Name: Metastasi sperimentale e CTL adottivi Immunoterapia modello di trasferimento del mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T15:03:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Scopri l'immunoterapia con CTL adottivi per studiare le metastasi polmonari nel topo. Questo metodo permette di valutare l'efficacia del trattamento mediante iniezione di cellule tumorali e quantificazione dei noduli con inchiostro di India.

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1. Modello sperimentale Metastasi mouse <ol><li> Il giorno prima della iniezioni di cellule tumorali, semi di uno T75 fiasco con un massimo di 1 x 10 7 CMS4-Met cellule in 10 ml di terreno RPMI contenente il 10% del siero per ottenere cellule tumorali in rapida crescita. Incubare per una notte a 37 ° C. </li><li> Il giorno di iniezione, rimuovere il terreno e lavare le cellule una volta con PBS e poi raccogliere le cellule tumorali con il 0,05% tripsina-EDTA a 37 ° C per 5 minuti. Arrestare la reazione con 10 ml di medium RPMI contenente 10% siero. Trasferire le cellule in una provetta conica. </li><li> Spin giù le cellule a 1300 rpm in una centrifuga Sorvall Legenda RT per 3 minuti a temperatura ambiente. Rimuovere il surnatante. Risospendere le cellule in 10 ml fresca 1X HBSS da lavare, poi girare di nuovo e risospendere nello stesso modo. </li><li> Contare le cellule tumorali in un emocitometro. Diluire le cellule in HBSS, in modo che le cellule necessarie per ogni iniezione vengono risospese in un volume totale di 100 ul. </li><li> Caldo della settimana 6-8 vecchi topi BALB / c in un bicchiere immerso in acqua calda per dilatare la vena della coda. Posizionare il mouse su un dispositivo di immobilizzazione coda vena in panchina. Utilizzare una microsiringa di iniettare 100 l di cellule tumorali nella vena della coda laterale. Utilizzare una tecnica asettica per evitare l'infezione. Dopo l'iniezione, applicare una leggera pressione al sito di iniezione fino a sanguinamento si è fermato. </li><li> Ritorna il mouse per la gabbia, e permettere al tumore di crescere allo stadio desiderato. </li></ol> 2. Linfociti T citotossici (CTL) Immunoterapia trasferimento adottivo <ol><li> Il giorno del trasferimento, pipetta su e giù per risospendere citotossici purificato linfociti T, o CTL, preparato come descritto nel testo. Trasferire tutte le celle da una piastra in una provetta da 15 ml conica, non lasciando che il volume di superare più di 2 / 3 del tubo. </li><li> Inserire una pipetta Pasteur sterile nel tubo conico e laici Media linfociti separazione, o LSM, sotto le cellule fino a quando il volume totale si avvicina 14 mL. </li><li> Fare attenzione a non disturbare gli strati. Centrifugare a 2000 rpm per 20 minuti a temperatura ambiente. Non utilizzare il freno per rallentare il rotore dopo la filatura. </li><li> Trasferire il CTL di un nuovo tubo 15 ml. Aggiungi HBSS ad un volume di circa 10 ml per il lavaggio. </li><li> Contare le cellule. Spin down a 1300 rpm per 5 minuti a temperatura ambiente. Risospendere in HBSS alla densità cellulare richiesto per preparazioni iniettabili, mantenendo il volume totale per iniezione a 100 ul. </li><li> Utilizzare la stessa tecnica di iniezione coda come si è visto in precedenza in questo video per iniettare il CTL in topi portatori di tumore. </li><li> Ritorna il mouse per la gabbia, e consentire al CTL di interagire con il tumore. I topi sono di solito sacrificati per l'analisi di 14-21 giorni dopo il trattamento CTL. </li></ol> 3. Visualizzazione delle metastasi polmonari <ol><li> Per visualizzare metastasi polmonari, posto un topo sacrificato sulla sua schiena su una tavola di polistirolo. Pin le gambe per garantire libero accesso alla trachea. Spruzzare il lato ventrale con il 70% di etanolo. </li><li> A partire dalla metà addome, usare le forbici per tagliare lungo la linea mediana, attraverso la cassa toracica, e in alto verso le ghiandole salivari. Esporre la trachea. Usare pinze per rimuovere tessuti circostanti la