Visualizzazione delle vescicole extracellulari cianobatteriche mediante microscopia elettronica a trasmissione

Posizionare una microscopia elettronica a trasmissione rivestita di resina polivinilica o una griglia TEM su una pellicola di plastica pulita.

Aggiungere alla griglia una sospensione di vescicole extracellulari concentrate e purificate o EV, particelle nanometriche legate alla membrana.

Queste vescicole extracellulari sono secrete dai cianobatteri e trasportano macromolecole all'interno delle loro membrane.

Incubare la griglia per consentire alle EV di adsorbirsi sulla sua superficie rivestita di resina.

Toccare il bordo della griglia con una carta da filtro pulita per assorbire la sospensione in eccesso.

Far galleggiare la griglia sull'acetato di uranile per colorare le vescicole aderenti.

L'acetato di uranile circonda le vescicole, creando un contorno scuro che migliora il contrasto durante l'imaging.

Rimuovere la griglia e utilizzare carta da filtro per assorbire la macchia in eccesso.

Lavare la griglia con acqua ultrapura per rimuovere eventuali macchie residue. Ripetere il lavaggio e poi lasciare asciugare all'aria.

Infine, visualizza le vescicole extracellulari utilizzando la TEM per valutarne la morfologia, le dimensioni e la purezza.

Applicare con cura cinque microlitri di vescicola