Summary
Denne protokol beskriver en enkel og effektiv metode til identifikation af 2,4-dibromphenolmetabolitter i planter.
Abstract
Afgrøder kan i vid udstrækning udsættes for organiske forurenende stoffer, da jord er et stort dræn for forurenende stoffer, der kasseres i miljøet. Dette skaber potentiel menneskelig eksponering gennem indtagelse af forurenende akkumulerede fødevarer. Belysning af optagelsen og metabolismen af xenobiotika i afgrøder er afgørende for vurderingen af risikoen for eksponering via kosten hos mennesker. For sådanne forsøg kræver brugen af intakte planter imidlertid langsigtede eksperimenter og komplekse prøveforberedelsesprotokoller, der kan påvirkes af forskellige faktorer. Plant callus kulturer kombineret med højopløsnings massespektrometri (HRMS) kan give en løsning til nøjagtig og tidsbesparende identifikation af metabolitter af xenobiotika i planter, da det kan undgå interferens fra mikrobielt eller svampemikromiljø, forkorte behandlingsvarigheden og forenkle matrixeffekten af intakte planter. 2,4-dibromphenol, et typisk flammehæmmende og hormonforstyrrende stof, blev valgt som modelstof på grund af dets udbredte forekomst i jorden og dets optagelsespotentiale i planter. Heri blev plantecallus genereret fra asepsisfrø og udsat for sterilt 2,4-dibromphenolholdigt dyrkningsmedium. Resultaterne viste, at otte metabolitter af 2,4-dibromphenol blev identificeret i plantens callusvæv efter 120 timers inkubation. Dette indikerer, at 2,4-dibromphenol hurtigt blev metaboliseret i plantens callusvæv. Således er plantekalluskulturplatformen en effektiv metode til at evaluere optagelsen og metabolismen af xenobiotika i planter.
Introduction
Et stigende antal organiske forurenende stoffer er blevet smidt ud i miljøet på grund af menneskeskabte aktiviteter 1,2, og jord betragtes som et stort dræn for disse forurenende stoffer 3,4. De forurenende stoffer i jorden kan optages af planter og potentielt overføres til organismer på højere trofisk niveau langs fødekæder ved direkte at trænge ind i menneskekroppen gennem afgrødeforbrug, hvilket fører til utilsigtet eksponering 5,6. Planter udnytter forskellige veje til at metabolisere xenobiotika til afgiftning7; Det er vigtigt at belyse metabolismen af xenobiotika, da det styrer den faktiske skæbne for forurenende stoffer i planter. Da metabolitterne kan udskilles via blade (til atmosfæren) eller rødderne, giver bestemmelse af metabolitterne i de meget tidlige eksponeringsfaser mulighed for at teste et udvidet antal metabolitter8. Undersøgelser, der bruger intakte planter, kræver imidlertid langsigtede eksperimenter og komplekse prøveforberedelsesprotokoller, der kan påvirkes af forskellige faktorer.
Plant callus kulturer er derfor et godt alternativ til at studere metabolismen af xenobiotika i planta, da de i høj grad kan forkorte behandlingstiden. Disse kulturer udelukker mikrobiel interferens og fotokemisk nedbrydning, forenkler matrixeffekten af intakte planter, standardiserer dyrkningsbetingelserne og kræver mindre eksperimentel indsats. Plant callus kulturer er med succes blevet anvendt som en alternativ tilgang i metaboliske undersøgelser af triclosan9, nonylphenol10 og tebuconazol8. Disse undersøgelser viste, at de metaboliske mønstre i calluskulturer lignede dem i intakte planter. Denne undersøgelse foreslår en metode til effektiv og nøjagtig identifikation af metabolitter af xenobiotika i planter uden komplekse og tidskrævende protokoller. Her bruger vi plantecalluskulturer i kombination med massespektrometri med høj opløsning til analyse af metabolitter med lavintensitetssignaler11,12.
