Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Tout d’abord, placez les tampons graisseux mammaires ou les MPF dans un plat avec la solution Trypsin-EDTA et incubez pendant la durée désirée pour briser les adhérences de matrice cellulaire. Lavez les MPF avec de l’eau déionisée et filtrez à travers une passoire. Placer les tissus dans un bécher avec une barre de remue-remuer et ajouter triton X-100. Remuer pour lyser les cellules sans affecter les facteurs de croissance dans la matrice extracellulaire du tissu.
Filtrer les MPF et rincer à l’eau déionisée. Transférez les tissus au bécher et ajoutez de l’acide désoxycholic pour lyser les cellules restantes. Ensuite, filtrer les MPF et les placer dans un bécher contenant de l’eau déionisée avec de la pénicilline-streptomycine pour prévenir la contamination. Incuber le bécher à 4 degrés Celsius pendant la nuit.
Filtrer les MPF et les placer dans un bécher contenant de l’éthanol et de l’acide périacétique. L’acide périacétique augmente la rigidité de la matrice extracellulaire du tissu. Remuer pendant un certain temps et répéter l’étape de tension. Laver les MPF avec du PBS, puis avec de l’eau déionisée. Transférez les MPF tendus à un bécher contenant du propane-1-ol.
Remuer pendant un certain temps, filtrer le contenu et laver les MPF avec de l’eau déionisée. Séchez les MPF et stockez à moins 80 degrés Celsius. Dans le protocole suivant, nous effectuerons la décellularisation des tampons de graisse mammaire murine.
Tout d’abord, placez les MFPs dans des plats de six centimètres avec cinq millilitres de solution Trypsin-EDTA. Vaporiser et essuyer la vaisselle avec 70% d’éthanol et incuber à 37 degrés Celsius pendant une heure. Utilisez des passoires de 0,7 millimètre pour laver les MPF avec de l’eau déionisée en versant de l’eau sur le tissu à trois reprises. Utilisez des forceps pour masser manuellement les tissus entre les lavages.
Ensuite, séchez brièvement le tissu sur une tâche délicate essuyez et pesez-le. Placez les tissus séchés dans un bécher pré-autoclavé contenant une barre d’agitation de taille appropriée, et couvrez les tissus de 60 millilitres de polyéthoxyéthanol t-octylphénoxy par gramme de tissu. Remuer pendant une heure à température ambiante. Ensuite, jetez le contenu des beakers dans une passoire.
Rincer le bécher à l’eau déionisée et verser sur les tissus. Répétez ce processus de rinçage deux fois de plus, en vous assurant d’utiliser des forceps pour masser manuellement les tissus entre les rinçages. Après cela, séchez brièvement le tissu sur une tâche délicate essuyer et peser. Remettre les tissus et les barres émottes dans les mêmes bechers et les recouvrer de 60 millilitres d’acide désoxycholique à 4 % par gramme de tissu. Remuer à température ambiante pendant une heure.
Ensuite, videz le contenu du bécher dans une passoire en maille. Rincer le bécher à l’eau déionisée et verser sur les tissus. Répétez ce processus de rinçage deux fois de plus, en vous assurant d’utiliser des forceps pour masser manuellement les tissus entre les rinçages. Séchez brièvement le tissu rincé sur un chiffon de tâche délicat et pesez-le.
Placez les tissus séchés dans le même bécher avec de l’eau déionisée fraîche complétée par 1% de streptomycine de pénicilline. Couvrir le bécher hermétiquement de film de paraffine et laisser à 4 degrés Celsius pendant la nuit. Le lendemain, égoutter le contenu du bécher dans une passoire. Séchez brièvement le tissu sur une tâche délicate essuyez et pesez-le. Ensuite, placez les MPF dans le même bécher avec une barre d’agitation de taille appropriée.
Couvrir le tissu de 60 millilitres d’une solution contenant 4 % d’éthanol et 0,1 % d’acide périacétique par gramme de tissu. Remuer à température ambiante pendant deux heures. Jetez le contenu du bécher dans une passoire de 0,7 millimètre. Utilisez des forceps pour masser manuellement le tissu et remettre le contenu dans le bécher. Lavez le tissu en le couvrant de 60 millilitres de 1X PBS par gramme de tissu.
Remuer à température ambiante pendant 15 minutes. Répétez tout ce processus de lavage une fois de plus. Ensuite, videz le contenu du bécher dans une passoire de 0,7 millimètre. À l’aide de forceps, masser manuellement le tissu et remettre le contenu dans le bécher. Lavez le tissu en le couvrant de 60 millilitres d’eau déionisée par gramme de tissu.
Remuer à température ambiante pendant 15 minutes. Répétez tout ce processus de lavage une fois de plus. Séchez brièvement le tissu lavé sur un chiffon de tâche délicat et pesez-le. Jetez le tissu et le contenu dans une passoire et utilisez des forceps pour masser manuellement le tissu. Remettre le contenu dans le bécher et couvrir les tissus de 60 millilitres de 100% n-propanol par gramme de tissu.
Remuer à température ambiante pendant une heure. Ensuite, séchez brièvement le tissu sur une tâche délicate essuyez et pesez-le. Jetez le tissu et le contenu dans une passoire de 0,7 millimètre et utilisez des forceps pour masser manuellement le tissu. Remettre le contenu dans le bécher et laver les tissus en le couvrant de 60 millilitres d’eau déionisée par gramme de tissu.
Remuer à température ambiante pendant 15 minutes. Répétez ce processus de lavage trois fois. Après cela, séchez brièvement le tissu sur une tâche délicate essuyez et pesez-le. Transférer le tissu dans un tube étiqueté de 15 millilitres et congeler à 80 degrés Celsius négatif pendant la nuit.
