Summary
Het huidige protocol beschrijft een gedetailleerde, real-time NIR-II fluorescentie beeldvormingsoperatie van een muis met behulp van een NIR-II optisch beeldvormingsapparaat.
Abstract
Als een opkomende beeldvormingstechnologie heeft nabij-infrarood II (NIR-II, 1000-1700 nm) fluorescentiebeeldvorming een aanzienlijk potentieel op biomedisch gebied, vanwege de hoge gevoeligheid, diepe weefselpenetratie en superieure beeldvorming met ruimtelijke en temporele resolutie. De methode om de implementatie van NIR-II fluorescentiebeeldvorming voor sommige dringend noodzakelijke gebieden, zoals medische wetenschap en farmacie, te vergemakkelijken, heeft relevante onderzoekers echter verbaasd. Dit protocol beschrijft in detail de constructie en bioimaging toepassingen van een NIR-II fluorescentie moleculaire sonde, HLY1, met een D-A-D (donor-acceptor-donor) skelet. HLY1 vertoonde goede optische eigenschappen en biocompatibiliteit. Bovendien werd NIR-II vasculaire en tumorbeeldvorming bij muizen uitgevoerd met behulp van een NIR-II optisch beeldvormingsapparaat. Real-time hoge resolutie NIR-II fluorescentiebeelden werden verkregen om de detectie van tumoren en vaatziekten te begeleiden. Van sondevoorbereiding tot data-acquisitie, de beeldkwaliteit is sterk verbeterd en de authenticiteit van de NIR-II moleculaire sondes voor gegevensregistratie in intravitale beeldvorming is gewaarborgd.
Introduction
Fluorescentiebeeldvorming is het veelgebruikte moleculaire beeldvormingsinstrument in fundamenteel onderzoek en wordt ook vaak gebruikt om chirurgische tumorresectie in kliniekente begeleiden 1. Het essentiële principe van fluorescentiebeeldvorming is om een camera te gebruiken om fluorescentie te ontvangen die door een laser wordt uitgezonden na de bestraling van monsters (weefsels, organen, enz.) 2. Het proces is binnen enkele milliseconden voltooid3. De fluorescentiebeeldgolflengten kunnen worden onderverdeeld in ultraviolet (200-400 nm), zichtbaar gebied (400-700 nm), nabij-infrarood I (NIR-I, 700-900 nm) en nabij-infrarood II (NIR-II, 1000-1700 nm)4,5,6. Omdat de endogene moleculen zoals hemoglobine, melanine, deoxyhemoglobine en bilirubine in biologische weefsels een sterke absorptie en een verstrooiend effect op het licht in zichtbare gebieden hebben, worden de penetratie en gevoeligheid van licht sterk verminderd en wordt de fluorescentiebeeldvorming in zichtbare lichtgolflengten nadelig beïnvloed 7,8,9.
NIR-II fluorescentiebeeldvorming heeft een lage fotonenabsorptie en -verstrooiing, een hoge beeldsnelheid en een hoog beeldcontrast (of gevoeligheid)10,11. Naarmate de fluorescentiegolflengte toeneemt, neemt de absorptie en verstrooiing van fluorescentie in biologische weefsels geleidelijk af en is de autofluorescentie in het NIR-II-gebied extreem laag12. Zo verhoogt het NIR-II-venster de penetratiediepte van weefsels aanzienlijk en verkrijgt het een hogere resolutie en signaal-ruisverhouding13,14,15. Het NIR-II venster kan verder worden onderverdeeld in de NIR-IIa (1300-1400 nm) en NIR-lIb (1500-1700 nm) windows16. Tot op heden zijn verschillende mijlpaal NIR-II-materialen gemeld, waaronder anorganisch materiaal enkelwandige koolstofnanobuizen, zeldzame aardnanodeeltjes, quantum dots en organische materiaal halfgeleiderpolymeer nanodeeltjes, kleinmolecuulkleurstoffen, aggregatie-geïnduceerde luminescerende materialen, enz. 1,17,18,19,20,21,22. Anorganische nanomaterialen worden gemakkelijk opgehoopt in de lever, milt, enz., en hebben potentiële biotoxiciteit op lange termijn23. Organische fluorofoor met kleine moleculen heeft de voordelen van een snel metabolisme, lage toxiciteit, eenvoudige modificatie en een duidelijke structuur, wat de meest veelbelovende sonde is voor klinisch gebruik24.