Til dette formål blev callussuspensioner af gulerod (Daucus carota var. sativus) udsat for 100 μg/l 2,4-dibromphenol i 120 timer i en ryster ved 130 o/min og 26 °C. 2,4-dibromphenol blev valgt på grund af dets forstyrrende endokrine aktivitet13 og udbredte forekomst i jord14. Metabolitterne blev ekstraheret og analyseret ved massespektrometri med høj opløsning. Den her foreslåede protokol kan undersøge in planta metabolisme af andre typer organiske forbindelser, der kan ioniseres.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Differentiering af gulerodscallus
BEMÆRK: Autoklave alt udstyr, der bruges her, og udfør alle operationer i et UV-steriliseret ultrarent arbejdsbord.
- Vernaliser frøene ved at nedsænke de ensartede gulerodsfrø (Daucus carota var. sativus) i deioniseret vand ved 4 °C i 16 timer.
- Overfladesteriliser de vernaliserede frø med 75% ethanol i 20 minutter, og skyl derefter tre gange med sterilt deioniseret vand under aseptiske forhold.
- Yderligere steriliseres frøene med 20%H2O2i 20 min, og vask dem med steriliseret deioniseret vand seks gange under aseptiske forhold.
- Frøene spires aseptisk ved at så dem på hormonfrit MS-medium (pH 5,8, autoklaveret ved 121 °C i 20 min) indeholdende 1% agargel og inkuberes ved 26 °C med en 16 timers fotoperiode (350 μmol/m2s) i 15 dage.
- Få explants ved at skære hypocotyl og cotyledon af kimplanterne i små stykker (0,5 cm).
- Omdan eksplanterne til petriskåle (to til fire eksplanter pr. skål) indeholdende 15-20 ml aseptisk MS-medium suppleret med auximon (2,4-dichlorphenoxyeddikesyre; 1 mg/l) og phytokinin (6-benzylaminopurin; 0,5 mg/l) under aseptiske forhold.
- Inkuber eksplanterne i mørke ved 26 °C i 3-4 uger for at fremkalde callus.
- Adskil callusvævet (ca. 1 cm diameter) dannet fra de oprindelige eksplantater ved hjælp af en steril skalpel og tang.
BEMÆRK: Det nydannede callusvæv er hvidt til cremet gult i farven og fastgøres løst til de oprindelige eksplanter.
2. 2,4-dibromphenolbehandling
- 1 μg 2,4-dibromphenol opløses i 10 ml aseptisk flydende MS-medium (slutkoncentrationen af 2,4-dibromphenol er 100 ppb, pH 5,6-7,0).
- Der tilsættes 3 g frisk gulerodscallus (trin 1.8) i glaskolber indeholdende den tilberedte 2,4-dibromphenolopløsning (fra trin 2.1) under aseptiske betingelser. Betragt dette som 2,4-dibromphenolbehandling.
BEMÆRK: Glaskolberne blev autoklaveret og forseglet ved hjælp af paraffinfilm. - Der anvendes en medium kontrol, der kun indeholder 2,4-dibromphenolopløsningen (fremstillet i trin 2.1) til evaluering af den abiotiske nedbrydning af 2,4-dibromphenol.
- Der anbringes en blindprøve, der kun indeholder gulerodscallus (ingen 2,4-dibromphenolopløsning) for at kontrollere eventuel kontaminering.
- Forbered blindprøven indeholdende gulerod ved kun at tilsætte 3 g frisk opsamlet gulerodscallus i 10 ml sterilt MS-medium.
- 2,4-dibromphenolbehandlingen og medium- og blindprøvekontrollerne inkuberes ved 130 rpm og 26 °C i mørke i en inkubator i 120 timer.
- Glaskolberne fjernes fra inkubatoren for at indsamle prøverne fra 2,4-dibromphenolbehandlingen og kontrollerne efter 120 timers inkubation.
BEMÆRK: Alle prøver blev fremstillet i tre eksemplarer.
