Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo Contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Plaats eerst borstvetkussens of MMP's in een schaal met Trypsin-EDTA-oplossing en incubeer gedurende de gewenste duur om de adhesie van de celmatrix te doorbreken. Was de MMP's met gedeioneerd water en zeef door een zeef. Doe de tissues in een bekerglas met een roerstaafje en voeg Triton X-100 toe. Roer naar lysecellen zonder de groeifactoren in de extracellulaire matrix van het weefsel te beïnvloeden.
Zeef de MSP's en spoel af met gedeioneerd water. Breng weefsels terug naar de beker en voeg deoxycholzuur toe om de resterende cellen te lyseren. Zeef vervolgens de MMP's en plaats ze in een bekerglas met gedeï gedeï gedeïdiseerd water met penicilline-streptomycine om besmetting te voorkomen. Incubeer het bekerglas 's nachts op 4 graden Celsius.
Zeef MSP's en plaats ze in een bekerglas dat ethanol en perazijnzuur bevat. Het perazijnzuur verhoogt de stijfheid van de extracellulaire matrix van het weefsel. Roer enige tijd en herhaal de spannende stap. Was de MSP's met PBS en vervolgens met gedeioneerd water. Breng de gespannen MSP's over naar een bekerglas met propaan-1-ol.
Roer enige tijd, zeef de inhoud en was MMP's met gedeioneerd water. Droog de MFPs en bewaar bij min 80 graden Celsius. In het volgende protocol zullen we de decellularisatie van muriene melkvetkussens uitvoeren.
Plaats eerst de MMP's in gerechten van zes centimeter met vijf milliliter Trypsin-EDTA-oplossing. Spray en veeg de vaat af met 70% ethanol en incubeer een uur lang bij 37 graden Celsius. Gebruik 0,7 millimeter zeefmachines om de MFPs met gedeioneerd water te wassen door driemaal water over het weefsel te gieten. Gebruik een tang om het weefsel tussen de wasbeurten door handmatig te masseren.
Droog vervolgens het weefsel kort af op een delicate taakveeg en weeg het af. Plaats de gedroogde weefsels in een voorgeautoclaveerd bekerglas met een geschikte roerstaaf en bedek de weefsels met 60 milliliter van 3% t-octylfenoxy polyethoxyethanol per gram weefsel. Roer gedurende een uur op kamertemperatuur. Dump vervolgens de inhoud van de beakers in een zeef.
Spoel het bekerglas af met gedeïdealiseerd water en giet dit op de tissues. Herhaal dit spoelproces nog twee keer en zorg ervoor dat u een tang gebruikt om het weefsel tussen de spoelingen handmatig te masseren. Droog hierna het weefsel kort op een delicate taak veeg en weeg. Doe de tissues en de roerstaven terug in dezelfde beakers en bedek ze met 60 milliliter 4% deoxycholzuur per gram weefsel. Roer een uur op kamertemperatuur.
Gooi vervolgens de inhoud van het bekerglas in een gaaszeef. Spoel het bekerglas af met gedeïdealiseerd water en giet dit op de tissues. Herhaal dit spoelproces nog twee keer en zorg ervoor dat u een tang gebruikt om het weefsel tussen de spoelingen handmatig te masseren. Droog het gespoelde weefsel kort op een delicate taakdoek en weeg het af.
Plaats de gedroogde weefsels in hetzelfde bekerglas samen met vers gedeïdeioniseerd water aangevuld met 1% penicilline streptomycine. Bedek het bekerglas goed met paraffinefolie en laat het een nacht op 4 graden Celsius staan. Giet de volgende dag de bekerinhoud af in een zeef. Droog het weefsel kort op een delicaat taakveeg en weeg het af. Plaats vervolgens de MSP's in hetzelfde bekerglas met een roerstaaf van het juiste formaat.
Bedek het weefsel met 60 milliliter oplossing met 4% ethanol en 0,1% perazijnzuur per gram weefsel. Roer twee uur op kamertemperatuur. Gooi de inhoud van het bekerglas in een zeef van 0,7 millimeter. Gebruik een tang om het weefsel handmatig te masseren en plaats de inhoud terug in het bekerglas. Was het weefsel door het te bedekken met 60 milliliter 1X PBS per gram weefsel.
Roer gedurende 15 minuten op kamertemperatuur. Herhaal dit hele wasproces nog een keer. Dump vervolgens de inhoud van het bekerglas in een zeef van 0,7 millimeter. Masseer met een tang het weefsel handmatig en plaats de inhoud terug in het bekerglas. Was het weefsel door het te bedekken met 60 milliliter gedeioneerd water per gram weefsel.
Roer gedurende 15 minuten op kamertemperatuur. Herhaal dit hele wasproces nog een keer. Droog het gewassen weefsel kort op een delicaat taakdoekje en weeg het af. Gooi het weefsel en de inhoud in een zeef en gebruik een tang om het weefsel handmatig te masseren. Plaats de inhoud terug in het bekerglas en bedek de weefsels met 60 milliliter 100% n-propanol per gram weefsel.
Roer een uur op kamertemperatuur. Droog vervolgens het weefsel kort op een delicate taakveeg en weeg het af. Gooi het weefsel en de inhoud in een zeef van 0,7 millimeter en gebruik een tang om het weefsel handmatig te masseren. Plaats de inhoud terug in het bekerglas en was het weefsel door het te bedekken met 60 milliliter gedeï gedeï gedeïdeerd water per gram weefsel.
Roer gedurende 15 minuten op kamertemperatuur. Herhaal dit wasproces drie keer. Droog hierna het weefsel kort af op een delicate taakveeg en weeg het af. Breng het weefsel over in een gelabelde buis van 15 milliliter en vries 's nachts in bij een negatieve 80 graden Celsius.