Het NIR-II optische beeldvormingssysteem is ook een cruciaal onderdeel van fluorescentiebioimaging omdat het effectief NIR-II-fluorescentiesignalen van de NIR-II-sonde kan verzamelen, waardoor nauwkeurige functionele, anatomische en moleculaire beelden25,26 worden weergegeven. Het NIR-II beeldvormingssysteem bestaat voornamelijk uit kortegolf infraroodcamera's, long-pass (LP) filters, lasers en computerprocessors. In vivo NIR-II fluorescerende beeldvorming wordt beschouwd als een van de meest haalbare beeldvormingsbenaderingen voor het ophelderen van de mechanismen van ziekten en de aard van het leven27,28,29. NIR-II beeldvormingstechnologie is op grote schaal gebruikt in biomedische gebieden zoals kankerceldetectie, dynamische beeldvorming, in vivo gerichte tracering en gerichte therapie, vooral in oncologisch onderzoek30,31. Gezien de hoge technische vereisten van NIR-II-beeldvormingstechnologie op beeldvormingsondes en -instrumenten, puzzelt en beperkt het echter ook het praktische gebruik van onderzoekers op verschillende gebieden. Daarom worden de voorbereiding van NIR-II imaging probes en de toepassingen van NIR-II imaging in detail geïntroduceerd in dit artikel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dierproeven voor NIR-II beeldvormingsstudies werden uitgevoerd in het Animal Experiment Center van de Universiteit van Wuhan, dat is bekroond met de International Association for Experimental Animal Care (AALAC). Alle dierstudies werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van de China Animal Welfare Commission voor de verzorging en het gebruik van proefdieren en goedgekeurd door het Animal Care and Use Committee (IACUC) van het Animal Experimental Center van de Universiteit van Wuhan.
Vrouwelijke BALB/c naakte muizen (~20 g) op de leeftijd van 6 weken werden gebruikt voor deze studie.
1. NIR-II beeldvormingsvoorbereiding
- Plaats in de handel verkrijgbaar zwart karton (zie materiaaltabel) in het midden van de drager. Plaats het monster vervolgens bovenop het zwarte karton, zodat het monster zich in het midden van de drager bevindt (een fase in het beeldvormingsapparaat).
OPMERKING: In vergelijking met wit karton heeft zwart karton minder achtergrondinterferentie tijdens NIR-II-beeldvorming. - Selecteer een geschikt filter op basis van de golflengte van de NIR-II sonde. Druk lang (>2 s) om het doosgebied (zoals 900 LP) dat overeenkomt met het filtermodel in de scherminterface te regelen wanneer het systeem het filter naar het optische beeldpad verplaatst.
- Druk lang op het platform op de aanraakscherminterface van het bedieningsgebied van de dragerconsole, zodat de drager consoles opslaat; druk lang op het platform naar beneden, zodat de drager naar beneden consoles kan worden geplaatst.
- Stel de platformhoogte in op "0 mm" (hoogteverstelling) en gebruik automatische scherpstelling om het NIR-II-beeld helder te maken.
2. Synthese van NIR-II kleurstof (HLY1)
- Weeg de grondstoffen af die nodig zijn voor het synthese-experiment. Zorg ervoor dat ze niet verslechteren.
- Voeg verbinding 1 (200 mg, 0,18 mmol), PdCl 2(dppf)2 CH 2 Cl 2 (28 mg, 0,04 mmol), N-fenyl-N-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl)naftaleen-2-amine (170 mg, 0,4 mmol) en K 2 CO3 (46 mg, 0,34 mmol) toe aantetrahydrofuraan (THF)-oplossing in een erlenmeyer van 25 ml met bodem. Roer het mengsel gedurende 4 uur bij 75 °C onder N 2-atmosfeer (figuur 1A).