3. Forberedelse af prøver
- Hård hud adskilles forsigtigt fra MS-substratet ved filtrering med glasfiberfiltre (0,45 μm) til 2,4-dibromphenolbehandling og kontrollerne. Saml callus efter vask med ultrarent vand tre gange.
- Frysetør den opsamlede callus med flydende nitrogen, og homogeniser derefter den opsamlede callus (0,2 g) med en high-throughput vævskværn ved 70 Hz i 3 min.
- Spike den homogeniserede callus ved at tilsætte 50 μL 25 mg/L surrogat 4-n-NP-d4 med en glasmikrosprøjte og derefter hvirvel i 1 min.
- Sonikere prøverne med 5 ml methanol / vand (1: 1, v / v) i en ultralydator (150 W, 40 kHz) fyldt med isvand i 30 minutter for at ekstrahere 2,4-dibromphenol og metabolitterne.
- Suspensionerne centrifugeres ved 8 000 x g ved 4 °C i 10 minutter, og supernatanterne opsamles ved pipettering.
- Gentag ekstraktionsprocesserne for callusprøven tre gange og kombiner ekstrakterne.
- Ekstrakterne ledes gennem hydrofile lipofile balancerede fastfaseekstraktionspatroner (HLB SPE) med en strømningshastighed på 1 ml/min.
BEMÆRK: HLB SPE-patronerne blev forbehandlet sekventielt med 6 ml methanol og 6 ml vand for at fjerne eventuelle interferenser. - Eluerer analysanderne ved at føre 6 ml methanol gennem HLB SPE-cylinderampulerne. Derefter koncentreres de opnåede elueringsmidler til 1 ml under en mild strøm af nitrogengas til instrumentel analyse.
- 10 μL resulterende elueringsmidler injiceres i UPLC-Q-TOF-MS til analyse af 2,4-dibromphenol og deres metabolitter15.
- Filtrer alle prøverne med en 0,22 μm nylonmembran før instrumentanalyse.
4. Instrumentel analyse
BEMÆRK: 2,4-dibromphenol og deres metabolitters analyser blev udført på en ultra-performance væskekromatograf (UPLC) i kombination med et micrOTOF-QII massespektrometer udstyret med en elektrospray ionisering (ESI), der opererer i positiv og negativ iontilstand.
- Åbn dækslet til søjlevarmeren, og installer UPLC-søjlen ved at forbinde søjleindgangen til indsprøjtningsventilen og søjleudløbet til massespektrometerets indløb.
BEMÆRK: En C18-søjle (50 mm x 2,1 mm; 1,7 μm partikelstørrelse) blev anvendt til separation af analysander ved 40 °C. - Mobil fase A (ultrarent vand) og mobil fase B (methanol af kromatografikvalitet) forbindes til instrumentet ved at indsætte enden af opløsningsmiddelrørene A og B i de tilsvarende opløsningsmiddelflasker.
- Filtrer alle mobile faser (500 ml for hver) gennem et 0,22 μm filter, og soniker i mere end 30 minutter.
- I softwarevinduet skal du klikke på Instrument | Indløbsmetode til redigering af betingelserne for væskekromatogrammet.
- Indstil gradientbetingelserne for mobil fase B som følger: en strømningshastighed på 1,0 ml / min; 0-0,5 min, 5%; 0,5-3,5 min, 5% til 50%; 3,5-6,5 min, 50% til 100%; 6,5-7 min, 100%; 7-10 min, 100% til 5%.
- Indstil injektionshastigheden for prøverne i UPLC-Q-TOF-MS til 0,2 ml / min.
BEMÆRK: Injektionen af prøven programmeres ved hjælp af en fuldautomatisk prøveudtager.
- I softwarevinduet skal du vælge MS-metode og derefter indstille parametrene for Q-TOF-MS: en tørregas (N2) strømningshastighed på 8 l / min, en temperatur på 300-350 ° C; en kapillær spænding på 4.500 V; en kollisionsenergi på 5-45 V; og et komplet scanningsområde på 40-800 Da.
