Patterning microfluidico e tracciamento basato sulla fluorescenza della crescita batterica di singole cellule

Inizia con una coltura batterica marcata in fluorescenza aggiunta a un tampone privo di carbonio.

Centrifugare per pellettare i batteri e scartare il surnatante.

Risospendere il pellet in un tampone fresco privo di carbonio contenente un detergente delicato.

La mancanza di una fonte di carbonio arresta la crescita, mentre il detersivo previene la formazione di grumi e mantiene le cellule sospese.

Caricare la sospensione batterica in una siringa e collegarla a una pompa.

Iniettare la sospensione nell'ingresso di un chip microfluidico contenente un canale con trappole incorporate nel pavimento.

Estrarre lentamente il liquido dall'uscita del canale.

Quando il liquido si ritira, le forze capillari guidano i batteri verso l'uscita.

In questo processo, singole cellule batteriche si depositano nelle trappole, dando luogo alla formazione di pattern batterici.

Sciacquare continuamente il canale con un brodo preriscaldato e ricco di sostanze nutritive.

I batteri riprendono la crescita e formano microcolonie all'interno delle trappole.

Utilizza la microscopia a fluorescenza per acquisire immagini time-lapse e analizzare la crescita batterica in un ambiente controllato.

Pipettare un millilitro di terreno