Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

चूहों पर प्रायोगिक प्रजनन जांच में स् ट्रा

Published: December 2, 2017 doi: 10.3791/56038
Automatic Translation
1,2, 3, 3, 4,5, *1,2,6, *4,5
1Reproductive Medicine Center, Department of Obstetrics and Gynecology, The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, 2Institute of Reproductive Genetics, Anhui Medical University, 3Centro Experimental en Investigaciones Biomédica (CEIB), Campus Ciencias de la Salud, Universidad de Murcia, 4Department of Obstetrics and Gynecology, 'Virgen de la Arrixaca' University Clinical Hospital, 5Institute for Biomedical Research of Murcia, IMIB-Arrixaca, 6Anhui Provincial Engineering Technology Research Center for Biopreservation and Artificial Organs
* These authors contributed equally

Summary

इस पांडुलिपि प्रजनन और स्त्री संबंधी जांच के लिए प्रयोगात्मक मॉडल डिजाइन करने के लिए महिला चूहों पर प्रदर्शन अल्ट्रासाउंड की उपयोगिता का वर्णन । ultrasonographic मूल्यांकन करने के लिए कैसे की एक चरण दर चरण विवरण दिखाया गया है ।

Abstract

असिस्टेड प्रजनन प्रौद्योगिकी के विकास और मनुष्यों पर अनुसंधान की नैतिक सीमाओं के साथ, चूहे जानवर मॉडल व्यापक रूप से प्रजनन चिकित्सा में इस्तेमाल किया गया है । पूर्व में, कुतर में प्रजनन प्रणाली के विकास का अध्ययन, उत्पाद के ऊतकों की एक बार ऊतकीय परीक्षा के आधार पर किया गया है । हाल ही में, उच्च संकल्प transabdominal अल्ट्रासाउंड के विकास के साथ, उच्च गुणवत्ता वाले सोनोग्राफी अब चूहों के प्रजनन अंगों का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है, प्रजनन प्रणाली के अध्ययन के लिए एक नई विधि की अनुमति. छवियां एक उच्च संकल्प ultrasonographic प्रणाली का उपयोग कर प्राप्त किया गया । २८ ८-सप् ताह पुराने गैर-गर्भवती चूहों और 5 गर्भवती Sprague-Dawley चूहों पर स्त्री स् ट्रा प्रदर्शन किया गया । हम वर्णन कैसे प्रजनन प्रणाली और मद चक्र के विभिंन चरणों के दौरान विशिष्ट विचारों में जुड़े संरचनाओं के अंगों को पहचानने के लिए । रंग फ्लो डॉपलर गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह को मापने के लिए इस्तेमाल किया गया था और गर्भावस्था के विभिन्न चरणों के दौरान गर्भाशय रक्त प्रवाह पैटर्न परिवर्तन का मूल्यांकन. हमने प्रदर्शन किया है कि अल्ट्रासाउंड अन्वेषण आंतरिक प्रजनन अंगों में परिवर्तन के मूल्यांकन के लिए एक उपयोगी तरीका है । इसके उपयोग के अतिरिक्त प्रयोगों के संचालन की संभावना को जंम देती है, चिकित्सा या सर्जिकल प्रक्रियाओं सहित, और पशुओं के त्याग के बिना आंतरिक अंगों के लिए sonographic परिवर्तन की निगरानी करने की क्षमता प्रदान करता है ।

Introduction

चूहा पशु मॉडल व्यापक रूप से प्रजनन चिकित्सा में इस्तेमाल किया गया है, भ्रूण और डिंबग्रंथि ट्रांसप्लांटेशन1,2में शामिल है । हालांकि, अतीत में, कुतर में प्रजनन प्रणाली के विकास का अध्ययन, उत्पाद के ऊतकों की एक बार ऊतकीय परीक्षा के आधार पर किया गया है, और चूहों में दिन-प्रतिदिन प्रजनन अंग परिवर्तन के अनुदैर्ध्य अध्ययन से यह संभव नहीं हुआ है । अल्ट्रासाउंड व्यापक रूप से 30 से अधिक वर्षों के लिए मानव में सहायता प्रजनन प्रौद्योगिकी के रूप में इस्तेमाल किया गया है, लेकिन इस मूल्यवान प्रौद्योगिकी केवल चूहों के लिए लागू किया गया है हाल ही में ।