trachea. </li><li> Filetto da 200 microlitri punta della pipetta sotto la trachea. Tenendo la punta con una mano, sollevare delicatamente la trachea e lontano dal corpo. </li><li> Ruotare la piattaforma 180 °. Utilizzare una siringa da 50 ml per iniettare inchiostro India nei polmoni attraverso la trachea. Completamente gonfiare i polmoni con l'inchiostro fino a sentire una forte resistenza. </li><li> Usare le forbici per tagliare la trachea. Far scorrere un paio di pinze sotto i polmoni e sollevare fuori del mouse. Sciacquare i polmoni brevemente in un bicchiere da 1 litro d'acqua. </li><li> In una cappa, trasferire i polmoni di una fiala di scintillazione in vetro contenente 5 ml di soluzione di Fekete. Il tessuto tumorale emergerà come noduli bianco sui polmoni nero dopo pochi minuti. I tumori possono essere contati e conservati in soluzione Fekete a tempo indeterminato. </li></ol> 4. Metastasi Rappresentante in Polmoni Visualized <ol><li> Qui, i polmoni di topi che sono stati iniettati con 4T1 carcinoma mammario linea mostrare macchie bianche che indicano i tumori. I topi che sono stati iniettati con cellule 4T1 trasfettate con un dominante negativo IRF8 K79E mutante mostrano il potenziale maggiore metastatico delle cellule tumorali. </li><li> Queste immagini mostrano una analisi istologica di efficacia del trasferimento CTL immunoterapia adottiva. Portatori di tumore nei topi iniettati con soluzione salina ha mostrato tumori multipli dopo 6 giorni, indicato da frecce gialle (A). I topi iniettati con tumore-specifiche cellule T, invece, ha mostrato una riduzione dei tumori (B). </li><li> Nello stesso esperimento, il trattamento con inchiostro di china offre un modo semplice per misurare l'efficacia di CTL trasferimento adottivo. Qui, i noduli tumorali bianco su portatori di tumore dei polmoni distinguerli nettamente dai polmoni che hanno superato con successo CTL trasferimento adottivo, e contando i noduli permette un gradodi quantificazione non è possibile con istologia. </li></ol> 5. Rappresentante Risultati <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Schema sperimentale a fini sperimentali o metastasi tumorali e CTL modello di trasferimento di adattamento immunoterapia del mouse. I punti rossi indicano le cellule tumorali e puntini verdi indicano CTL. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Turbativa di IRF8 funzione migliorato il potenziale metastatico delle cellule tumorali. Carcinoma mammario del topo 4T1 linea cellulare è stata stabilmente transfettate con vettore (4T1.Vector) o vettoriale che esprime uno IRF8 dominante negativo mutante K79E (4T1.IRF8K79E) (15, 16). Le cellule tumorali sono state iniettate nelle vene iv coda di topo laterale. Portatori di tumore polmonare sono stati gonfiati con inchiostro di china di visualizzare noduli tumorali. Noduli tumorali sono facilmente visibili come macchie bianche sullo sfondo nero del tessuto polmonare. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Analisi istologica di efficacia del trasferimento CTL immunoterapia adottiva. Sarcoma linea di topi cellule CMS4-Met è stato somministrato per via endovenosa nelle vene coda di topo laterale. Tre giorni dopo, soluzione salina (A) o tumore-specifica delle cellule T (B) sono state iniettate in topi portatori di tumore. I polmoni sono stati analizzati sei giorni dopo il trattamento convenzionale con CTL colorazione H &amp; E istologici. Noduli tumorali sono indicati da frecce. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Visualizzazione di noduli tumorali dall'inflazione inchiostro di china. Sarcoma linea di topi cellule CMS4-Met è stato somministrato per via endovenosa nelle vene coda di topo laterale. Tre giorni dopo, soluzione salina (controllo) o tumore-specifica delle cellule T (+ CTL) sono state iniettate in topi portatori di tumore. I polmoni sono stati analizzati quattordici giorni dopo il trattamento CTL. Le macchie bianche, che sono noduli tumorali, consentono un facile quantificazione dell'efficacia del trattamento CTL.

