Isolamento mirato di colonie batteriche mediante degradazione dell'idrogel con pattern di luce

Prendi un vetrino coprioggetti con uno strato di idrogel fotodegradabile che contiene colonie batteriche intrappolate, geneticamente modificate per emettere fluorescenza.

Posizionare il vetrino coprioggetti in un supporto.

Aggiungere terreni per evitare la disidratazione del campione.

Sotto un microscopio a campo chiaro, concentrati su una singola colonia di interesse.

Utilizzando un software appropriato, progettare un modello di luce per l'estrazione cellulare alla periferia della colonia per rompere i legami strutturali dell'idrogel e ridurre al minimo l'esposizione ai raggi UV alle cellule.

Regola l'intensità della luce UV e la durata dell'esposizione.

Avviare l'esposizione alla luce UV per rompere i legami strutturali nell'idrogel nelle aree esposte che facilitano il rilascio della colonia bersaglio.

Utilizzando un filtro a fluorescenza, identificare la colonia.

Posizionare una punta del tubo sul punto, con l'altra estremità collegata a una siringa.

Passa alla modalità campo chiaro e, utilizzando la siringa, aspira la colonia rilasciata.

Trasferire la colonia in una provetta per ulteriori analisi.

Posizionare il campione in un supporto PDMS e aggiungere il terreno definito sopra il campione per prevenire la disidratazione del campione e fornire una soluzione di supporto per le cellule rilasciate. Dopo aver posizionato lo specchio di calibrazione, regolare la messa a fuoco del microscopio per ottenere un'immagine nitida delle colonie all'interno dell'array di idrogel o micropozzetti e ispezionare per identificare le colonie o i pozzetti di interesse.

Qui, progetta i modelli di luce mentre la vista della telecamera mostra le colonie all'interno del campione per testare diversi modelli per l'estrazione delle cellule e salvare il modello definito. Quindi seleziona la sezione di controllo della sessione, aggiungi la sequenza salvata nella scheda intitolata con il nome del prodotto dello strumento di illuminazione con motivi. Scegliere l'opzione per stimolare il motivo a visualizzare e regolare la posizione di esposizione desiderata.

Quindi, regola l'intensità della luce al 60% e il tempo di esposizione a 40 secondi nella scheda di controllo del LED e avvia il processo di esposizione. Monitora la degradazione dell'idrogel in tempo reale e in modalità campo chiaro per garantire il rilascio della cella. Per raccogliere la cellula rilasciata, cambiare il filtro del microscopio da Brightfield a TRITC per visualizzare l'area esposta del campione a occhio nudo.

Una volta individuata l'area esposta, posizionare l'estremità del tubo sul punto irradiato, quindi sostituire il filtro del microscopio in campo chiaro per monitorare il recupero delle cellule in tempo reale. Utilizzare la siringa attaccata all'altra estremità del tubo per prelevare con cura 200 microlitri di soluzione contenente le cellule rilasciate e trasferire la soluzione in una provetta da centrifuga da 1,5 millimetri per l'analisi del DNA o la placcatura