Introduction
Данио (Danio rerio) является небольшой видов костистых рыб, происходящих в Индии, что является полезной моделью организм для поведенческого 1 и медицинского исследовательского 2,3. Данио рерио, также широко используется в тестировании различных фармакологических веществ для того, чтобы охарактеризовать их влияние на поведение. Различные дозы и схемы применения препарата были использованы для исследования поведения рыбок данио после введения соединений, таких как стимуляторы 4, транквилизаторов 5 и этанола 6-8.
Наша лаборатория исследовала эффекты различных графиков введения этанола на данио тревоги и передвижения в хорошо проверенных света / темно анализа 9, 20, также как правило, называют в scototaxic анализа. Новый способ введения этанола была разработана с целью повышения эффективности для повторяющихся, ежедневного приема в течение длительного периода времени (21 дней) 6 10-12. Хотя этот метод является широко принятым, сетки данио может увеличить изменчивость в времени, необходимого для внедрения и снять рыбу с лекарственным раствором. Таким образом, точное выдерживание в соединение, представляющее интерес, может изменяться в ходе эксперимента с участием повторные дозировки. Метод, который уменьшает источники ошибок, вытекающих из изменчивости в транспортных раза, таким образом, желательно. С нашим методом мы можем двигаться всю рыбу одновременно, в результате чего одинаковым временем дозирования в каждой рыбы. После этанола экспозиции (описано здесь), данио могут быть проверены в любое количесR поведенческих тестах, в том числе те, что оценки тревожности. Дозирование группы рыб, используя новый метод имеет практическое применение за пределами способности точно повторить и стандартизации дозирование между субъектами и между группами рыб. Появление нового программного обеспечения, что позволяет для отслеживания множественных рыбы сразу может увидеть исследователи используют наши методы, чтобы обеспечить воспроизводимость и точность в своих экспериментах. Учитывая широкое использование данио как модельного организма для поведенческой неврологии, этот метод позволит повысить эффективность и практичность в будущих фармакологических исследований.
В настоящее парадигмы, повторил дозирования график был использован, что примерно зеркал графиков человека питьевой. Рыба были рандомизированы в одну из трех групп: управления, ежедневно умеренной, или еженедельно, выпивка. Режим дозирования составляет 21 дней в срок, выбран потому, что он значительно превысил время экспозиции в предыдущих исследованиях 7. Рыба управления получил нулевую Alcoпраздники, ежедневно умеренной рыба получила 0,2% алкоголя один раз в день, и раз в неделю-выпивка рыба получила сразу 1,4% алкоголя в неделю. Светлый / темный задача была использована для оценки тревоги после 2 дней выводе. Это относительно простой тест, чтобы управлять, который использует прямоугольную арену, в котором стены, с одной стороны белые, а с другой стороны темно-9. Взрослый данио решительно предпочитают темную сторону арены в условиях 6,9,13 контроля. Увеличение беспокойство оперативно определяется как значительно больше времени, проведенного в темную зону, и снижение тревожности можно предположить, когда рыба проводит сравнительно больше времени, проведенного в световой зоны. С движением отслеживания программного обеспечения, другие информативные переменные также могут быть количественно, в том числе средней скорости, неподвижности, извилистые, и переводе зоны 14.
Способ дозирования разработаны в нашей лаборатории может применяться к любому исследований, в которых водорастворимые соединения вводят в один или несколько zebrafiш. Многие другие фармакологические средства, которые могут извлечь выгоду из этой методологии в настоящее время проходит испытания в данио. Обычно тестируемые соединения включают никотин, хлордиазепоксид, буспирон и скополамин, который растворяют в аналогичным описанному в этаноле; смешиванием соответствующего количества химического вещества в воде. Таким образом, общая сфера этой процедуры гораздо шире и не ограничивается этанола. Кроме того, после приема препаратов для нескольких дней, свет / темнота задачей является лишь одним из многих поведенческих тестов, которые могли бы быть использованы. После введения препарата или во время вывода, другие популярные анализы, которые могут быть использованы, включают испытание водолазный новым бака 15 и тесты социальном поведении, таких как мелел 16. Следующая процедура будут изложены эффективный способ передачи неоднократно группы рыбы или отдельных рыб в растворах, содержащих фармакологический интерес соединения. Кроме того, процесс тестирования тревоги с свет / темнота тестав группах рыб, которые находятся в выводе после воздействия длительных графиков администрации алкоголя будет описана.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все процедуры и поведенческие испытания были одобрены животных совета MacEwan университета этике исследований по протоколу числа 06-11-12, который в соответствии с Канадским советом по руководящим принципам по уходу за животными для ухода и использования лабораторных животных.