हमारा उद्देश्य प्रजनन और स्त्री रोग जांच के लिए प्रयोगात्मक मॉडल डिजाइन करने के लिए और हमारे ज्ञान के लिए प्रक्रिया को प्रदर्शित करने के लिए Sprague-Dawley चूहों के प्रजनन अंगों के मूल्यांकन के लिए एक ultrasonographic दृष्टिकोण स्थापित करने के लिए किया गया था, इस कार्यविधि के बारे में कोई वर्तमान दृश्यात्मक प्रकाशन नहीं हैं । हम महिला चूहे प्रजनन प्रणाली के ultrasonographic परीक्षा की प्रक्रिया का वर्णन और उच्च परिभाषा अल्ट्रासाउंड का उपयोग कर शरीर रचना विज्ञान और गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह पर मौजूद ultrasonographic निष्कर्षों । हम एंडोमेट्रियल मोटाई, डिम्बग्रंथि आकृति विज्ञान और गर्भाशय में रक्त के प्रवाह में महत्वपूर्ण मतभेदों का मूल्यांकन करने के लिए मद चक्र के विभिन्न चरणों में गैर गर्भवती पशुओं में अंतर्गर्भाशयकला, अंडाशय और गर्भाशय धमनी रक्त के प्रवाह की विशेषताओं पर नजर रखी मद चक्र के विभिंन चरणों, महिलाओं के समान । हम एक ७० मेगाहर्ट्ज आवृत्ति और 30 µm के एक संकल्प के स्तर के साथ उच्च गुणवत्ता वाले अल्ट्रासाउंड उपकरणों का इस्तेमाल किया. हमारा दूसरा उद्देश्य गर्भवती चूहों में गर्भाशय रक्त प्रवाह के प्रतिरोध में परिवर्तन का मूल्यांकन करना था. यह तकनीक पशुओं के त्याग के बिना प्रजनन अंगों में दैनिक परिवर्तन के अध्ययन के लिए अनुमति देता है ।

चूहों पर अल्ट्रासाउंड के उपयोग में कई तकनीकी दिक्कतें हैं । इन कठिनाइयों में शामिल हैं: चूहा अंतर्गर्भाशयकला एक मानव महिला4से ज्यादा पतली है । इमेजिंग में कठिनाई चूहों के अंडाशय के चूहों में मोटा त्वचा और पेट की दीवार पेशियां के लिए जिंमेदार ठहराया गया है, जो अल्ट्रासाउंड के पास पूरा क्षीणन के परिणामस्वरूप5, और गर्भाशय धमनी में गैर-गर्भवती खोजने के लिए बहुत अधिक कठिन है चूहों. हम प्रक्रिया के साथ कई तकनीकी समस्याओं का हल है, और उन समस्याओं है कि रहने के लिए, हम बताएंगे कि कैसे उंहें कम करने के लिए ।

जानवरों के बलिदान की आवश्यकता के बिना चूहों के प्रजनन अंगों में sonographic परिवर्तन की सफल निगरानी प्रजनन चिकित्सा और अन्य शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के भविष्य के पशु मॉडल के निर्माण की संभावना खुल जाएगी.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

इस अध्ययन की देखभाल और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए गाइड में सिफारिशों के साथ सख्त अनुसार किया गया था और आने के अनुसार (पशु अनुसंधान: Vivo प्रयोगों में रिपोर्टिंग) दिशानिर्देश । प्रोटोकॉल प्राधिकरण संख्या A13170404 (Anexo 1) के साथ डायरेक्टर 2010/63/यूरोपीय संघ के साथ पालन पशु प्रयोग के लिए एक लाइसेंस प्राप्त किया । सभी प्रयोगों एक यूरोपीय संघ प्रमाणित प्रयोगशाला में जानवरों की नैतिक देखभाल (RD 53/2013, यूरोपीय संघ के निर्देश 63/2010) के लिए राष्ट्रीय दिशा निर्देशों के बाद प्रदर्शन किया गया । मर्सिया विश्वविद्यालय के पशु प्रयोगों की नैतिकता पर समिति द्वारा प्रोटोकॉल को मंजूरी दी गई ।

1. पशु तैयारी

नोट: सभी प्रयोगों मर्सिया विश्वविद्यालय के पशु प्रयोग अनुभाग और मर्सिया विश्वविद्यालय के प्रसूति एवं स्त्रीरोग विज्ञान विभाग द्वारा समर्थित थे.