OPMERKING: Voor de syntheseprocedure van verbinding 1 en N-fenyl-N-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)fenyl)naftaleen-2-amine, zie Li et al21. De chemische structuren zijn weergegeven in figuur 1A. - Blus na afkoeling tot omgevingstemperatuur de reactie met gedestilleerd (DI) water (80 ml) en extraheer het mengsel met DCM (dichloormethaan)/H2O (30 ml) (drie keer). Zuiver het ruwe product door kolomchromatografie 16 (petroleumether:DCM =10 :1) om van HLY1 een groene vaste stof te maken (78 mg, 30% opbrengst).
- Plaats de kleurstof HLY1 onder de bescherming van stikstof in de koelkast voor later gebruik. Dit kan maximaal 6 maanden bewaard worden.
3. Bereiding van water-opschortende nanoprobe
- Weeg HLY1 (1 mg) en amfipathische inkapselingsmaterialen, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-fosfoethanolamine-N-[amino(polyethyleenglycol)-2k (DSPE-PEG2k, 10 mg; zie materiaaltabel).
- Bereid HLY1 punt20 voor door DSPE-PEG2k te gebruiken als een inkapselingsmatrix (nanoprecipitatiemethode12) (Figuur 1C). Los HLY1 op in THF (1 ml) en voeg langzaam toe aan een bekerglas met DSPE-PEG2k waterige oplossing (9 ml) met ultrasoonapparaat bij 25 °C. Verwijder vervolgens THF uit het mengsel door dialyse20.
- Concentreer de bovenstaande oplossing centrifugaal met ultrafiltratie 18 (7100 x g gedurende10 minuten) en plaats deze vervolgens in een koelkast van 4 °C voor toekomstig gebruik. Deze kan maximaal 1 maand bewaard worden.
OPMERKING: De nanoprobe waterige oplossing geladen door DSPE-PEG2k moet boven 0 °C worden bewaard en zo snel mogelijk worden gebruikt.
4. Constructie van tumordragende muizen
- Kweek 4T1 borstkankercellen van muizen (4T1) in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), aangevuld met 10% (v/v) foetaal runderserum (FBS) en 1% (v/v) penicilline-streptomycine (zie Materiaaltabel), en onderhoud in een bevochtigde couveuse met 5% CO2 bij 37 °C.
- Voor het NIR-II fluorescerende beeldvormingsexperiment, kweek 4T1-cellen (5 x 107) gedurende 24 uur, verteer met trypsine (1 ml) en was tweemaal met serumvrije DMEM (4 ml).
- Verdoof de muizen door te behandelen met isofluraan (2%). Bevestig adequate verdoving door de tenen of de voetzolen van de muizen te stimuleren en observeer of de muizen reageren. Als er geen reactie is, betekent dit dat de anesthesie voldoende is32.
- Injecteer vervolgens met behulp van een insuline-injectienaald het 4T1-celmengsel in de muizen via subcutane injectie (100 μL).
OPMERKING: NIR-II beeldvormingsstudies werden uitgevoerd ~ 2 weken na inenting, toen de tumor was gegroeid tot een volume van ~ 100 mm3. Voordat NIR-II tumor beeldvorming maakt, moet u de tumorgrootte bevestigen. De tumorgrootte werd geschat door een elektronische vernier remklauw voor de huidige studie11.
5. In vivo NIR-II fluorescentie beeldvorming
- Verdoof de muizen door te behandelen met isofluraan (2%) en voer NIR-II-beeldvorming uit van het hele lichaam van de muizen met behulp van een optisch NIR-II-beeldvormingssysteem (zie Materiaaltabel).
OPMERKING: Let op de dosering van het verdovingsmiddel om muizendood te voorkomen. Over het algemeen duurt de anesthesie 5-10 minuten. Stimuleer de tenen of de voetzolen van de muizen en observeer of de muizen reageren. Als er geen reactie is, betekent dit dat de anesthesie voldoende is. - Neem een oplossing van HLY1-stippen (0,8 mg / ml, 200 μl). Injecteer de HLY1-stippen intraveneus in de verdoofde muizen en voer 3 minuten later NIR-II-fluorescentiebeeldvorming uit van de bloedvaten van het hele muizenlichaam met behulp van een NIR-II-beeldvormingssysteem. Focus verder op het hoofd van de muis om vasculaire beeldvorming van de hersenen te verzamelen.
