Verrijkend voor mannen: het onderhouden van een voorraad mannelijke C. elegans

Overview

Nematoden kunnen gemakkelijk worden vermeerderd in het lab - deels omdat hermafrodieten zich kunnen voortplanten door zelfbevruchting.  Genetische kruisen en andere experimenten kunnen echter een groot aantal mannen vereisen.  Deze video beschrijft een methode om te verrijken voor mannelijke C. elegans.

Protocol

Dit protocol is een uittreksel uit Singaravelu et al, Isolatie en In vitro Activering van Caenorhabditis elegans Sperma, J. Vis. Exp. (2011).

1. Verrijking van de mannelijke bevolking

1. Afhankelijk van de experimentele behoefte kunnen grote aantallen mannetjes worden verkregen door een van de volgende strategieën te gebruiken:
   1. grote populatie wilde mannetjes kan worden verkregen door 5 mannetjes van het wilde type en 1 hermafrodiet te kruisen op een klein gazon van OP50 dat in het midden van de NGM-plaat is gezaaid. Ongeveer 50% van de volgende generatie zal wilde mannetjes zijn.
   2. him-5(e1490) of him-8(e1489) hermafrodieten gooien een groot aantal mannetjes. hem-5 en hem-8 mannetjes zijn vruchtbaar en er is geen duidelijk defect in spermamorfologie en functie. Dus, hem-5 of hem-8 mannetjes kunnen worden gebruikt in plaats van wilde mannetjes voor vele experimenten.

2. Identificatie en isolatie van mannen

1. Onderzoek de staartmorfologie van wormen; de staart van de mannelijke worm is afgerond.
2. Pluk mannetjes in het L4-stadium en breng ze over op een NGM-plaat gezaaid met E. coli OP50 en laat ze een dag of twee groeien. Groeiende celibataire mannetjes bij afwezigheid van hermafrodieten voorkomen het verlies van sperma en dus zou een groot aantal spermatiden beschikbaar zijn tijdens de experimentele procedure.