  1. उपयोग 8 सप्ताह पुराने Sprague-Dawley चूहों (28 मादा चूहों) सभी प्रयोगों में 200-250 जी वजनी ।
    नोट: यहां, हम भी 5 गर्भवती चूहों का इस्तेमाल किया ।
  2. गर्भवती चूहों को प्राप्त करने के लिए, पिंजरे आठ सप्ताह पुरानी महिला और उपजाऊ पुरुष चूहों और मेट से 17:00 -23:00 h. निंनलिखित सुबह पर एक योनि प्लग की पहचान संभोग सफलता के रूप में व्याख्या की गई थी । हमल के दिन 1 पर विचार करें, अगले दिन के बाद वे साथी थे ।
  3. 9, 15 और 18 हमल के दिनों में प्रयोगों बाहर ले ।
  4. भोजन और पानी के लिए स्वतंत्र पहुंच के साथ दो के समूहों में घर चूहों और नियमित रूप से 12 ज प्रकाश/
  5. दो सप्ताह की एक ंयूनतम के लिए सुविधा शर्तों को acclimating के बाद, मद आवृत्ति और नियमितता के लिए मूल्यांकन करने के लिए दैनिक सुबह योनि कोशिका का उपयोग करें ।
    नोट: एक नियमित 4 से 5 दिन मद चरण के साथ पच्चीस चूहों को अध्ययन में शामिल करने के लिए चयनित किया गया ।

2. इमेजिंग के लिए चूहों की तैयारी

नोट: उच्च-रिज़ॉल्यूशन transabdominal ट्रा का उपयोग करके छवियां प्राप्त की गईं । मद चक्र चरणों योनि धब्बा कोशिका द्वारा निर्धारित किया गया ।

  1. इमेजिंग अध्ययन से पहले anesthetize ने 2-3% isoflurane गैस के साथ इंडक्शन चैंबर में बांधा ।
  2. पशु निकालें और तुरंत एक नाक थूथन संज्ञाहरण प्रणाली से जुड़े शंकु के भीतर जगह और ultrasonographic परीक्षा के दौरान 1.5-2% isoflurane पर पशु बनाए रखने के ।
  3. caudal पेट के लिए कतरनों और लोमनाशक क्रीम के साथ लागती मार्जिन से फर निकालें ।
  4. चूहा सुरक्षित करने के लिए एक गर्म मेज पर एक लापरवाह स्थिति में anesthetized चूहा प्लेस और इष्टतम आराम और इमेजिंग सत्र की अवधि के लिए शारीरिक मापदंडों के रखरखाव सुनिश्चित करते हैं । सभी शारीरिक मापदंडों छवियों और अल्ट्रासाउंड आवेदन के माध्यम से वास्तविक समय में कब्जा कर लिया डेटा के साथ एकीकृत किया जाना चाहिए ।
  5. धीरे (चिकनाई के बाद) एक गुदा जांच डालें (३७.५ ° c ± ०.५ ° c) शरीर के तापमान पर नजर रखने के लिए ।
  6. एक स्थिर धारक में transducer (30 हर्ट्ज) प्लेस और ऊर्ध्वाधर अक्ष और क्षैतिज अक्ष के साथ यह कदम (आगे-पीछे और साइड करने वाली पक्ष) का उपयोग कर एक मैंयुअल रूप से संचालित जॉयस्टिक या हाथ से ।
  7. प्रक्रिया के दौरान सुखाने से बचने के लिए चूहे की आंखों के लिए पेट्रोलियम आधारित नेत्र बाम लागू करें ।

3. परीक्षा प्रक्रिया

नोट: चूहों ´ प्रजनन अंगों की एनाटॉमी: योनि मूत्राशय के लिए पृष्ठीय निहित है और दो गर्भाशय सींग है कि गुर्दे की ओर विस्तार में विभाजित । अंडाशय oviducts (चित्रा 1) के माध्यम से गर्भाशय सींग से जुड़े होते हैं । गर्भाशय गुर्दे के पीछे क्षेत्र में स्थित है ।