1. Подготовьте Дозирование Танки, решений и расписание администрирования
- Подготовьте график администрирования, такие, что животные дозирования в той же среде, и в это же время суток, чтобы избежать каких-либо смешивает времени или смещения для зрительных стимулов.
- Получить как много одинаковых, 1,5 л, четкие танки полипропилен нереста как необходимые для числа размеров группы. Используйте группы 8 рыбы в баке, что позволяет в течение 2 групп рыб, которые будут испытаны в день позже в процедуре (см шаг 3). Используйте один сборный резервуар и один дозирования бак на группу (2x общее количество групп).
- Поместите 400 мкм нереста вставок во всех холдинговых танков. Fболен танки с водой среды обитания или обратного осмоса при правильной температуре (в течение данио, 25-28 ° С), что согласуется с температурой рыбы, как правило, размещены на.
ПРИМЕЧАНИЕ: Там может быть нежелательные химические взаимодействия между некоторыми наркотиками и химических компонентов буферном обитания воды. В этой ситуации, использовать обратного осмоса вода буферизованную с минимальными или вообще без соли аквариума для введения наркотиков, а также для контрольных групп. - Убедитесь, что танки находятся в нейтральной среде, чтобы избежать кондиционирования рыбу на внешние зрительные раздражители во время дозирования.
- Поместите 400 мкм нереста вставок во всех холдинговых танков. Fболен танки с водой среды обитания или обратного осмоса при правильной температуре (в течение данио, 25-28 ° С), что согласуется с температурой рыбы, как правило, размещены на.
- Приготовьте раствор наркотиков. Смешайте необходимое количество препарата с водой среды обитания в нерестовых резервуаров. Подготовьте 0,2% -ным раствором этанола путем объединения 3 мл высококачественного этанола (95% неденатурированный этанол) с 1497 мл воды. Подготовьте 1,4% -ным раствором этанола путем объединения 21 мл этанола с 1479 мл воды.
2. Сетка Рыба и Ethanol Порядок Администрация
- Тщательно чистая рыба из их среды обитания танков и передачи в соответствующий бак, содержащий нереста вставку. В идеале, дом рыбу в нерестовый вставки для устранения взаимных расчетах вообще.
- При всем рыбы в своих холдинговых танков, осторожно поднимите нерест вставить из бак и поместите его в соответствующий бак раствора препарата (рис 1А).
- Запишите время дозирования в соответствии с требованиями. Используйте 30 мин в растворе этанола в процедуре, описанной здесь.
- Если это возможно, есть помощники помочь с передачей всех экспериментальных групп к решению наркотиков одновременно, чтобы обеспечить точное время дозирования. Кроме того, передача одну группу в то время, и отслеживать отдельные группы «дозировки раз (рис 1А).
- В конце необходимой периода дозирования, удалить рыбу из раствора этанола, тщательно подъема нерестовое вставкуиз лекарственного раствора и осторожно поместив обратно в резервуар.
- Аккуратно чистая рыба в холдинговых танков и не размещать их обратно в места их обитания до следующего запланированного времени дозирования, или разместить нерест вставить обратно в бак, чтобы устранить сетку.
- Как упоминалось ранее, если это возможно в рамках параметров животного жилья оборудования, дома животных в одном танке и нереста вставки, которые используются в качестве резервуар. Это позволит избежать взаимных расчетах вообще во время процедуры администрирования.
3. Поведенческий тест
- Получение свет / темнота арену широкий 9,5 см на 55 см в длину и 9,5 см глубиной с белым водонепроницаемым полом (Фиг.1В). Прикрепите белую и черную водонепроницаемый неотражающую бумагу для внутренних стен арены с помощью липучки, с половины арены, покрытой белым и наполовину покрыта черным. Заполните арену на глубину 5 см с водой среды обитания при температуре 25-28 ° С. Maintайн эту температуру на протяжении тестирования.
- Сводится на минимум внешних визуальные стимулы путем построения белый трехсторонний корпус для арена будет расположена в. Убедитесь полигоном имеет диффузный верхнее освещение, что не вызывает отражения от поверхности воды, пока достаточно ярким для отслеживания программного обеспечения движения, или по почте -hoc руководство количественная из видеоизображений.
- Поместите арену в корпусе и установите учета и анализа движения параметры отслеживания программного обеспечения поведение. Установите продолжительность пробного 5-15 мин, в зависимости от вопроса исследования.
ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь мы использовали 5 мин. - Транспорт группа рыб, которые будут проверены на научно-исследовательской сфере в баке обитания и поместить их пределами арены корпусе. Акклиматизировать рыбу в течение 10 мин.
- Аккуратно чистая рыба из соответствующей группы и места в центре свет / темнота арене, будучи уверенным, чтобы выпустить рыбу, когда она расположена параллельно длинной оси арене, чтобы АвоID смещения рыбы к светлой или темной зоне.
- Начните запись поведение сразу после животное выпустили. Следите за каких-либо проблем программного обеспечения и отслеживание рыбу или для прыжков рыбы или замораживания. Поворот на арене 180 °, после половины субъектов были протестированы, чтобы предотвратить любые смешивает в связи с предубеждениями в результате которой конец арене ориентировано на открытом конце корпуса.
- После суда закончилось, мягко чистая и снять рыбу с арены в бак или бак обитания.
4. Анализ
- Осмотрите время, проведенное в свете по сравнению с темными зонами. Для каждой группы и каждой рыбы, получить относительное время, затрачиваемое на светлых и темных зон и анализировать с помощью одного образца т -test (или Уилкоксона ранг тест для непараметрического данных; разница от (половины от общего времени пробного) 150 сек) чтобы определить, если группы значительно предпочитают одну область за другой.
- Для сравнения предпочтения, вычислить prefeИндекс Renče путем вычитания время, проведенное в легкой зоне от времени, проведенного в темную зону и сравнить различия между группами. t-тесты могут быть использованы для сравнения двух групп. Сравните несколько групп с односторонним анализа дисперсии с использованием тест HSD постфактум Тьюки, где это необходимо (или Крускала-Уоллиса с множественной сравнению Данна постфактум тест для непараметрического данных).
- Сравните скорость, количество зон переходов, извилистые, и неподвижность всей группы. Используйте один-дисперсионного анализа с использованием тест HSD постфактум Тьюки, где это необходимо (или Крускала-Уоллиса с множественной сравнению Данна постфактум тест для непараметрического данных).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Чтобы поддерживать точность и контроль в фармакологических исследований с данио, важно времени продолжительность введения этанола последовательно и точно, как описано выше. Наша методика может повысить удобство и пропускную способность процедуре дозирования. Введение этанола на каждую неделю либо-компульсивного или ежедневно-умеренной график привело измененными уровнями тревожности, измеренных с свет / темнота теста, по сравнению с контрольной группой. При испытании через два дня после последней дозы, данио в контрольной группе (кто не получал алкоголя, но все еще переехали в дозирующих резервуаров) отображается особенности ожидаемого поведения, с расходов управления рыбы значительно больше времени на темной стороне арены ( 2А) похож на наивного данио в других исследованиях 6,9,13. Рыба в еженедельном разгула группы не показали предпочтение либо светлым или темным зонам в задачи при испытании двух дней после их последнего введения этанола (2В (рис 2С); в отличие от контрольной группы. Индекс предпочтение указано существенное различие между контролем и ежедневно умеренных групп (рис 2D). Там не было никаких существенных различий в скорости плавания, или неподвижность всей групп (таблица 1), и, следовательно, этот эффект не был из-за дефицита двигателя в рыбе.
Рисунок 1:. Процедура трансфера и Light / Dark арена Эти фотографии иллюстрируют процедуру передачи (А) Во-первых, рыба расположены на трансферном бака (слева).. Дозирование бак, содержащий этанол изображен (справа). (BC) Перемещение рыбы из передаточной емкости в растворе этанола требует исследовrcher поднять нереста вставку из передачи бака и в бак этанол раствор. (D) свет / темнота арену, как показано измеряется шириной 9,5 см на 9,5 см глубиной и 55 см в длину. Белый пол используется, наряду с черными стенами на половине арены (слева) и белыми стенами, с другой половины, создавая светлые и темные зоны.