OPMERKING: Gebruik schone experimentele handschoenen tijdens het beeldvormen, wat zal helpen om schone NIR-II-beelden te verkrijgen. - Verzamel de beelden 5 minuten na de injectie van HLY1-stippen in muizen en verwerk de gegevens met behulp van ImageJ-software. De instrumentparameters van het optische NIR-II beeldvormingssysteem zijn 90 mW/cm2 (808 nm laser).
- Na voltooiing van het experiment, euthanaseer de dieren volgens institutioneel goedgekeurde protocollen.
OPMERKING: Voor de huidige studie werden de dieren geëuthanaseerd door ze bloot te stellen aan een teveel aan isofluraan32.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De fluorescerende intensiteit en helderheid van wateropschortende HLY1-stippen werden bepaald door een NIR-II-beeldvormingsinstrument. De fluorescerende intensiteit van HLY1 in het 90% fwTHF/H2O-mengsel was vijf keer zo hoog als in de THF-oplossing, wat wees op een prominent AIE-kenmerk van HLY1 (figuur 1B). Bovendien zonden HLY1-stippen sterke fluorescerende signalen uit onder een LP-filter van 1.500 nm, wat aantoont dat HLY1-stippen kunnen worden gebruikt voor NIR-IIb-beeldvorming (figuur 1D). De maximale absorptie en maximale emissiegolflengte van HLY1-stippen waren respectievelijk 740 nm en 1.040 nm (figuur 2A). Bovendien werd de hydrodynamische grootte van HLY1-stippen bepaald op 145 nm door dynamische lichtverstrooiing (DLS) (figuur 2B). HLY1-stippen (0,2 ml, 0,8 mg / ml) werden toegediend aan normale Balb / c-muizen via staartaderinjectie voor vasculaire beeldvorming (aanvullende figuur 1). De microvaten in de achterhand werden duidelijk geïdentificeerd onder een 1.500 nm LP-filter (figuur 3B). Daarnaast werden de cerebrale vaten ook duidelijk geïdentificeerd onder een 1.500 nm LP-filter (figuur 3A). De NIR-II beeldvormingsprestaties van de HLY1-stippen in 4T1-tumordragende muizen werden ook geëvalueerd via het NIR-II-beeldvormingssysteem. HLY1-stippen (0,2 ml, 0,8 mg / ml) werden intraveneus geïnjecteerd in 4T1-muizen via de staartader. De 4T1-tumor van de tumordragende muizen was duidelijk zichtbaar door NIR-II-beeldvorming (figuur 3C), wat wijst op het EPR-effect van HLY1-stippen. Al deze resultaten suggereren dat HLY1-stippen een heldere NIR-II-fluorescentiesonde zijn, die van toepassing is op vasculaire en tumorbeeldvorming.
Figuur 1: Synthese van kleurstofmoleculen en bereiding van in water opschortende sondes. (A) Het synthetische pad van HLY1 (a: Pd(dppf)Cl 2 CH 2 Cl 2, K 2 CO3, 75 °C). (B) De NIR-II beelden van HLY1 in THF en 90% fw THF/H 2 O (1.000 nm LP,2ms). (C) Een schematisch schema van de bereiding van HLY1-punten. (D) De NIR-IIb fluorescerende intensiteit van HLY1-stippen in waterige oplossing (1.500 nm LP, 200 ms). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: De optische eigenschappen en hydrodynamische grootte van HLY1-stippen. (A) De absorptie- en emissiespectra van HLY1-stippen in waterige oplossing. (B) De DLS van HLY1-stippen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: NIR-II fluorescentie beeldvorming met behulp van HLY1 dots . (A) Hersenen vasculaire beeldvorming bij muizen (1.500 nm LP, 300 ms blootstellingstijd). Schaalbalk: 2 cm. (B) Vasculaire beeldvorming van het hele lichaam bij muizen (1.500 nm LP, 300 ms). (C) 4T1 tumorbeeldvorming (1.250 nm LP, 30 ms). Schaalbalk: 1 cm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Aanvullende figuur 1: NIR-II imaging setup. (A) Schematisch diagram van injectie van HLY1-stippen in muizen. B) De foto van het NIR-II-beeldvormingsapparaat. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
NIR-I fluorescerende beeldvorming kan tot op zekere hoogte worden gebruikt voor tumor- en vasculaire beeldvorming, maar vanwege de beperkte maximale emissiegolflengte van NIR-I-fluoroforen (<900 nm), resulteert dit in slechte weefselpenetratie en tumorsignaalachtergrondverhouding33,34. Een slechte en lage beeldvormingsresolutie kan een afwijking veroorzaken tussen de uitkomst van de beeldvormingsfeedbackbehandeling en het werkelijke therapeutische effect. Bovendien hebben de meeste NIR-I-fluoroforen een slechte optische stabiliteit en een extreem snel metabolisme, wat resulteert in instabiliteit in het beeldvormingsproces. Vanwege de lage weefselpenetratie en instabiliteit van NIR-I fluoroforen is de toepassing in tumor- en vasculaire beeldvorming sterk beperkt35. In vergelijking met NIR-I-licht heeft NIR-II-fluorescentiebeeldvorming de voordelen van aanzienlijk verminderde fotonenverstrooiing en -absorptie, autofluorescentie van lager weefsel, sterkere penetratie van lichaamsweefsel en een betere beeldvormingsresolutie36.