- Prøvehætteglassene anbringes på de tilsvarende steder i prøvebakkerne efter serienummer, og prøvebakkerne sættes i prøvekammeret igen.
BEMÆRK: Hold prøvebakkerne flade, og sørg for, at døren til prøvekammeret er lukket. - I softwarevinduet skal du vælge Filer | Ny til oprettelse af en database. Navngiv databasen.
- Indlæs eksempelprogrammet oprettet ovenfor ved at vælge MS File | Indløbsfil | Injicer volumen.
- Gem databasen i projektets eksempelmappe ved at klikke på Filer | Gem.
- Vælg Kør | Start i softwarens hovedvindue, vælg derefter Hent eksempeldata , og klik på OK i vinduet på starteksempellisten, der køres for at indsamle data.
BEMÆRK: Kromatogrammet i realtid kan ses ved at klikke på Kromatogram | Opdatering i realtid under dataindsamlingsprocessen. - Behandl dataene i softwaren ved at vælge måldatarækken og klikke på vinduet Kromatogram for at se MS-scanningskromatogrammet.
- I vinduet Kromatogram skal du klikke på Skærm | TIC | ScanWaveDS | Tilføj spor | OK at få datteren scanne massespektre.
- Metabolitterne identificeres ved at sammenligne kromatogrammerne for 2,4-dibromphenolbehandlingen og kontrollerne.
- Belyse metabolitkandidaterne ved retentionstid, masse og fragmenteringsmønstre16,17.
BEMÆRK: Fejlen i massenøjagtigheden mellem de eksperimentelle m/z-værdier for metabolitkandidaternes moderioner og deres tilsvarende teoretiske m/z bør være mindre end 10 ppm.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Protokollens trin er afbildet i figur 1. Efter protokollen sammenlignede vi kromatogrammet af gulerodscallusekstraktet fra 2,4-dibromphenolbehandlingen med kontrollerne og fandt otte forskellige toppe, der er til stede i 2,4-dibromphenolbehandlingen, men fraværende i kontrollerne (figur 2). Dette indikerer, at i alt otte metabolitter af 2,4-dibromphenol (M562, M545, M661, M413, M339, M380, M424 og M187) blev påvist med succes i den 2,4-dibromphenolbehandlede gulerodscallus. Derudover blev toppen af moder-2,4-dibromphenol (retentionstid = 0,85 min) ikke fundet i kromatogrammet for 2,4-dibromphenolbehandlingen (figur 2), hvilket indikerer, at 2,4-dibromphenol hurtigt blev metaboliseret i gulerodscallus under forsøgsbetingelserne.
De kromatografiske oplysninger og masseoplysninger, der anvendes til at identificere metabolitterne af 2,4-dibromphenol i gulerodscallus, er opsummeret i tabel 1. 2,4-dibromphenol inkuberet i gulerodscallus førte til dannelsen af metabolitter ved direkte konjugering med glucose (M562, M545, M661 og M413) og aminosyrer (M339, M380 og M424). For eksempel producerede M413 fragmenter ved m / z 250.8954 og 163.1485, som svarer til dibutylphthalat (DBP) og glucose (C6H11O5). M413 blev yderligere metaboliseret til dannelse af disaccharidkonjugationsmetabolitter M661, M545 og M562 ved tilsætning af pentose eller hexose. M339, M380 og M424 blev spekuleret i at være 2,4-dibromphenolalanin, 2,4-dibromphenolacetylalanin og 2,4-dibromphenolacetylasparaginsyre, da de har det karakteristiske neutrale tab af aminosyre (C3H6NO2), acetylalanin (C5H8NO3)og acetylasparaginsyre (C6H8NO5), der producerer de tilsvarende fragmenter ved m/z 89,0932, 129.1140 og 173.1235, henholdsvis15. De præsenterede resultater tyder på, at plantecalluskulturer kan bruges som et effektivt og pålideligt værktøj til at belyse metabolismen af xenobiotika i afgrøder.