<ol><li>Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+extensive+pulmonary+metastases+in+mice+by+adoptive+transfer+of+antigen-specific+CD8%28%2B%29+CTL+reactive+against+tumor+cells+expressing+a+naturally+occurring+rejection+epitope%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope.</a> J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).</li>
<li>Caldwell, S. A., Ryan, M. H., McDuffie, E., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Fas%2FFas+ligand+pathway+is+important+for+optimal+tumor+regression+in+a+mouse+model+of+CTL+adoptive+immunotherapy+of+experimental+CMS4+lung+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Fas/Fas ligand pathway is important for optimal tumor regression in a mouse model of CTL adoptive immunotherapy of experimental CMS4 lung metastases.</a> J Immunol. 171 (5), 2402-2412 (2003).</li>
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<li>Yang, D., Stewart, T. J., Smith, K. K., Georgi, D., Abrams, S. I., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+IFN-gammaR+in+association+with+loss+of+Fas+function+is+linked+to+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+cancer%22%5BJournal%5D)">Downregulation of IFN-gammaR in association with loss of Fas function is linked to tumor progression.</a> International journal of cancer. 122 (2), 350-362 (2008).</li>
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<li>Yang, D., Thangaraju, M., Greeneltch, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+IFN+regulatory+factor+8+by+DNA+methylation+is+a+molecular+determinant+of+apoptotic+resistance+and+metastatic+phenotype+in+metastatic+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Repression of IFN regulatory factor 8 by DNA methylation is a molecular determinant of apoptotic resistance and metastatic phenotype in metastatic tumor cells.</a> Cancer research. 67 (7), 3301-3309 (2007).</li>
<li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+identification+of+experimental+pulmonary+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Accurate identification of experimental pulmonary metastases.</a> Journal of the National Cancer Institute. 36 (4), 641-645 (1966).</li>
</ol>

Topi sono stati acquistati presso il National Cancer Institute (Friderick, MD) e ospitato nel Medical College of Georgia stabulario. Esperimenti e cura / benessere erano d&#39;accordo con le normative federali e un protocollo approvato dal Medical College of Georgia IACUC commissione.

Soluzioni: India Soluzione d&#39;inchiostro (17): <ol><li> Versare 150 ml di acqua distillata in un pallone da 250 ml. </li><li> Aggiungere 4 gocce di idrossido di ammonio in acqua distillata. </li><li> Aggiungere 30 ml di inchiostro magazzino India (cioè Sanford Black Magic impermeabile Ink Drawing 4465 Item 44011) per la miscela di ammoniaca e acqua. </li><li> Top con acqua distillata per un volume di 200 ml. Soluzione è pronta per l&#39;iniezione. </li></ol> Soluzione di Fekete (17): Fekete soluzione è usata per candeggina India ink-gonfiato portatori di tumore dei polmoni di distinguere noduli tumorali bianco sullo sfondo nero dei tessuti normali. <ol><li> Aggiungere 350ml EtOH 95% a bottiglia di vetro da 1 litro. </li><li> Aggiungere 150 ml di acqua distillata </li><li> Aggiungere 50 ml di formaldeide </li><li> Aggiungere 25 ml di acido glaciale acida </li></ol>

metastasi sperimentale e ctl adottivi immunoterapia modello di trasferimento del mouse

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Sperimentale modello murino metastasi è un modello metastasi semplice ma fisiologicamente rilevanti. Le cellule tumorali vengono iniettate per via endovenosa (iv) nelle vene coda di topo e colonizzare nei polmoni, quindi, che assomiglia le ultime fasi della metastasi delle cellule tumorali spontanea: la sopravvivenza nel stravaso circolazione, e la colonizzazione negli organi distali. Da un punto di vista terapeutico, il modello sperimentale metastasi è il modello più semplice e ideale, poiché l&#39;obiettivo delle terapie è spesso il punto finale di metastasi: stabilito tumore metastatico nell&#39;organo distale. In questo modello, le cellule tumorali vengono iniettate nelle vene iv coda di topo e ha permesso di colonizzare e crescere nei polmoni. CTL tumore-specifici sono poi iniettate iv in metastasi portante del mouse. Il numero e le dimensioni delle metastasi polmonari possono essere controllati in base al numero delle cellule tumorali da iniettare e il momento della crescita tumorale. Pertanto, le varie fasi di metastasi, da metastasi minimo metastasi estese, possono essere modellati. Metastasi polmonari vengono analizzati con l&#39;inflazione con l&#39;inchiostro, permettendo così più facile l&#39;osservazione visuale e la quantificazione.

Una metastasi al polmone sperimentale e CTL modello murino immunoterapia per l&#39;analisi delle cellule tumorali interazione cellule-T<em&gt; In vivo</em&gt;.

Metastasi sperimentale e CTL adottivi Immunoterapia modello di trasferimento del mouse

Il modello murino di metastasi sperimentale è un modello di metastasi semplice e tuttavia fisiologicamente rilevante. Le cellule tumorali vengono iniettate per via endovenosa (i.v.) in...

L'obiettivo generale di questa procedura è esaminare l'efficacia dell'immunoterapia mediante trasferimento adottivo di linfociti T specifici per il tumore in vivo. Questo viene innanzitutto ottenuto trapiantando cellule tumorali mediante iniezione nella vena caudale laterale nei topi, al fine di indurre metastasi polmonari. Il secondo passaggio della procedura consiste nel trattare i topi portatori di tumore con linfociti T citotossici (CTL) specifici per il tumore.L'ultimo passaggio consiste nell'utilizzare l'inchiostro di china come metodo per visualizzare e quantificare i noduli tumorali. In definitiva, è possibile ottenere risultati che mostrano l'efficacia comparativa dei diversi trattamenti misurando la dimensione del tumore e quantificando il numero di noduli tumorali. Salve, mi chiamo Mary Zimmerman e sono un membro del laboratorio del Dottor Kevin Lu presso la Medical College of Georgia.Ciao, mi chiamo Shelene Hu. Sono uno studente del secondo anno e lavoro anche nel laboratorio del dottor Lou. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi tradizionali, come le curve di sopravvivenza, è che questa procedura è sia qualitativa che quantitativa. Le implicazioni delle tecniche possono estendersi alla terapia del cancro perché imita l'immunoterapia adottiva con linfociti T in pazienti umani affetti da cancro.Iniziamo: il giorno prima delle iniezioni di cellule tumorali, seminare un flacone T 75 con fino a 1 × 10⁷ cellule CMS4-MET in 10 millilitri di mezzo RPMI contenente il 10% di siero. Per ottenere cellule tumorali in rapida crescita, incubare tutta la notte a 37 °C nel giorno dell'iniezione.Rimuovere il mezzo e lavare le cellule una volta con PBS, quindi raccogliere le cellule tumorali con tripsina-EDTA 0,05% a 37 gradi Celsius per cinque minuti. Arrestare la reazione con 10 millilitri di mezzo RPMI contenente siero al 10%. Trasferire le cellule in un tubo conico.Centrifugare le cellule a 1300 g in una centrifuga val legend RT per tre minuti. A temperatura ambiente, rimuovere il soprannatante, risospendere le cellule in 10 millilitri di HBSS fresco 1X per lavarle. Quindi centrifugare nuovamente e risospendere nello stesso modo.Contare le cellule tumorali su un emo.citometro. Diluire le cellule in HBSS in modo che le cellule necessarie per ogni iniezione siano sospese. In un volume totale di 100 microlitri, riscaldare i topi B SEA di sei-otto settimane in un becher, immersi in acqua calda.Per dilatare la vena della coda, posizionare il topo in un dispositivo di contenimento per la coda appoggiato sul bancone. Utilizzare una siringa micro per iniettare 100 microlitri di cellule tumorali nella vena laterale della coda. Adottare una tecnica asettica per evitare infezioni dopo l'iniezione.Applicare una leggera pressione sul sito di iniezione fino a quando l'emorragia non si è arrestata. Restituire il topo alla gabbia e lasciare che il tumore cresca fino alla fase desiderata. Nel giorno del trasferimento, aspirare e dispensare più volte per risospendere i linfociti T citotossici purificati o CTL preparati.Come descritto nel testo, trasferire tutte le cellule da una piastra in un tubo conico da 15 millilitri, senza far sì che il volume superi i due terzi del tubo. Inserire una pipetta di Pasteur sterile nel tubo conico e stratificare il mezzo di separazione dei linfociti o LSM sotto le cellule fino a quando il volume totale si avvicina a 14 millilitri.Attenzione a non disturbare gli strati. Centrifugare a 2000 giri/min per 20 minuti a temperatura ambiente. Non utilizzare il freno per rallentare il rotore dopo la centrifugazione; trasferire i CTL in un nuovo tubo conico da 15 millilitri.Aggiungere HBSS fino a un volume di circa 10 millilitri. Lavare. Contare le cellule, centrifugare a 1300 giri al minuto per cinque minuti, quindi risospendere a temperatura ambiente in HBSS alla densità cellulare richiesta per le iniezioni.Mantenendo il volume totale per iniezione a 100 microlitri. Utilizzare la stessa tecnica di iniezione nella coda mostrata in precedenza in questo video. Per iniettare i CTL nei topi portatori di tumore, reinserire il topo nella gabbia e permettere ai CTL di interagire con il tumore.Di solito i topi vengono sacrificati per l'analisi da 14 a 21 giorni dopo il trattamento con CTL. Per visualizzare le metastasi polmonari, posizionare un topo sacrificato supino su una tavola di polistirolo. Fissare le zampe con dei perni per garantire un accesso ininterrotto alla trachea.Spruzzare la faccia ventrale con etanolo al 70%, partendo dall'addome medio. Usare le forbici per effettuare un'incisione lungo la linea mediana attraverso la gabbia toracica e proseguire verso le ghiandole salivari. Esporre la trachea.Utilizzare pinzette per rimuovere i tessuti circostanti la trachea. Far scivolare la punta di una pipetta da 200 microlitri sotto la trachea, tenendo la punta con una mano. Sollevare delicatamente la trachea verso l'alto e lontano dal corpo.Ruotare la piattaforma di 180 gradi. Utilizzare una siringa da 50 millilitri per iniettare inchiostro di India nei polmoni attraverso la trachea. Riempire completamente i polmoni di inchiostro fino a quando non si avverte una forte resistenza.Usare le forbici per tagliare la trachea. Far scivolare una pinza sotto i polmoni e sollevarli fuori dal topo. Sciacquare brevemente i polmoni in un becher da un litro contenente acqua all'interno di una cappa chimica.Trasferire i polmoni in un contenitore di vetro contenente cinque millilitri di soluzione FTI. Il tessuto tumorale emergerà come noduli bianchi sui polmoni scuri. Dopo alcuni minuti, i tumori possono ora essere contati e conservati indefinitamente nella soluzione FTI. Qui.Polmoni di topi trasfettati con carcinoma mammario. La linea cellulare quattro T uno mostra macchie bianche indicanti tumori. Topi trasfettati con un IRF otto dominante negativo immune al K 79 E mostrano il potenziale metastatico aumentato delle cellule tumorali.Queste immagini mostrano un'analisi istologica dell'efficacia dell'immunoterapia mediante trasferimento adottivo di CTL. Topi con tumore inoculati con soluzione salina presentavano numerosi tumori sei giorni dopo, indicati dalle frecce. Al contrario, topi inoculati con linfociti T specifici per il tumore mostrarono una riduzione dei tumori nello stesso esperimento.Il trattamento con inchiostro di India offre un metodo più semplice per misurare l'efficacia del trasferimento adottivo di CTL. In questo caso, le nodularità tumorali bianche sui polmoni affetti da tumore le distinguono chiaramente dai polmoni che hanno subito con successo il trasferimento adottivo di CTL, e il conteggio delle nodularità permette un grado di quantificazione non ottenibile con l'istologia. Durante l'esecuzione di questa procedura, è importante ricordarsi di riscaldare i topi per facilitare iniezioni più accurate nella vena della coda.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare l'efficacia del trattamento mediante questa semplice procedura per quantificare dimensioni e numero dei tumori. Grazie per averci seguito e buona fortuna con i tuoi esperimenti.

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La diffusione metastatica del cancro è la principale causa di decessi correlati al cancro. Forniamo una descrizione approfondita della nostra metodologia chirurgia sopravvivenza per stabilire un modello di sistema ortotopico singenici mouse "paziente-tipo" per lo studio dei meccanismi di metastatizzazione dei tumori di organi solidi.

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Un modello di tumore primario del cancro al seno ortotopica e la rimozione chirurgica del tumore primario di estendere la vita del mouse per generare metastasi spontanee sono descritti. La crescita del tumore e la progressione sono monitorati e quantificati mediante imaging di fluorescenza luciferasi.

Un modello murino ortotopico di spontanea Breast Cancer metastasi

La capacità dei cloni metastatici di colonizzare siti distanti dipende dalla loro capacità di proliferazione e/o dalla loro capacità di sopravvivere nel microambiente ospite senza una proliferazione significativa. Qui, presentiamo un modello animale che consente la visualizzazione quantitativa di entrambi i tipi di colonizzazione del fegato da parte di cloni metastatici.

Avanzato modello animale di colorettale Metastasi nel fegato: tecniche di imaging e di proprietà di metastatici cloni

Qui, descriviamo un modello di xenotrapianto murino che assomiglia funzionalmente a un serbatoio di Ommaya nei pazienti. Abbiamo sviluppato il Murine Ommaya per studiare nuove terapie per la malattia leptomeningea universalmente fatale.

Un modello murino di ommaya xenotrapianto per studiare la terapia mirata diretta della malattia leptomeningea

Qui, presentiamo un protocollo di trapianto tumorale per la caratterizzazione di linfociti infiltrati tumorali intrinseci e periferici derivati dal tumore in un modello di tumore murino. Il tracciamento specifico dell'afflusso di cellule immunitarie derivate dal ricevente con citometria a flusso rivela la dinamica dei cambiamenti fenotipici e funzionali di queste cellule durante le risposte immunitarie antitumorali.

Trapianto di tumore per valutare la dinamica delle cellule T CD8+ infiltranti il tumore nei topi

Questo articolo descrive un flusso di lavoro di tecniche impiegate per testare nuovi potenziali mediatori di metastasi del melanoma e i loro meccanismi d'azione.

Una solida piattaforma di scoperta per l'identificazione di nuovi mediatori delle metastasi del melanoma

Il protocollo presenta un modello di immunoterapia del cancro che utilizza la vaccinazione tumorale basata su cellule con melanoma B16-F10 che esprime Flt3L. Questo protocollo dimostra le procedure, compresa la preparazione di cellule tumorali in coltura, l'impianto del tumore, l'irradiazione cellulare, la misurazione della crescita tumorale, l'isolamento delle cellule immunitarie intratumorali e l'analisi della citometria a flusso.

Modello sperimentale di immunoterapia del melanoma utilizzando la vaccinazione tumorale con una citochina ematopoietica

Questo protocollo descrive l'impianto ortotopico di cellule tumorali derivate dal paziente nella parete cieca di topi immunodeficienti. Il modello ricapitola la malattia metastatica del carcinoma colorettale avanzato e consente la valutazione di nuovi farmaci terapeutici in uno scenario clinicamente rilevante di metastasi polmonari ed epatiche.

L'impianto ortotopico di cellule tumorali derivate dal paziente nei topi ricapitola il cancro colorettale avanzato

Il disegno sperimentale qui presentato fornisce un utile modello riproduttivo per gli studi delle cellule T CD8+ antigene-specifiche durante le metastasi linfonodali (LN), che esclude la perturbazione delle cellule T CD8+ astanti.

Modello di metastasi linfonodali drenanti per la valutazione della dinamica delle cellule T CD8+ antigene-specifiche durante la tumorigenesi

Descriviamo un metodo per utilizzare i linfociti infiltranti il tumore (TIL) dai topi attraverso la citometria a flusso per il trasferimento di cellule adottive. Questo protocollo mira a verificare la citotossicità specifica dei TIL contro i tumori in un modello murino di carcinoma pancreatico singenico, fornendo informazioni sullo sviluppo di terapie cellulari adottive per il cancro del pancreas.

Isolamento basato sulla citometria a flusso e valutazione terapeutica dei linfociti infiltranti il tumore in un modello murino di carcinoma pancreatico

Scopri l'immunoterapia con CTL adottivi per studiare le metastasi polmonari nel topo. Questo metodo permette di valutare l'efficacia del trattamento mediante iniezione di cellule tumorali e quantificazione dei noduli con inchiostro di India.

Metastasi sperimentale e CTL adottivi Immunoterapia modello di trasferimento del mouse

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