Dit artikel beschrijft een heldere AIE-kleurstof op basis van een D-A-D-skelet, dat een uitstekende stabiliteit heeft. Een effectieve nanoprecipitatiemethode werd gebruikt om een nanoprobe voor te bereiden voor multifunctionele bioimaging, inclusief vaatziekten en tumorbeeldvorming. De hoge kwantumopbrengst in de waterige oplossing is te wijten aan de luminescerende eigenschappen geïnduceerd door aggregatie, die high-definition NIR-II-beeldvorming kan bereiken met een lage dosis en een hoge bioveiligheid. De helderheid van de NIR-II sonde en de oplosbaarheid in water bepalen de kwaliteit van de beeldvorming. Bovendien is het bij het injecteren van een sonde in een muis noodzakelijk om te voorkomen dat de sonde in de staart van de muis lekt, wat de nauwkeurigheid van de beeldvormingsresultaten beïnvloedt. De huidige toedieningsmethode is alleen beperkt tot intraveneuze injectie en kan geen meerdere injectiemethoden gebruiken, wat een beperking is van de huidige methode. Bovendien kan de NIR-II nanoprobe van deze methode alleen worden geaccumuleerd tot het doelwit door passieve targeting en kan het geen specifieke doelen identificeren door actieve targeting.
Bij de implementatie van NIR-II-beeldvorming is de werking van het NIR-II-apparaat ook belangrijk voor de verwerving van beelden. Om vasculaire beeldvorming met hoge resolutie te verkrijgen, moet de InGaAs-camera op de muis worden gericht en dicht bij de muis worden geplaatst, waardoor het gemakkelijk is om de kleine bloedvaten te observeren. Voor tumorbeeldvorming moeten sondes effectief in de tumor worden geaccumuleerd en NIR-II-fluorescentie moet worden uitgezonden door de sondes die zich in de tumor hebben opgehoopt, waardoor de grens tussen de tumor en het omliggende weefsel effectief wordt onderscheiden. Vanwege de hoge gevoeligheid van NIR-II fluorescentiebeeldvorming kunnen beelden dynamisch worden waargenomen tijdens beeldvorming, wat ontbreekt in veel andere beeldvormingstechnieken.
