drosofila Condizionamento del corteggiamento: un metodo per testare l'apprendimento e la memoria nelle mosche
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-In primo luogo, isolare i maschi singoli naïve o non accoppiati di Drosophila melanogastor. Poi, per condizionare i maschi, aggiungete una femmina che si è già accoppiata, e quindi non è ricettiva al corteggiamento. Il maschio mostra comportamenti tipici del corteggiamento come orientarsi verso di lei, seguirla, toccarla con una zampa anteriore ed estendere e vibrare l'ala per produrre il canto del corteggiamento. Può anche tentare di leccare e accoppiarsi. Indipendentemente dagli sforzi, la femmina rimane non ricettiva e il maschio sperimenta un rifiuto. Così, impara a non corteggiare una femmina precedentemente accoppiata.
Per testare la memoria del maschio, lascialo riposare e poi esponilo a un'altra femmina accoppiata. Il maschio addestrato non tenterà di corteggiare questa mosca perché conserva il ricordo del rifiuto passato. Nel protocollo di esempio, vedremo come vengono gestite le mosche durante le fasi di addestramento e test di un test di condizionamento del corteggiamento per la valutazione della memoria a breve e lungo termine.
- Inizia anestetizzando tutti gli adulti dai file di accoppiamento di quattro giorni. Separare i sessi e trasferire le singole femmine preaccoppiate in ciascuno dei 12 pozzetti di una fila di un blocco abitativo. Quindi, usando un aspiratore e senza anestesia, rimuovi i maschi ingenui dai loro pozzetti di casa e trasferiscili nei pozzetti contenenti le femmine preaccoppiate. Ripeti questo processo nella seconda riga per impostare altre 12 coppie.
Per testare l'apprendimento o la memoria a breve termine, esegui questa configurazione all'alba e lascia che il periodo di allenamento duri un'ora. Per testare la memoria a lungo termine, prepara le coppie quattro ore prima dell'alba soggettiva e lascia che l'allenamento vada avanti per otto ore.
- Affinché l'apprendimento e la memoria siano stabiliti, è importante che i maschi non riescano a copulare, quindi controllate periodicamente le coppie durante il periodo di addestramento, per assicurarvi che i maschi vengano respinti.
Al termine del periodo di addestramento, rimuovere delicatamente i maschi dai pozzetti utilizzando un aspiratore, non un'anestesia con anidride carbonica. Caricare i maschi in un nuovo blocco abitativo. Per l'esperimento di apprendimento, testare immediatamente i maschi dopo l'addestramento, senza un periodo di riposo. Per l'esperimento di memoria a breve termine, concedere ai maschi un'ora di riposo prima di iniziare la fase di test. Per l'esperimento di memoria a lungo termine, far riposare i maschi fino alla successiva alba soggettiva.
Per prepararsi alla fase di test dell'esperimento, anestetizzare le femmine preaccoppiate e trasferirle in una nuova fiala di cibo normale. Attendere almeno un'ora affinché le mosche si riprendano dall'anestesia. Quindi, prepara la configurazione del test. Assicurati di avere i videoregistratori pronti per registrare l'attività nelle arene di corteggiamento.
Per iniziare il test, utilizzare un'aspirazione delicata per trasferire un maschio di prova dal blocco di alloggio all'arena di corteggiamento con i divisori chiusi. Sposta i buchi di ingresso tra le arene fino a quando tutte le 18 arene non sono piene di singoli maschi. Quindi, usando la stessa tecnica, trasferisci le singole femmine preaccoppiate in ciascuna delle 18 arene, ma sul lato opposto dei divisori. Ora, capovolgi con cura l'arena di corteggiamento e posizionala sotto la videocamera con le aperture del pozzo verso il basso verso la superficie della panchina bianca. Quindi, rimuovi i divisori e avvia la registrazione video. Registra almeno 10 minuti di attività. Al termine dell'esperimento, rimuovere le mosche dalle arene utilizzando un aspirapolvere e ventilare le camere di corteggiamento per almeno 10 minuti prima di essere riutilizzate.