Рисунок 2: Представитель результаты и trackplots процедуры этанол дозирования на три группы рыбок данио через 2 дня вывода. (А) представитель trackplot из одного управления данио пути движения на всей территории 5 мин свет / темнота суда. Ниже то же самое данио trackplot представлен в виде тепловой карты, которая является представление цвета данио движения в течение всего процесса, основанного на времени рыба, проведенное в месте, представленного каждого пикселя. (Б) representative trackplot одного данио от еженедельника-выпивка группы на протяжении всего 5 мин свет / темнота задачи. Ниже Тепловая карта с тем же данио. (C) Представитель trackplot из одной ежедневной умеренной данио передвижения по 5 мин свет / темнота суда. Ниже Тепловая карта с тем же данио. (D) Индекс предпочтение было рассчитано для всех групп путем вычитания время, проведенное в световой зоны от времени, проведенного в темную зону. Отрицательные значения означают предпочтение темной зоны. Положительные значения указывают на предпочтение легкой зоне. Результаты указывают на значительную разницу в предпочтении между контролем и ежедневно умеренных групп на 2 дня вывода * р <0,05 (односторонний ANOVA). Примечание есть также значительное предпочтение темноте в контрольной группе, р <0,05 (один образец т -test, разница от 0), а также значительное предпочтение света в повседневной умеренной группы, р <0,05 (один образец <EM> т -test, разница от 0). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
| Скорость | Неподвижность | |
| (См / сек) | (Сек) | |
| 2-х дневный Wd | 2-х дневный Wd | |
| Контроль (п = 13) | 9.1 ± 0.6 | 1.9 ± 0.6 |
| Разгул (п = 14) | 9.8 ± 0.5 | 0,8 ± 0,2 |
| Хронический (п = 15) | 10.3 ± 0.5 | 2.5 ± 1.0 |
Таблица 1: Средняя скорость и неподвижность в течение свет / темнота теста. Средняя скорость плавания (см / сек) и неподвижность (сек) из репрезентативной группы рыбок данио после 2 дней выводе (среднее ± SEM). Здесь, никаких существенных различий в скорости или любой неподвижности не были найдены. Используется с разрешения Холкомб и др., (2013).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Предыдущие исследования, связанные с введения препарата у рыбок данио просто полагались на сетки рыбу перевозить их из дома бака в раствор препарата 12,16. Сетка не всегда последователен и часто занимает больше времени, чем ожидалось из-за побега реакции данио, которая имеет значительный индивидуальную изменчивость. Традиционные методы передачи, в то время как полезно, может быть повышена за счет уменьшения количества общего времени рыба провести вне воды, а также уменьшение количества изменчивости во времени передачи между животными. В дополнение к улучшению практичность, этот способ дает возможность исследователю дозировать большие группы рыб одновременно в растворе для точного количества времени. Предыдущие методы требуют либо дозирования ни одной рыбы, или попытка чистая целые группы рыб одновременно. Бывший медленно и уменьшает пропускную способность, в то время как последний является неуклюжим и трудная задача. Кроме того, системы слежения за перемещением, что соценить поведение множественного рыбы сразу могут извлечь выгоду из точности этого метода. Рыба может быть передана непосредственно от нереста вставки в обмеление арене, которая обеспечивала бы рядом одновременного воздействия на арене для всех рыб.
Используя этот новый метод значительных результатов при реализации на три группы данио течение 21-дневного периода. Контроль рыба получила никакого алкоголя, ежедневно умеренной рыба не получил небольшое количество спирта один раз в день, раз в неделю, и переедание-рыба получила большую дозу алкоголя один раз в неделю в течение 21-дневного периода. В свет / темнота задачи, процедура дозирования не изменило обычный предпочтение данио для темной зоны в условиях контроля. Тем не менее, после 2 дней отмены этанола, данио в ежедневной умеренной группы предпочли легкую зону на арене, разворот предпочтения. Статистический анализ подтверждает существенное изменение в предпочтении зоны. Вполне возможно, что дозирование процедуры, применяемыевновь привели в этаноле ищет поведение из-за условного предпочтения места (CPP), с рыбой ищет этанола (аппетитивная стимула), и предпочитая белый пояс из-за его относительной близости к яркой области дозирования. Последние исследования показывают, что CPP может произойти у рыбок данио и в районах, где данио дозируются с этанолом 17,18. Еженедельно переедание-рыба не показали предпочтение 2 дней после этанол, и при том, что свидетельствует о нейронных механизмов, приходящихся на этом открытии не хватает, то возможно, что редкие, но большие дозы алкоголя может привести к повреждению мозга, возможно, оставляя рыбу трудно различить зон.
Еще одно преимущество, что это дозирование процедура придает исследователей является его генерализация. Как описано, эта процедура дает четкие и полезные результаты в данио. Тем не менее, эта процедура не ограничивается исключительно данио. Ограничения на процедуры, связанные с размером и пределы дозирования танков, животных и ТестиУстройство нг, а также способность к анализу данных. При использовании отслеживания движения программного обеспечения, недавние исследования исследовали множество дополнительных переменных на протяжении всего судебного разбирательства. Белый уклонение привыкание, квадраты скрещенные, передвижения привыкание, задержка с белой зоне, неустойчивый плавание, thigmotaxis (время, проведенное рядом с арены стен), и оценка рисков также может быть определена количественно 14. Вполне возможно, чтобы использовать эту процедуру в других модельных организмов, таких, как золотая рыбка, которые были использованы ранее для изучения роли толерантности и изъятия 19. Исследователи надеются исследовать влияние других фармакологических агентов или токсинов окружающей среды, использование других поведенческих тестах, или других морских или пресноводных животных, также могут использовать эту базовую методологию.