  1. गर्भाशय की पहचान
    1. एक मील का पत्थर के रूप में मूत्राशय का उपयोग करके गर्भाशय ग्रीवा को खोजने के लिए, छोड़ दिया और सही गर्भाशय सींग की शाखा खोजने के लिए गर्भाशय ग्रीवा का पालन करें ।
    2. "B-मोड" का चयन करके दो-आयामी देखने/ एक sagittal midline छवि पर मध्य isthmic क्षेत्र में प्रत्येक गर्भाशय सींग के antero-पीछे व्यास को मापने । ultrasonographic प्रणाली सॉफ्टवेयर का उपयोग कर माप का पता लगाएं ।
    3. "B-मोड" में एक sagittal midline छवि पर एंडोमेट्रियल गुहा के पार echogenic सीमा के लिए echogenic सीमा से एंडोमेट्रियल मोटाई को मापने ।
    4. "रंग डॉपलर" चयन करके रंग डॉपलर मोड में बदलें. अंतर्गर्भाशयकला की रक्त की आपूर्ति की पहचान और अंतर्गर्भाशयकला के रक्त प्रवाह को मापने के लिए रंग डॉपलर का उपयोग करें । रंग डॉपलर मोड में निम्नलिखित मापदंडों का चयन करें: उच्च पास फिल्टर 4 हर्ट्ज पर सेट, स्पंदित पुनरावृत्ति आवृत्ति 4 और ४८ kHz के बीच सेट, और ०.२ के बीच स्पंदित डॉपलर गेट सेट ०.५ mm.
  2. गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह की पहचान
    1. प्रत्येक पक्ष पर श्रोणि धमनी के करीब utero-ग्रीवा जंक्शन के पार्श्व-अवर मार्जिन के पास गर्भाशय धमनी में डॉपलर waveforms प्राप्त करें.
    2. डॉपलर मोड में निम्नलिखित मापदंडों का प्रयोग करें: उच्च पास फिल्टर 6 हर्ट्ज पर सेट, स्पंदित पुनरावृत्ति आवृत्ति 4 और ४८ kHz के बीच सेट, और ०.२ से ०.५ मिमी के बीच स्पंदित डॉपलर गेट सेट.
    3. देखभाल करने के लिए रक्त के प्रवाह और डॉपलर बीम को डॉपलर कोण को कम करने के लिए संरेखित करें । डॉपलर बीम और पोत के बीच के कोण को रिकॉर्ड करें । ६० ° के एक कोण से परे लिया गया मान गलत है और6से बचना चाहिए ।
    4. लगातार तीन चक्रों से पीक सिस्टोलिक वेग (पीएसवी) और अंत-डायस्टोलिक वेग (EDV) को मापने । इसके बाद डायस्टोलिक (S/D) अनुपात (पीएसवी/EDV) और प्रतिरोध सूचकांक (आरआई) ([पीएसवी-EDV]/PSV) मान प्रत्येक गर्भाशय हॉर्न के लिए सिस्टोलिक की गणना ।
    5. 9गु, 15वीं, 18 हमल केवें दिन के दौरान 5 गर्भवती चूहों के गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह को मापने ।
  3. अंडाशय और डिंबग्रंथि धमनी रक्त प्रवाह की पहचान
    नोट: मादा चूहे अंडाशय जानवर के दोनों किनारों पर गुर्दे के लिए पार्श्व स्थित हैं और वसा पैड में रहते हैं गर्भाशय सींग के अंत में पाया (चित्रा 1).
    1. अंडाशय छवि के लिए, एक अनुप्रस्थ विमान में जांच के साथ शुरू और यह थोड़ा पसलियों के नीचे जानवर के पार्श्व पहलू पर जगह है । गुर्दे और वसा पैड अंडाशय की तुलना में एक hyperechoic उपस्थिति है ।
    2. अंडाशय और रोम की बाहरी सीमा को मापने । प्रत्येक छवि के पैमाने पर संख्या मिलीमीटर में हैं, ०.१ mm वेतन वृद्धि के साथ ।
      नोट: रंग डॉपलर मोड और पावर डॉपलर मोड इमेजिंग डिम्बग्रंथि तीव्रता और दिशात्मक प्रवाह की पहचान के साथ मदद करता है.

