Valutazione della motilità batterica tramite un dispositivo microfluidico

Prendi un dispositivo microfluidico costituito da un tubo di ingresso collegato a una camera microfluidica composta da canali porosi per il movimento batterico.

La camera è collegata a una camera di osservazione collegata a una pompa di siringa tramite un tubo di uscita.

Satura le camere con un tampone per rimuovere eventuali bolle d'aria.

Posiziona il dispositivo sul palco del microscopio e posiziona la lente obiettivo sopra la camera di osservazione.

Regola le impostazioni del microscopio per visualizzare chiaramente le singole cellule batteriche.

Inserisci il tubo di ingresso in una sospensione di batteri marcati con fluorescenza.

Avviare il flusso per attirare i batteri nella camera microfluidica, dove passano attraverso i canali porosi per raggiungere la camera di osservazione.

Immagini la camera di osservazione a intervalli regolari.

Genera una curva di rottura, che rappresenta la frazione di batteri che attraversa la matrice porosa nel tempo.

Rimuovi il microfluidico dal vuoto e posizionalo sul palco del microscopio. Usa la pompa della siringa per saturarlo con buffer di motilità.

Utilizzando microscopia a campo chiaro o contrasto di fase, regola l'ingrandimento per visualizzare le singole cellule batteriche e focali sul centro del canale di osservazione. Cambia le impostazioni del percorso della luce su microscopia a fluorescenza. Regola la messa a fuoco con uno spostamento e il tempo di esposizione della fotocamera per risolvere le singole cellule batteriche, in questo caso 100 millisecondi.

Successivamente, inserire il tubo di ingresso in un tubo da due millilitri contenente la sospensione batterica. Inverti la direzione della pompa e inizia a stirare la sospensione a una portata di un microlitro al minuto.

Scansiona la sezione trasversale dell'intero canale di osservazione, registrando un'immagine ogni minuto.