In deze studie wordt de voorbereiding van een fluorescerende sonde geïntroduceerd. Tegelijkertijd wordt hoge resolutie vasculaire en tumorbeeldvorming gerealiseerd door een NIR-II fluorescerende nanoprobe, die een nauwkeurige en effectieve methode biedt voor de detectie van vaatziekten en kanker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door subsidies van NSFC (82273796, 82111530209), Special Funds for Guiding Local Science and Technology Development of Central Government (XZ202202YD0021C, XZ202102YD0033C, XZ202001YD0028C), Hubei Province Scientific and Technical Innovation Key Project (2020BAB058), de Fundamental Research Funds for the Central Universities en de Tibet Autonomous Region COVID-19 Prevention and Control Programs for Science and Technology Development.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anhydrous pyridine | Perimed | 110-86-1 | |
| Anhydrous sodium sulfate | China national medicines Co.,Ltd | SY006376 | |
| Black cardboard | Suzhou Yingrui Optical Technology Co., Ltd | AO00158 | |
| Column chromatography | Energy Chemical | E080498 | |
| Diphenylphosphine palladium dichloride | Sigma-Aldrich | B2161-1g | |
| DSPE-PEG2000 | Ponsure | PS-E1 | |
| Dulbecco's modified eagle medium | Gibco | 8121587 | |
| EGTA | Biofroxx | EZ6789D115 | |
| Fetal bovine serum | Gibco | 2166090RP | |
| Isoflurane | GLPBIO | GC45487-1 | |
| K2CO3 | Macklin | P816305-5g | |
| N. N '- dimethylformamide | China national medicines Co.,Ltd | 02-12-1968 | |
| NIR-II imaging instrument | Suzhou Yingrui Optical Technology Co., Ltd | 16011109 | |
| N-sulfenanilide | Enerry chemical | 1250030-5g | |
| PdCl2(dppf)2CH2Cl2 | TCI | B2064-1g | |
| penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Tetrahydrofuran | China national medicines Co.,Ltd | M005197 | |
| Tetratriphenylphosphine palladium | Immochem | 1021232-5g | |
| Tetratriphenylphosphine palladium | Sigma-Aldrich | 1021232-5g | |
| Tributyltin chloride | Immochem | QH004335 | |
| Trimethylchlorosilane | China national medicines Co.,Ltd | 40060560 |
References
- Liu, Y., et al. Versatile types of inorganic/organic NIR-IIa/IIb fluorophores: from strategic design toward molecular imaging and theranostics. Chemical Reviews. 122 (1), 209-268 (2022).
- Zhou, H., et al. Mn-loaded apolactoferrin dots for in vivo MRI and NIR-II cancer imaging. Journal of Materials Chemistry C. 7 (31), 9448-9454 (2019).
- Zhang, F., Tang, B. Z. Near-infrared luminescent probes for bioimaging and biosensing. Chemical Science. 12 (10), 3377-3378 (2021).
- Yao, C., et al. A bright, renal-clearable NIR-II brush macromolecular probe with long blood circulation time for kidney disease bioimaging. Angewandte Chemie International Edition. 61 (5), 202114273 (2022).
- Gao, S., et al. Molecular engineering of near-infrared-II photosensitizers with steric-hindrance effect for image-guided cancer photodynamic therapy. Advanced Functional Materials. 31 (14), 2008356 (2021).
- Ding, F., Fan, Y., Sun, Y., Zhang, F. Beyond 1000 nm emission wavelength: recent advances in organic and inorganic emitters for deep-tissue molecular imaging. Advanced Healthcare Materials. 8 (14), 1900260 (2019).
- Yang, Y., Zhang, F. Molecular fluorophores for in vivo bioimaging in the second near-infrared window. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (9), 3226-3246 (2022).
- Ding, B., et al. Polymethine thiopyrylium fluorophores with absorption beyond 1000 nm for biological imaging in the second near-infrared subwindow. Journal of Medicinal Chemistry. 62 (4), 2049-2059 (2019).
- Cheng, X., et al. Novel diketopyrrolopyrrole Nir-Ii fluorophores and Ddr inhibitors for in vivo chemo-photodynamic therapy of osteosarcoma. Chemical Engineering Journal. , 136929 (2022).
- Yang, Y., et al. Nir-Ii chemiluminescence molecular sensor for in vivo high-contrast inflammation imaging. Angewandte Chemie International Edition. 59 (42), 18380-18385 (2020).
- Liu, Y., et al. A second near-infrared Ru(Ii) polypyridyl complex for synergistic chemo-photothermal therapy. Journal of Medicinal Chemistry. 65 (3), 2225-2237 (2022).
- Xu, Y., et al. Long wavelength-emissive Ru(Ii) metallacycle-based photosensitizer assisting in vivo bacterial diagnosis and antibacterial treatment. Proceedings of the National Academy of Sciences. 119 (32), 2209904119 (2022).
- Xu, Y., et al. Construction of emissive Ruthenium(II) metallacycle over 1000 nm wavelength for in vivo biomedical applications. Nature Communications. 13 (1), 2009 (2022).