4. अध्ययन के डिजाइन

  1. योनि धब्बा कोशिका द्वारा मद चक्र की जांच करें ।
  2. सभी चूहों दो समूहों में विभाजित । 1 समूह या पूर्व उपजाऊ (या periovulatory) के लिए, चूहों कि proestrus और मद चक्र चरणों में थे शामिल हैं । 2 समूह या बाद के लिए उपजाऊ, चूहों कि जल्दी diestrus और देर diestrus चक्र चरणों में थे शामिल हैं ।
  3. मॉनिटर और 1 और 2 समूहों में मध्य isthmic क्षेत्र में प्रत्येक गर्भाशय सींग के antero-पीछे व्यास की तुलना करें ।
  4. मॉनिटर और एंडोमेट्रियल मोटाई और 1 और 2 समूहों में अंतर्गर्भाशयकला की विशेषताओं की तुलना करें ।
  5. मॉनिटर और आकार (अधिकतम व्यास) और अंडाशय की विशेषताओं की तुलना करें, और समूह 1 और 2 में दोनों अंडाशय में किसी भी periovulatory कूप स्थानीयकृत ।
  6. मॉनिटर और 1 और 2 समूहों में गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह की तुलना करें ।
  7. निगरानी और गर्भावस्था के विभिन्न चरणों में गर्भवती चूहों के गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह की तुलना (दिन 9, 15 और हमल के 18).
  8. SPSS का उपयोग करते हुए सांख्यिकीय विश्लेषण करें । interquartile पर्वतमाला के साथ मतलब ± मानक विचलन (एसडी) या माध्य के रूप में वर्तमान डेटा । विभिंन समूहों के बीच छात्र टी परीक्षण का उपयोग कर परिणामों का विश्लेषण । P-मान से कम ०.०५ एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर माना जाता था ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

वहां antero में कोई महत्वपूर्ण मतभेद-पीछे गर्भाशय सींग व्यास या गर्भाशय के सींग के दोनों पक्षों के बीच अंतर्गर्भाशयकला की मोटाई में थे (तालिका 1) । 2 समूह के साथ तुलना में, 1 समूह में मतलब एंडोमेट्रियल मोटाई मोटा था, लेकिन कोई महत्वपूर्ण अंतर (पी > 0.05) दो समूहों के बीच पाया गया (चित्रा 3) । फिर भी, हम गर्भाशय के अंदर तरल पदार्थ पाया (8 में 28 चूहों से बाहर) अंतर्गर्भाशयकला आकृति विज्ञान में परिवर्तन के साथ जुड़े मद चक्र के पास (चित्रा 2).

डॉपलर अध्ययन भी गर्भाशय सींग के प्रत्येक पक्ष में या गैर-गर्भवती चूहों में मद चक्र के विभिन्न चरणों में प्रवाह वेग तरंग पैटर्न में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं दिखाया (तालिकाएं 1 और 2, चित्र 4a) । हालांकि, गर्भवती चूहों में, के रूप में उन्नत हमल, पीक सिस्टोलिक और अंत-डायस्टोलिक वेग काफी बढ़ गई, और परिकलित प्रतिरोध अनुक्रमणिका काफी कमी आई (तालिका 3, चित्र 4B) ।

अंडाशय का अर्थ व्यास काफी अलग नहीं था (तालिका 1) । जब अंडाशय के दो समूहों के बीच की तुलना की गई थी, periovulatories कूप और अंडाशय के आसपास तरल पदार्थ ovulation (तालिका 2, चित्रा 2) के बाद देखा गया था ।

Figure 1
चित्र 1 : एनाटॉमी कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2 : एंडोमेट्रियल मोटाई (बी-मोड) का मापन. अंतर्गर्भाशयकला (नीली रेखा) (A) की मोटाई । antero-पीछे गर्भाशय सींग व्यास (बड़ी नीली लाइन) और अंतर्गर्भाशयकला की मोटाई (छोटी नीली रेखा) मद चक्र के दौरान (ख) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3 : (क) बाएं अंडाशय के व्यास का मापन; (ख) मद चरण के दौरान अंडाशय और रोम ।

Figure 4
चित्र 4 : गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह की माप । (क) गैर-गर्भवती चूहों में गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह. (ख) गर्भाशय धमनी रक्त के प्रवाह में गर्भवती चूहों के 15 वें दिन ।

(पी > 0.05, प्रत्येक समूह में कोई महत्वपूर्ण अंतर) । SD: Standard DesviationPSV: पीक सिस्टोलिक velocityEDV: end-डायस्टोलिक वेग/D: सिस्टोलिक to डायस्टोलिक ratioRI: प्रतिरोध सूचकांक. ((्ि) = [पीएसवी – EDV]/PSV)