Используя этот протокол является простым и эффективным. Тем не менее, если результаты не снизилась, то устранение неполадок системы слежения за перемещением для обеспечения надлежащего сбора данных. Trackinг должна быть гладкой и точной между испытаниями. Система слежения должны быть записи движение тела центру рыбы во все времена. Любой прыжки или беспорядочным движением отслеживания точка из-за визуальных артефактов, таких как отражения света на воде рябь или неправильной настройки слежения может посрамить результаты. Некоторые расхождения в результатах могут возникать из небольших различий в дизайне арены или сред дозирования. Чтобы быть уверенным в репликации, арена должна быть, как описано, в частности, по отношению к использованию белый пол, чтобы максимально отслеживания эффективности данио. С другими рыбами, которые светлее, темные пол должен быть использован, чтобы помочь в отслеживании движения. Точно так же, дозирования рыбу в среде, свободной от каких-либо зрительных стимулов, которые могли бы исказить рыбу чрезвычайно важно. Любое отличие цвет, рисунок или оттенок, что является воспринимаемое на рыбу может посрамить результаты. Нейтральная, светлый фон похож на что в системе жилищного рекомендуется. </ Р>
В то время как это возможно, чтобы изменить этот метод, как необходимую для других видов рыб, результаты могут отличаться в плане врожденной свет / темнота предпочтений 20-21. Важно также отметить, даже процедуру, описанную здесь, все еще вызывает некоторое напряжение. Хотя сетки значительно снижается, процедура включает в себя все еще очень короткий период времени, когда рыба должна быть из воды, возможно, вызывая реакцию на стресс. Рамсей и его коллеги 22 установлено, что сетчатая данио были по крайней мере дважды уровни кортизола в их теле по сравнению с теми, которые не были сетчатой. Поскольку кортизол это гормон связан с напряжением 11 это может изменить поведенческую реакцию, которая измеряется. В то время как наш метод уменьшает сетка, она не устраняет ее. Тем не менее, это дает исследователям возможность устранить заболеваемость сетки, если они желают по жилищной данио в нерестовых вставками. Будущие исследования должны расследовать ли использование нерестового inserт для передачи рыбы может снизить стрессовую реакцию по отношению к сетке. Кроме того, крайне важно для поддержания точного времени дозирования и передавать раз между группами. Изменения в дозировании раз или большие различия во времени провел вне воды может изменить результаты. Для уменьшения возможных циркадные эффекты, это также важно дозировать рыбу во время аналогичных время суток. В текущем эксперименте рыбы вводили и испытания между 10 утра и 2 вечера. Точное и надежное репликации этой процедуры зависит от повторения протокол с точностью.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы признают, Джошуа Gallup за использование его фотографии оборудования, используемого для Рисунке 1. Эта работа была поддержана естественных и технических наук исследовательский совет (NSERC) Канада Discovery гранта (в TJH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Three shelf benchtop housing system |  Aquatic Habitats |
N/A | |
| 1.5 L Spawning tank w/400 μm baffle | Aquatic Habitats |
N/A | |
| Pure Grain Ethanol | Luxco, INC |
N/A | |
| Ethovision XT Motion tracking software | Noldus Information Technology |
||
| Pipette | Eppendorf Canada |
||
| Light/Dark Arena | Custom | Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long. |
References
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).
- Langheinrich, U. Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
- Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! Modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).
- Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling. Behavioural brain research. , (2012).
- Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).
- Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish. PLoS ONE. 8 (5), (2013).
- Mathur, P., Guo, S. Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish. Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).
- Dlugos, C., Rabin, R. Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations. Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).
- Maximino, C., et al. Scototaxis as anxiety-like behavior in fish. Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).
- Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio). Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).
- Egan, R. J., et al. Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish. Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).
- Gebauer, D. L., et al. Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).
- Serra, M. C., Mattioli, R. Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment. Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).
- Maximino, C., et al. Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain. Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).
- Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T.
- Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish. Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).
- Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure. Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).
- Renninger, S. L., et al. Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish. Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).
- Crawshaw, L. I., et al. Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol. Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).
- Hamilton, T. J., Holcombe, A. Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning. Proceedings of the Royal Society B. , (2014).
- Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress. Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).
- Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour. Conservation Physiology. 2 (1), (2014).
