Stimolazione elettrica programmata nei topi

Il topo anestetizzato viene fissato con nastro adesivo su una tavola riscaldante in posizione supina. La vena giugulare destra viene separata e l'estremità prossimale della vena viene legata. Il catetere OC Apolar 1.1 French viene inserito nella vena, quindi il catetere viene fatto avanzare nell'atrio destro e nel ventricolo destro.

Infine, l'estremità distale della vena viene legata per fissare la posizione del catetere e prevenire il sanguinamento. Ciao, sono Naali del laboratorio del Dr.Zver nel Dipartimento di Fisiologia Molecolare e Biofisica del Baylor College of Medicine. Oggi vi mostreremo una procedura per programmare la stimolazione elettrica nei topi.

Usiamo questa procedura nel nostro laboratorio per studiare le aritmie inducibili nei topi. Quindi iniziamo. Prima dell'intervento chirurgico per l'incannulamento e l'inserimento del catetere, utilizzare un tagliacapelli per radere il pelo del topo anestetizzato dalla linea del collo al livello del torace.

Disinfettare l'area chirurgica con il 10% di iodio povidone. Posizionare il mouse in posizione supina e fissare gli arti con nastro adesivo sugli elettrodi ECG incorporati. In una scheda riscaldante, si consiglia un sistema che includa una sonda di temperatura rettale collegata a un termoforo controllato da un sistema di analisi termica, in modo tale che la temperatura corporea sia mantenuta a 37 gradi più o meno un grado Celsius.

Dopo aver confermato con un pizzico di traino che il topo è completamente anestetizzato, praticare un'incisione di mezzo pollice a destra della linea mediana con il termine codale a livello della clavicola. Separare il tessuto sottocutaneo, le ghiandole salivari e i tessuti linfatici mediante dissezione smussata. Per visualizzare la vena giugulare destra, legare l'estremità prossimale della vena con sei suture.

Posizionare un'altra sutura sotto la vena all'estremità distale del segmento visualizzato. Ora avvia l'acquisizione dei dati basata su computer per registrare l'ECG di superficie. Collegare il catetere a uno stimolatore esterno in modalità di registrazione.

Quindi, usa le micro forbici per praticare una piccola incisione nella direzione longitudinale della vena mentre tiri delicatamente la sutura prossimale. Per mantenere la vena diritta, far avanzare il catetere French Octo puller 1.1 attraverso la vena nell'atrio destro e nel ventricolo. La corretta posizione del catetere viene verificata mediante la visualizzazione delle forme d'onda dei quattro elettrogrammi intracardiaci a livello dell'apice del ventricolo destro, della base del ventricolo destro, del nodo ventricolare atriale e dell'atrio destro per legare infine la sutura distale per garantire la posizione del catetere e prevenire possibili sanguinamenti per la stimolazione atriale.

La coppia di elettrodi situata all'interno dell'atrio passa dalla modalità di registrazione alla modalità di stimolazione mentre le altre coppie di elettrodi rimangono in modalità di registrazione. Per determinare se un topo ha una maggiore vulnerabilità alle aritmie atriali, viene eseguita la stimolazione elettrica programmata dell'atrio destro. Innanzitutto, determinare la soglia di stimolazione atriale applicando impulsi di corrente di almeno 52 millisecondi a diverse lunghezze di ciclo di base o BCL per verificare la coerenza della cattura dello stimolo.

Il BCL del treno di impulsi iniziale è leggermente inferiore al BCL intrinseco ed è diminuito di 10 millisecondi. L'ampiezza di corrente tipica richiesta per la cattura dello stimolo è compresa tra 100 e 200 microampere. Dopo aver applicato un treno di stimolazione atriale di 15 secondi a un BC di 100 millisecondi, misurare il tempo di recupero del nodo del seno o SNRT, che è definito come l'intervallo tra l'ultimo stimolo nel treno di stimolazione e l'inizio del primo battito sinusale spontaneo.

Per determinare il periodo refrattario efficace atriale o A ERP, applicare una serie di treni di stimolazione atriale a un BCLS fisso, uno con una coppia di stimoli prematuri più corti, S due. L'intervallo da S uno a S due viene progressivamente ridotto di due millisecondi in ciascun treno di stimolazione da 70 millisecondi a 20 millisecondi con un periodo di recupero di almeno 30 secondi tra ciascun protocollo di stimolazione. L'ERP A è definito come l'intervallo di accoppiamento più lungo tra S uno e S due per gli atri che non sono riusciti a generare un battito propagato con S due.

Un'applicazione simile dei treni di stimolazione atriale e degli stimoli prematuri viene utilizzata per determinare il periodo refrattario effettivo del nodo ventricolare atriale AV NERP. L'AV NERP è definito come l'intervallo di accoppiamento più lungo da S uno a S due in cui la stimolazione prematura erogata all'atrio è seguita da un potenziale di sibilo, ma non da un complesso QRS. L'inducibilità delle aritmie atriali, inclusa la fibrillazione atriale, può essere testata utilizzando il protocollo di stimolazione burst in cui viene applicata una serie di burst di due secondi.

Il primo burst di due secondi ha una durata del ciclo o CL di 40 millisecondi e ogni burst successivo di due secondi ha un CL di due millisecondi più corto del burst precedente fino al CL finale di 20 millisecondi. Al termine di tutti i protocolli di stimolazione, l'acquisizione dei dati viene interrotta. Nel caso di studi EP terminali, il nodo viene allentato delicatamente per rilasciare il catetere.

Qui mostriamo alcuni ECG di superficie rappresentativi ed elettrogrammi intracardiaci in un topo. Questo ECG di superficie mostra un ritmo sinusale regolare con una frequenza di circa 540 battiti al minuto. Questi quattro elettrogrammi successivi mostrano registrazioni di elettrogrammi intracardiaci bipolari a livello dell'atrio destro.

Il nodo ventricolare atriale, la base del ventricolo destro e l'apice del ventricolo destro. L'onda intracardiaca a nell'elettrogramma che registra a livello dell'atrio destro corrisponde all'onda P sulla superficie. CCG. L'onda V sull'elettrogramma ventricolare corrisponde all'onda QRS sulla superficie CCG.

Successivamente mostriamo gli elettrogrammi CCG e intracardiaci di superficie rappresentativi e un topo che ha sviluppato fibrillazione atriale dopo la stimolazione atriale burst sulla superficie. CCG, l'intervallo RR è irregolare e non ci sono onde P apparenti. D'altra parte, l'elettrogramma atriale rivela segnali atriali rapidi che sono irregolari coerenti con la fibrillazione atriale.

L'elettrogramma ventricolare ha una frequenza più lenta simile agli intervalli RR dell'elettrocatetere di superficie. Abbiamo appena mostrato come eseguire la programmazione della stimolazione elettrica nel mouse quando si esegue questa procedura, è importante ricordare di evitare sanguinamenti estesi e di mantenere la temperatura corporea entro l'intervallo normale da 36 a 37 gradi. Inoltre, cercare di ridurre al minimo l'esposizione ad Asof Florin perché l'esposizione a una concentrazione più lunga di due ore potrebbe sopprimere la funzione cardiaca e respiratoria nel topo.

Pertanto, si consiglia che tutto sia complicato entro due ore. Quindi questo è tutto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.