चर
(मिमी ± एसडी)		 बाईं ओर दाईं ओर पी. मान
हॉर्न व्यास (मिमी) 1.78 ± 0.24 1.73 ± 0.28 ०.६२६
अंतर्गर्भाशयकला मोटाई (मिमी) 0.75 ± 0.06 0.76 ± 0.05 ०.७५२
अंडाशय व्यास (मिमी) 0.52 3.62 ± 0.32 ०.१०७
कूप आकार (मिमी) 1.68 ± 0.31 1.74 ± 0.29 ०.८५९
पीएसवी (mm/ 91.52 ± 17.91 93.07 ± 22.87 ०.०५५
EDV (mm/ 34.18 ± 9.36 36.67 ± 11.14 ०.१७८
एस डी/ 2.78 ± 0.59 2.62 ± 0.50 ०.२९४
री 0.62 ± 0.08 0.60 ± 0.08 ०.८७६
(पी > 0.05, प्रत्येक समूह में कोई महत्वपूर्ण अंतर) ।
एसडी: मानक Desviation
पीएसवी: पीक सिस्टोलिक वेग
EDV: अंत-डायस्टोलिक वेग
S/D: सिस्टोलिक करने के लिए डायस्टोलिक अनुपात
आरआई: प्रतिरोध सूचकांक । ((्ि) = [पीएसवी – EDV]/PSV)

तालिका 1: छोड़ दिया और सही गर्भाशय सींग और अंडाशय में मतभेद ।

चर
(मिमी ± एसडी)		 मद टप्पा
(समूह 1)		 गैर मद चरण
(समूह 2)		 पी. मान
हॉर्न व्यास (मिमी) 1.71 ± 0.18 1.83 ± 0.23 ०.४३३
अंतर्गर्भाशयकला मोटाई (मिमी) 0.78 ± 0.04 0.72 ± 0.05 ०.१६८
अंडाशय व्यास (मिमी) 3.71 ± 0.56 3.66 ± 0.47 ०.५१५
पीएसवी (mm/ 92.05 ± 17.93 94.15 ± 20.62 ०.८८६
EDV (mm/ 37.81 ± 9.64 34.72 ± 5.38 ०.०९६
एस डी/ 2.61 ± 0.58 2.77 ± 0.44 ०.२४९
री 0.60 ± 0.08 0.63 ± 0.06 ०.२३२
(पी > 0.05, प्रत्येक समूह में कोई महत्वपूर्ण अंतर) ।
एसडी: मानक Desviation
पीएसवी: पीक सिस्टोलिक वेग
EDV: अंत-डायस्टोलिक वेग
S/D: सिस्टोलिक करने के लिए डायस्टोलिक अनुपात
आरआई: प्रतिरोध सूचकांक । ((्ि) = [पीएसवी – EDV]/PSV)

तालिका 2: गैर-गर्भवती चूहों में विभिन्न मद चक्र चरणों के बीच अंतर.

चर d9 d15 D18 P मान
पीएसवी (mm/ 111.08 ± 5.93ए, बी 122.64 ± 7.49ग 131.91 ± 3.50 < 0.05
EDV (mm/ 38.80 ± 3.37डी, ई 56.43 ± 3.10f 79.29 ± 5.47 < 0.05
एस डी/ 2.87 ± 0.12g, ज 2.17 ± 0.16i 1.67 ± 0.14 < 0.05
री 0.65 ± 0.02 जंमू, कश्मीर 0.54 ± 0.04L 0.39 ± 0.05 < 0.05
पीएसवी = पीक सिस्टोलिक वेग
EDV = समा-डायस्टोलिक वेग.
S/D = सिस्टोलिक to डायस्टोलिक अनुपात (पीएसवी/EDV).
्ि = प्रतिरोध सूचकांक ((री) = ([पीएसवी – EDV]/PSV) ।
D9 = Day 9 का हमल
D15 = Day 15 का हमल
D18 = दिवस 18 के हमल
एसडी: त्रुटियों मानक विचलन (±) इंगित करते हैं ।
(P < 0.05, प्रत्येक समूह में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं)
P मान: D9 vs D15 a = 0.03; घ = 0.001; g = 0.01; j = 0.01.
D9 vs D18 b = 0.003; इ = 0.001; ज = 0.01; k = 0.001.
D15 vs D18 c = 0.03; च = 0.001; i = 0.03; एल = 0.04 ।

तालिका 3: गर्भवती चूहों में गर्भाशय धमनी रक्त प्रवाह में अंतर ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

