Presentato qui è un protocollo per l'isolamento del tessuto polmonare decellularizzato regionale. Questo protocollo fornisce un potente strumento per studiare le complessità nella matrice extracellulare e nelle interazioni cellula-matrice.
Articolo metodologico
Presentato qui è un protocollo per l'isolamento del tessuto polmonare decellularizzato regionale. Questo protocollo fornisce un potente strumento per studiare le complessità nella matrice extracellulare e nelle interazioni cellula-matrice.
Il trapianto di polmone è spesso l'unica opzione per i pazienti nelle fasi successive di una grave malattia polmonare, ma questo è limitato sia a causa della fornitura di polmoni donatori idonei che del rigetto acuto e cronico dopo il trapianto. Accertare nuovi approcci di bioingegneria per la sostituzione dei polmoni malati è fondamentale per migliorare la sopravvivenza dei pazienti ed evitare complicazioni associate alle attuali metodologie di trapianto. Un approccio alternativo prevede l'uso di polmoni interi decellularizzati privi di costituenti cellulari che sono tipicamente la causa del rigetto acuto e cronico. Poiché il polmone è un organo così complesso, è interessante esaminare i componenti della matrice extracellulare di regioni specifiche, tra cui la vascolarizzazione, le vie aeree e il tessuto alveolare. Lo scopo di questo approccio è quello di stabilire metodi semplici e riproducibili con cui i ricercatori possono sezionare e isolare il tessuto specifico della regione da polmoni completamente decellularizzati. L'attuale protocollo è stato concepito per i polmoni suini e umani, ma può essere applicato anche ad altre specie. Per questo protocollo, sono state specificate quattro regioni del tessuto: vie aeree, vascolarizzazione, alveoli e tessuto polmonare bulk. Questa procedura consente l'approvvigionamento di campioni di tessuto che rappresentano in modo più accurato il contenuto del tessuto polmonare decellularizzato rispetto ai tradizionali metodi di analisi di massa.
Le malattie polmonari, tra cui la broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO), la fibrosi polmonare idiopatica (IPF) e la fibrosi cistica (FC), rimangono attualmente senza cura 1,2,3,4. Il trapianto di polmone è spesso l'unica opzione per i pazienti nelle fasi successive, tuttavia questa rimane un'opzione limitata sia a causa della fornitura di polmoni donatori idonei che del rigetto sia acuto che cronico dopo il trapianto 3,5,6. Come tale, c'è un b....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Tutti gli studi sugli animali sono stati eseguiti in conformità con la IACUC dell'Università del Vermont (UVM). Tutti i polmoni umani sono stati acquisiti dai servizi di autopsia UVM e gli studi correlati sono stati eseguiti secondo le linee guida dell'IRB dell'UVM.
NOTA: La decellularizzazione dei polmoni suini e umani è stata precedentemente descritta dal nostro gruppo 7,8,9,10,21. In breve, i lobi polmonari interi vengono decellularizzati attraverso la perfusione sequenziale d....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Uno schema generale del protocollo è illustrato nella Figura 1. Una volta padroneggiata, la dissezione regionale del tessuto polmonare decellularizzato è facilmente riproducibile. Determinare la categorizzazione di ciascun campione di tessuto reciso è indispensabile per il successo della procedura di dissezione. Il tessuto vascolare è sostanzialmente più elastico delle vie aeree, quindi l'uso di una pinza per allungare il tessuto è spesso un forte indicatore del fatto che un particolare camp.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
I tessuti decellularizzati provenienti dall'uomo e da altre specie sono frequentemente utilizzati come biomateriali per lo studio della composizione della ECM e delle interazioni cellula-ECM in modelli di coltura ex vivo, inclusi gli idrogel 3D12,13. Analogamente ad altri organi, i polmoni decellularizzati sono stati precedentemente utilizzati per determinare le differenze di composizione della ECM nei polmoni sani rispetto a quelli malati (cioè enfisema.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Nessuno degli autori ha conflitti di interesse.
Gli autori ringraziano i servizi di autopsia UVM per l'approvvigionamento polmonare umano e Robert Pouliot PhD per i contributi alle tecniche di dissezione complessive. Questi studi sono stati supportati da R01 HL127144-01 (DJW).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Bonn Forbici | Fine Science Tools | 14184-09 | |
| Dumont #5 - Pinza Fine Science | Tools | 11254-02 | |
| Pinze, Curvo, S/S, Smussato, seghettato - 130mm | CellPath | N/A | |
| Forbici Fine Temprate | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Moria Iris Forcipe | Fine Science Tools | 11373-22 | |
| Casseruola in vetro Pyrex | Cole-Parmer | 3175-10 |
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Richiedi il permesso di riutilizzare il testo o le figure di questo articolo JoVE
Richiedi permesso