- Wang, S., Li, B., Zhang, F. Molecular fluorophores for deep-tissue bioimaging. ACS Central Science. 6 (8), 1302-1316 (2020).
- Sun, Y., Sun, P., Li, Z., Qu, L., Guo, W. Natural flavylium-inspired far-red to NIR-II dyes and their applications as fluorescent probes for biomedical sensing. Chemical Society Reviews. 51 (16), 7170-7205 (2022).
- Shen, H., et al. Rational design of NIR-II AIEgens with ultrahigh quantum yields for photo- and chemiluminescence imaging. Journal of the American Chemical Society. 144 (33), 15391-15402 (2022).
- Mu, J., et al. The chemistry of organic contrast agents in the NIR-II window. Angewandte Chemie International Edition. 61 (14), 202114722 (2022).
- Lu, S., et al. NIR-II fluorescence/photoacoustic imaging of ovarian cancer and peritoneal metastasis. Nano Research. 15 (10), 9183-9191 (2022).
- Liu, Y., et al. Novel Cd-Mof NIR-II fluorophores for gastric ulcer imaging. Chinese Chemical Letters. 32 (10), 3061-3065 (2021).
- Lin, J., et al. Novel near-infrared II aggregation-induced emission dots for in vivo bioimaging. Chemical Science. 10 (4), 1219-1226 (2018).
- Li, Y., et al. Small-molecule fluorophores for near-infrared IIb imaging and image-guided therapy of vascular diseases. CCS Chemistry. 4 (12), 3735-3750 (2022).
- Li, Y., et al. Novel NIR-II organic fluorophores for bioimaging beyond 1550 nm. Chemical Science. 11 (10), 2621-2626 (2020).
- Li, Y., et al. Organic NIR-II dyes with ultralong circulation persistence for image-guided delivery and therapy. Journal of Controlled Release. 342, 157-169 (2022).
- Li, Y., et al. Self-assembled NIR-II fluorophores with ultralong blood circulation for cancer imaging and image-guided surgery. Journal of Medicinal Chemistry. 65 (3), 2078-2090 (2022).
- Li, Q., et al. Novel small-molecule fluorophores for in vivo NIR-IIa and NIR-IIb imaging. Chemical Communications. 56 (22), 3289-3292 (2020).
- Li, J., et al. Recent advances in the development of NIR-II organic emitters for biomedicine. Coordination Chemistry Reviews. 415, 213318 (2020).
- Li, J., et al. long-fluorescence-lifetime dyes for deep-near-infrared bioimaging. Journal of the American Chemical Society. 144 (31), 14351-14362 (2022).
- Li, C., Chen, G., Zhang, Y., Wu, F., Wang, Q. Advanced fluorescence imaging technology in the near-infrared-II window for biomedical applications. Journal of the American Chemical Society. 142 (35), 14789-14804 (2020).
- Li, B., Lin, J., Huang, P., Chen, X. Near-infrared probes for luminescence lifetime imaging. Nanotheranostics. 6 (1), 91-102 (2022).
- Lei, Z., Zhang, F. Molecular engineering of NIR-II fluorophores for improved biomedical detection. Angewandte Chemie International Edition. 60 (30), 16294-16308 (2021).
- He, S., Song, J., Qu, J., Cheng, Z. Crucial breakthrough of second near-infrared biological window fluorophores: design and synthesis toward multimodal imaging and theranostics. Chemical Society Reviews. 47 (12), 4258-4278 (2018).
- Guo, P., et al. Standardized rat coronary ring preparation and real-time recording of dynamic tension changes along vessel diameter. Journal of Visualized Experiments. (184), e64121 (2022).
- Wang, X., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/P53/Drp1 signaling. Journal of Ethnopharmacology. 293, 115278 (2022).
- Ji, A., et al. Acceptor engineering for NIR-II dyes with high photochemical and biomedical performance. Nature Communications. 13 (1), 3815 (2022).
- Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged Ht22 cells by stimulating Pi3k-Akt-Mapk signaling pathway. Phytomedicine. , (2022).
- Jiang, Y., Pu, K. Molecular probes for autofluorescence-free optical imaging. Chemical Reviews. 121 (21), 13086-13131 (2021).