कारण प्रक्रियात्मक संशोधनों और समस्या निवारण कि इस अध्ययन में आवश्यक था, अल्ट्रासाउंड का उपयोग चूहों में मद चक्र के सभी चरणों की पहचान करने के हमारे उद्देश्य के बावजूद, हम किसी भी महत्वपूर्ण मतभेदों को खोजने में असमर्थ थे. हम परिकल्पना हैं कि ये दिक्कतें इसलिए हो सकती हैं क्योंकि मद चक्र केवल चूहों में कुछ दिन रहता है, महिलाओं में चक्र के विपरीत. हमें यकीन है कि सभी माप बिल्कुल सही समय पर किया गया किसी भी मतभेद निर्धारित कर रहे हैं । इसलिए, हम मद चक्र चरणों को केवल दो चरणों में पुनर्समूहीकृत कर किसी भी अंतर का मूल्यांकन करते हैं, लेकिन कोई भी नहीं देखा गया । के रूप में उंमीद है, हम एक गर्भाशय सींग, जो हमें या तो सींग का चयन करने के लिए भविष्य में माप प्रदर्शन की अनुमति होगी की माप के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर पाया । कुतर पर isoflurane उपयोग के प्रभावों पर अध्ययन विरोधाभासी हैं । यह टेराटोजेनिक हो सकता है, लेकिन केवल अगर कई घंटे या कई दिनों के लिए संवेदनाहारी सांद्रता में प्रशासित । हमारे प्रयोग में, गर्भवती चूहों में परीक्षा का समय 30 मिनट से कम था, इसलिए हमें किसी भी गर्भवती चूहों या उनके वंश में कोई प्रतिकूल प्रभाव नहीं मिला.

हम महिलाओं में प्रजनन तंत्र के अल्ट्रासाउंड मूल्यांकन के लिए और अधिक समानताएं पाया है, जिसमें तोंसिल्लितिस के चरण, periovulatory और स्रावी चरणों के बीच स्पष्ट echogenic मतभेद हैं, लेकिन इस तरह के परिवर्तन चूहे में नहीं देखा गया मॉडल. इस तथ्य को समझाया जा सकता है क्योंकि चूहे मद चक्र चरण केवल पिछले चार पांच दिनों के लिए । लघु मद चक्र चरणों और गर्भावधि समय चूहे के प्रजनन पर अनुसंधान के लिए एक आदर्श पशु5बनाते हैं । फिर भी, इस तथ्य का कारण है कि वहां गर्भाशय सींग, एंडोमेट्रियल मोटाई और मद और गैर मद चरणों में डिम्बग्रंथि व्यास के व्यास में कोई महत्वपूर्ण अंतर हो सकता है । यह वास्तव में सही समय पर माप लेने के लिए मतभेदों का पता लगाने के लिए मुश्किल है, और माप लेने के बावजूद हर दिन, हम महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं मिला ।

उपरोक्त सीमाओं के बावजूद, हम प्रजनन प्रणाली में परिवर्तन की निगरानी करने के लिए एक् ट्रा के उपयोग का प्रस्ताव करते हैं, जिसमें प्रजनन अंगों की मोटाई और आकृति विज्ञान शामिल है । हम ट्रा के इस प्रयोग की पुष्टि कर सकते हैं क्योंकि अंतर्गर्भाशयकला की मोटाई 8-सप्ताहीय Sprague-Dawley चूहों में मापा histopathologically (एक परत ३५९.१३ ± ४९.७० मिमी) के रूप में Jing एट अल. 7 यहां परिणामों के समान है । एंडोमेट्रियल मोटाई histopathologically और sonographically को मापने के लिए विभिंन तकनीकों के बावजूद, हम इसी तरह के परिणाम प्राप्त की । हालांकि बिजली डॉपलर और रंग डॉपलर कई वर्षों के लिए गर्भवती चूहों पर इस्तेमाल किया गया है8,9, गैर-गर्भवती चूहों में गर्भाशय धमनी रक्त के प्रवाह को मापने के कुछ जांच की गई है. अब स् ट्रा के विकास के साथ, हम गर्भावस् था के आरंभ में भी प्रत् येक भिन् न अवस् था के दौरान प्रजनन पथ में बदलाव की निगरानी के लिए इस तकनीक का लाभ ले सकते हैं ।

अल्ट्रासाउंड के भविष्य अनुप्रयोगों भ्रूण आरोपण और चूहे पशु मॉडल में पतली अंतर्गर्भाशयकला के उपचार के तंत्र की खोज शामिल हो सकते हैं । इसके अलावा, रोम के विकास की विशेषताओं की निगरानी करके, हम एक डिंबग्रंथि प्रत्यारोपण मॉडल में अपने समारोह के बारे में अधिक व्यापक ज्ञान प्राप्त कर सकते हैं । वर्तमान में, वहां कुछ जांच कर रहे है 3 डी इमेजिंग का उपयोग कर और चूहों के प्रजनन प्रणाली के आणविक अल्ट्रासाउंड इमेजिंग10, और हम भविष्य में एक पतली अंतर्गर्भाशयकला मॉडल पर इस तकनीक को लागू करेगा ।