Figur 1: Metode skematisk. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Kromatogrammerne for 2,4-dibromphenol (det indsatte billede) og metabolitterne af 2,4-dibromphenol. Denne figur er tilpasset med tilladelse fra Sun et al.15. Ophavsret (2018) American Chemical Society. Klik her for at se en større version af denne figur.
| Metabolit | RT (min.) | ESI-tilstand | Observeret m/z |
Beregnet m/z |
Prædikat formel | Fragmenter (m/z) | Tillidsniveau | |||
| M562 | 0.7 | -H | 562.201 | 562.201 | C18H26Br2O10 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 170,9914(-Br) | MS, MS2 | |||||||||
| M545 | 1.6 | -H | 545.151 | 545.1506 | C17H22Br2O10 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 170,9914(-Br) | ||||||||||
| 528.1433(-ÅH) | MS, MS2 | |||||||||
| M661 | 2.9 | -H | 661.222 | 661.2228 | C21H26Br2O14 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 410.3274(-C15H23O13) | MS, MS2 | |||||||||
| M413 | 4.1 | -H | 413.036 | 413.036 | C12H14Br2O6 | 250,8954(-DBP) | Niveau 1 | |||
| 163.1485(-C6H11O5) | ||||||||||
| 207,8938(250-CO2) | Syntetisk standard, RT, MS, MS2 | |||||||||
| M339 | 5.2 | +H | 339.994 | 339.9886 | C9 H9Br2NR.3 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 87.0773(-C3H6NR.2) | MS, MS2 | |||||||||
| M380 | 5.5 | -H | 380.01 | 380.0094 | C 11 H11Br2NR.4 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 129.1140(-C5H8NR.3) | MS, MS2 | |||||||||
| M424 | 5.8 | -H | 424.012 | 424.0189 | C12H11Br2NR6 | 250,8954(-DBP) | Niveau 2b | |||
| 173.1235(-C6H8NR.5) | MS, MS2 | |||||||||
| M187 | 6.1 | -H | 187.995 | 187.9988 | C6H5BrO2 | 109.1027(-Br) | Niveau 1 | |||
| 170.9914(-ÅH) | Autentisk standard, RT, MS, MS2 | |||||||||
Tabel 1: Oversigt over 2,4-dibromphenol og dets metabolitter fundet i gulerodskallusekstrakter. Denne tabel er tilpasset med tilladelse fra Sun et al.15. Ophavsret (2018) American Chemical Society.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokol blev udviklet til effektivt at identificere biotransformation af xenobiotika i planter. Det kritiske trin i denne protokol er kulturen af planten callus. Den sværeste del er differentieringen og vedligeholdelsen af planten callus, fordi planten callus let inficeres og udvikles til plantevæv. Derfor er det vigtigt at sikre, at alt anvendt udstyr er autoklaveret, og alle operationer udføres under aseptiske forhold. Differentieringen og vedligeholdelsen af plantens callus skal ske i mørke for at undgå autotrofisk vækst og overudvikling. Derudover er dosis og typer af fytohormoner suppleret i MS-mediet kritisk for differentieringen af plantens callus, som bør tage plantearten i betragtning. En overdosis fytohormoner får callus til at udvikle et vaskulært system, men utilstrækkelige phytohormoner begrænser differentieringen af planten callus18. MS-medium- og phytohormonbestandene bør tilberedes friske. Det anbefales stærkt at autoklave MS-mediet før introduktionen af phytohormonerne og den aseptiske hypocotyl.
Pigmenter som klorofyl i intakte planter er et generelt problem i LC-HRMS-målinger 19,20. Planten callus er afledt af aseptisk hypocotyl og er gennemsigtig uden klorofyl. Det betyder, at plantekalluskultur kan optimere matrixeffekten af den intakte plante og tilbyde en nem, men effektiv prøveforberedelsesteknik uden pigmentfjernelsestrin. Analysen af metabolitterne af xenobiotika i plantecallus blev opnået med LC-HRMS på en ikke-målrettet måde15. Plantekalluskulturen kombineret med ikke-målrettet analyse muliggør effektiv identifikation af en storstilet profilering af metaboliske forbindelser. Disse fordele gør metoden ideel til den mekanistiske forståelse af metabolismen af xenobiotika i planter. Der er dog stadig flere begrænsninger for protokollen. For eksempel kan protokollen kun anvendes som reference for den faktiske situation, der opstår i planter i marken på grund af de komplekse miljøforhold. Derudover, da forskellige plante hård hud udviser forskellige metaboliske evner, kan de identificerede metabolitter af xenobiotika variere med typen af callus.
Kendskab til metabolisk transformation af kemikalier i planter er vigtigt for deres sikre udvikling og anvendelse. Den metode, der foreslås her, er effektiv og pålidelig til screening af de genererede metabolitter i planter og kan støtte evalueringen af den dermed forbundne risiko for økosystemer og menneskers sundhed gennem overførsel af fødekæden eller direkte indtagelse af afgrøder via kosten. Denne protokol kan undersøge persistensen af xenobiotika i planter og hjælpe med at screene nye forurenende stoffer. I betragtning af sin fulde metaboliske kapacitet, med færre omkostninger og nedsat tid og kræfter, er plantens calluskultur et godt værktøj til at sammenligne den metaboliske adfærd hos mange forbindelser og opbygge en database til forudsigelse af mulige metabolitter af xenobiotika.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Denne undersøgelse blev støttet af National Natural Science Foundation of China (21976160) og Zhejiang Province Public Welfare Technology Application Research Project (LGF21B070006).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2,4-dichlorophenoxyacetic acid | WAKO | 1 mg/L | |
| 20% H2O2 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10011218-500ML | |
| 4-n-NP, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| 4-n-NP-d4 | Pointe-Claire | ||
| 6-benzylaminopurine | WAKO | 0.5 mg/L | |
| 75% ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 1269101-500ML | |
| 7890A-5975 gas chromatography | Agilent | ||
| ACQULTY ultra-performance liquid chromatography | Waters | ||
| Amber glass vials | Waters | ||
| Artificial climate incubator | Ningbo DongNan Lab Equipment Co.,LTD | RDN-1000A-4 | |
| Autoclaves | STIK | MJ-Series | |
| C18 column | ACQUITY UPLC BEH | ||
| Centrifuge | Thermo Fisher | ||
| DB-5MS capillary column | Agilent | ||
| Dichloromethane | Sigma-Aldrich | 40071190-4L | |
| Freeze dryer | SCIENTZ | ||
| High-throughput tissue grinder | SCIENTZ | ||
| Methanol | Sigma-Aldrich | ||
| MicrOTOF-QII mass spectrometer | Bruker Daltonics | ||
| Milli-Q system | Millipore | MS1922801-4L | |
| Murashige & Skoog medium | HOPEBIO | HB8469-7 | |
| N-hexane | Sigma-Aldrich | H109658-4L | |
| Nitrogen blowing instrument | AOSHENG | MD200-2 | |
| NP isomers, >99% | Dr. Ehrenstorfer GmbH | ||
| Oasis HLB cartridges | Waters | 60 mg/3 mL | |
| Research plus | Eppendorf | 100-1000 µL | |
| Seeds of Little Finger carrot (Daucus carota var. sativus) | Shouguang Seed Industry Co., Ltd | ||
| Shaking Incubators | Shanghai bluepard instruments Co.,ltd. | THZ-98AB | |
| Solid phase extractor | AUTO SCIENCE | ||
| Ultrasound machine | ZKI | UC-6 | |
| UV-sterilized ultra-clean workbench | AIRTECH |
References
- Chakraborty, P., et al. Baseline investigation on plasticizers, bisphenol A, polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals in the surface soil of the informal electronic waste recycling workshops and nearby open dumpsites in Indian metropolitan cities. Environmental Pollution. 248, 1036-1045 (2019).
