حقن آن. stephensi الجنين لتوليد الملاريا مقاومة البعوض

كل 15 ثانية ، هناك طفل يموت من الملاريا في العالم ، هنا في مختبر جيمس ، أو يحاول صنع بعوض فرنسي لا يستطيع حمل الأشخاص المصابين بالملاريا. اسمي TIUs. أنا هنا في يونيفرسال أوف كاليفورنيا إيرفين في قسم البيولوجيا الجزيئية والكيمياء الحيوية في مختبر أنتوني جيمس.

سأوضح لك اليوم كيفية صنع عين معدلة وراثيا وليس عين ستيفنز. ونحن نفعل ذلك لجعل بعوض الملاريا مقاوم للحرارة حتى لا يتمكن من حمل طفيلي الملاريا. الآن لقد أعددت قارورة ذات عازلة متساوية التوتر حيث سيضع البعوض بيضه.

سأستخدم هذا الشفاط لامتصاص البعوض ووضعه في قارورة. ثم تدخل هذه القارورة إلى حاضنة بدرجة حرارة 30 درجة مئوية ، وسنتركها لمدة ساعة تقريبا في كوب. الآن سنقوم بسحب إبر الحقن المجهري.

هذه إبر مصنوعة من الكوارتز وعلينا استخدام طرف رفيع جدا. لذلك ، نحن بحاجة إلى مجتذب الإبرة هذه. نحن نستخدم مجتذب إبرة من أدوات Suter وكذلك الإبر من أدوات SU الدقيقة.

لذا الآن أخرج البعوض وسأضع هذا البيض في طبق بتري حيث لدي ورق ترشيح مبلل في مخزن مؤقت متساوي التوتر فقط للحفاظ على الأجنة رطبة خلال فترة الحقن. كمية الماء على ورق الترشيح أمر بالغ الأهمية. أنت لا تريد أن يطفو البيض ولا تريد أن يجف.

الآن سأقوم بنقل الجنين من ورق البيض إلى ورق واتمان آخر بحجم ثلاثة ملم تم نقعه في مخزن مؤقت متساوي التوتر. الآن افعل ذلك لإزالة كوريان قبل محاذاة الحقن المجهري. لذا سأقوم الآن بإزالة الكوريان ، وهو هذا السطح الفضي على البيض.

وأنا أفعل ذلك عن طريق تنظيفها بالفرشاة. لذا في الأعلى هنا لدينا جنين حيث لا يزال الكوريان جالسا ولديهم هذا الجزء الفضي اللامع. أين هو أدناه؟

لقد نجحت في إخراج كوريان ومن المحتمل أن ينزلق الجزء العلوي على شريط ، في حين أن الجزء السفلي سوف يلتصق. وهذا هو المهم عندما تقوم بجانب متساو. الآن أقوم بمحاذاة الأجنة.

الأجنة عاملة أو أكبر في الطرف الأمامي ، وهذا الأجنة أضعها على اليمين. على اليسار لدي نهاية الملصق ، وهي أنحف والتي أنا ، حيث سأقوم بحقن الأجنة. أحاول تجميعهم معا حتى يساعدوا بعضهم البعض على البقاء في مواقعهم.

وعادة ما أفعل حوالي 10 في خط معا. الآن لدي خط ، الأجنة ، وسأنقلها إلى قسيمة غطاء. على زلة الغطاء.

أضع شريط شعر مستعار حتى يلتصقوا. عندما أنتهي من ذلك ، سأقوم بتجفيف ورق الترشيح حيث توجد الأجنة بورق ترشيح آخر ، وأضع الأجنة على زلة الغطاء واتركها تجف لمدة 30 ثانية قبل وضع الزيت. الآن قمنا بمحاذاة الأجنة ووضعناها تحت الزيت.

في مرحلة المجهر ، سنقوم بحقن الحمض النووي الممزوج بصبغة الطعام باستخدام هذا الطرف الخاص من نمط الميكروب وحقن هذا في إبر المنفذ. الآن ملأنا الإبرة وأعدناها إلى حاقن صغير. والآن نحن مستعدون لإجراء الحقن الدقيقة.

الآن أنا أتحرك في الإبرة لشحذها وأنا ، حتى أتمكن من رؤيتها مركزة. بمجرد الانتهاء من ذلك ، أقوم بتحريك إبرة الوزن وأتحرك في الأجنة وأركز عليها أيضا. وعندما يتم ذلك ، أقوم بتحريك الإبرة مرة أخرى حتى أضعها في موضعها وأتحرك على أجنةي.

الآن عندما تمر الإبرة عبر الزيت ، تصبح ضبابية وتحتاج إلى تعديلها مرة أخرى. إذن هذا هو القرش بالضبط. بالضبط ، قراد القرش.

والآن أنا مستعد لإجراء الحقن. يمكنك أن ترى أنني لمست الجنين بالإبرة ، وبذلك كسرت طرفه ويمكنك أن ترى قطرة صغيرة تخرج يتم حقنها في الجنين. لذلك هنا حقن وإخراجها مرة أخرى.

وأتحقق في كل مرة بين كل جنين أن لدي قطرة صغيرة تخرج إلى طرف الإبرة. وكما ترون ، أحتاج إلى إعادة ضبط كل جنين للوصول إلى الوضع المثالي. الآن كان هذا يتسرب.

كما ترون ، عندما أقوم بالحقن الثاني في الزيت ، تصبح الفقاعة كبيرة جدا وأحتاج إلى إعادة ضبط ضغط الحاقن الصغير. والآن انتهينا من الحقن المجهرية وسننقل الأجنة من المجهر إلى طبق بتري، الذي ملأناه بمحلول متساوي التوتر. سأمسح الزيت من زلة الغطاء وأقطعه إلى قطعة صغيرة ، أضعها في طبق بتري.

الآن سنتركهم هنا حتى نهاية اليوم ودرجة حرارة الغرفة. ثم ننقلهم إلى داخل القطاع. لقد أوضحت لكم اليوم كيفية حقن جانب ستيفن بشكل فظيع لصنع بعوض عابر.

والآن علينا فقط أن ننتظر حتى تفقس اليرقات كل اليرقات لتفقس. سنحضر البالغين وبعد ذلك سوف يتزاوجون. وبعد ذلك سيكون لدينا ثلاثة أسابيع قبل أن نتمكن من بدء تشغيل الشاشة إذا كانوا يعيدون بناء التعليمات البرمجية أم لا.