हम इस निष्कर्ष है कि चूहे प्रजनन अंग गतिशीलता के अध्ययन के लिए एक उपयुक्त मॉडल है आकर्षित कर सकते है transcutaneous अल्ट्रासाउंड जैव माइक्रोस्कोप का उपयोग कर, जो पशु के बलिदान की आवश्यकता नहीं है ।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस अनुसंधान मर्सिया विश्वविद्यालय के पशु प्रयोग अनुभाग और मर्सिया विश्वविद्यालय के प्रसूति एवं स्त्रीरोग विज्ञान विभाग द्वारा समर्थित किया गया था । हम सभी CEIB में काम कर रहे तकनीशियनों को धंयवाद (Centro प्रयोगात्मक en Investigaciones Biomédicas), मर्सिया विश्वविद्यालय, जो इस परियोजना पर सहयोग किया है की पशु प्रयोग की धारा ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Vevo3100 high-resolution in vivo micro-imaging system* Visual Sonics, inc. www.visualsonics.com/products
Vevo integrated rail system including physiological monitoring unit. Visual Sonics, inc. www.visualsonics.com/products
MX400 Transducter Visual Sonics, inc. www.visualsonics.com/products
Vevo Lab Software Visual Sonics, inc. www.visualsonics.com/products
HSD: Sprague Dawley SD Envigo, inc. Rat strain
Lubricating Gel General Supply
CIBERTEC CA-EAC20 Anesthesia Trolley System Cibertec S.A  Anesthesia Machine
Ecogel 100 ultrasound gel Eco-Med Pharmaceuticals Inc.
Hair removal lotion (Nair)  General Supply
Isoflurane Esteve Veterinaria Inhalatory anesthesia
* Required software is Vevo software including B-Mode application, pulse wave Doppler application, and vascular strain analysis tools package.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hunter, R. K. II, et al. Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cell Effects on a Rodent Model of Thin Endometrium. PLoS ONE. 10 (12), e0144823 (2015).
  2. Wang, H., Dey, S. K. Roadmap to embryo implantation: clues from mouse models. Nat Rev Genet. 7 (3), 185-199 (2006).
  3. Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. C. Murine Echocardiography and Ultrasound Imaging. J Vis Exp. (42), (2010).
  4. Lohmiller, J. J., Swing, S. P. Reproduction and Breeding. The Laboratory Rat. , 2nd, Elsevier Academic Press. 147-164 (2006).
  5. Jaiswal, R. S., Singh, J., Adams, G. P. High-resolution ultrasound biomicroscopy for monitoring ovarian structures in mice. Reprod Biol Endocrinol. 7 (69), (2009).
  6. Kim, G. H. Murine Fetal Echocardiography. J Vis Exp. (72), (2013).
  7. Jing, Z., Qiong, Z., Yonggang, W., Yanping, L. Rat bone marrow mesenchymal stem cells improve regeneration of thin endometrium in rat. Fertil Steril. 101 (2), 587-594 (2014).
  8. Mu, J., Adamson, S. L. Developmental changes in hemodynamics of uterine artery, utero- and umbilicoplacental, and vitelline circulations in mouse throughout gestation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291 (3), H1421-H1428 (2006).
  9. Anderson, C. M., Lopez, F., Zhang, H. Y., Pavlish, K., Benoit, J. N. Reduced uteroplacental perfusion alters uterine arcuate artery function in the pregnant Sprague-Dawley rat. Biol Reprod. 72 (3), 762-766 (2005).
  10. Hongmei, L., et al. Ultrasound Molecular Imaging of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 Expression for Endometrial Receptivity Evaluation. Theranostics. 5 (2), 206-217 (2015).

Tags

चिकित्सा अंक १३० Sprague-Dawley चूहों मद चक्र अल्ट्रासाउंड प्रजनन अंगों रंग फ्लो डॉपलर गर्भाशय धमनी
चूहों पर प्रायोगिक प्रजनन जांच में स् ट्रा
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wang, T., Oltra-Rodríguez, L.,… More

Wang, T., Oltra-Rodríguez, L., García-Carrillo, N., Nieto, A., Cao, Y., Sánchez-Ferrer, M. L. Ultrasonography in Experimental Reproductive Investigations on Rats. J. Vis. Exp. (130), e56038, doi:10.3791/56038 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter