ הפוך, ריאגנטים זמינים באופן נרחב ותוכנת קוד פתוח ליישור ועיבוד תמונה.

זרימת עבודה אופטימלית להלבנה איטרטיבית מרחיבה את ההדמיה המרובה של דגימות קליניות אוטו-פלואורסצנטיות מאוד

הלבנה איטרטיבית ספקטרלית מרחיבה ריבוי (IBEX) מתבססת על טכניקת IBEX הבסיסית על ידי הוספת חסימת הפרין כדי למזער קשירה לא ספציפית ומינוף זיהוי ספקטרלי עם פירוק חישובי כדי לדכא אוטופלואורסצנטיות. גישה זו מאיצה את רכישת התמונה תוך הפחתת מקורות הרקע, ומאפשרת ניתוחים פרוטאומיים מרחביים רב-עגולים ובעלי פרמטרים גבוהים.

הדמיה גבוהה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית ספקטרלית כדי למזער פלואורסצנטיות רקמות לא ספציפיות

חקור הדמיה תלת מימדית של רקמה נושאת גידול באמצעות הלבנה איטרטיבית. פרוטוקול זה מאפשר אפיון ארכיטקטורת גרורות פריטונאליות ומספק תובנות לגבי מיקרו-סביבת הגידול לחקר אימונותרפיה.

הדמיה תלת מימדית של רקמה נושאת גידול באמצעות הלבנה איטרטיבית מרחיבה את גישת המולטיפלקסיות

גלה סרטונים נוספים