- Abril, C., Santos, J. L., Martin, J., Aparicio, I., Alonso, E. Occurrence, fate and environmental risk of anionic surfactants, bisphenol A, perfluorinated compounds and personal care products in sludge stabilization treatments. Science of the Total Environment. 711, 135048 (2020).
- Xu, Y. W., et al. Determination and occurrence of bisphenol A and thirteen structural analogs in soil. Chemosphere. 277, 130232 (2021).
- Cai, Q. Y., et al. Occurrence of nonylphenol and nonylphenol monoethoxylate in soil and vegetables from vegetable farms in the Pearl River Delta, South China. Archives of Environmental Contamination and Toxicology. 63 (1), 22-28 (2012).
- Wang, S. Y., et al. et al Migration and health risks of nonylphenol and bisphenol a in soil-winter wheat systems with long-term reclaimed water irrigation. Ecotoxicology and Environmental Safety. 158, 28-36 (2018).
- Gunther, K., Racker, T., Bohme, R. An isomer-specific approach to endocrine-disrupting nonylphenol in infant food. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (6), 1247-1254 (2017).
- Van Eerd, L. L., Hoagland, R. E., Zablotowicz, R. M., Hall, J. C. Pesticide metabolism in plants and microorganisms. Weed Science. 51 (4), 472-495 (2003).
- Hillebrands, L., Lamshoeft, M., Lagojda, A., Stork, A., Kayser, O. Evaluation of callus cultures to elucidate the metabolism of tebuconazole, flurtamone, fenhexamid, and metalaxyl-M in Brassica napus L., Glycine max (L.) Merr., Zea mays L., and Triticum aestivum L. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 68 (48), 14123-14134 (2020).
- Macherius, A., et al. Metabolization of the bacteriostatic agent triclosan in edible plants and its consequences for plant uptake assessment. Environmental Science & Technology. 46 (19), 10797-10804 (2012).
- Sun, J. Q., et al. Uptake and metabolism of nonylphenol in plants: Isomer selectivity involved with direct conjugation. Environmental Pollution. 270, 116064 (2021).
- Schymanski, E. L., et al. Identifying small molecules via high resolution mass spectrometry: communicating confidence. Environmental Science & Technology. 48 (4), 2097-2098 (2014).
- Moschet, C., Anumol, T., Lew, B. M., Bennett, D. H., Young, T. M. Household dust as a repository of chemical accumulation: new insights from a comprehensive high-resolution mass spectrometric study. Environmental Science & Technology. 52 (5), 2878-2887 (2018).
- Ren, Z., et al. Hydroxylated PBDEs and brominated phenolic compounds in particulate matters emitted during recycling of waste printed circuit boards in a typical e-waste workshop of South China. Environmental Pollution. 177, 71-77 (2013).
- de Wit, C. A. An overview of brominated flame retardants in the environment. Chemosphere. 46 (5), 583-624 (2002).
- Sun, J. Q., Chen, Q., Qian, Z. X., Zheng, Y., Yu, S. A., Zhang, A. P. Plant Uptake and Metabolism of e,4-Dibromophenol in Carrot: In Vitro Enzymatic Direct Conjugation. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66 (17), 4328-4335 (2018).
- Chibwe, L., Titaley, I. A., Hoh, E., Simonich, S. L. M. Integrated framework for identifying toxic transformation products in complex environmental mixtures. Environmental Science & Technology Letters. 4 (2), 32-43 (2017).
- Hollender, J., Schymanski, E. L., Singer, H. P., Ferguson, P. L. Nontarget screening with high resolution mass spectrometry in the environment: ready to go. Environmental Science & Technology. 51 (20), 11505-11512 (2017).
- Nafisi, M., Fimognari, L., Sakuragi, Y. Interplays between the cell wall and phytohormones in interaction between plants and necrotrophic pathogens. Phytochemistry. 112, 63-71 (2015).
- Zhang, Q., et al. Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants. Environmental Science & Technology. 53 (13), 7473-7482 (2019).
- Hou, X., et al.
