Imaging in tempo reale delle interazioni ospite-patogeno in embrioni di pesce zebra infettati da Mycobacterium abscessus

Si inizia con embrioni di pesce zebra trasparenti, anestetizzati e transgenici che esprimono macrofagi marcati con fluorescenza.

Gli embrioni vengono pre-iniettati nel muscolo caudal con lo stirpe rugoso di Mycobacterium abscessus marcato fluorescentmente per indurre un'infezione localizzata.

L'assenza di glicopeptidolipidi superficiali in questi batteri ne favorisce l'aggregazione.

Immobilizzare gli embrioni in agarosio a basso punto di fusione e orientarli per esporre il sito di infezione.

Una volta che l'agarosio si solidifica, aggiungi acqua per pesci contenente un agente anestetico per mantenere l'anestesia e prevenire la disidratazione.

Monitorare l'infezione in tempo reale tramite microscopia a fluorescenza.

Dopo l'infezione, i macrofagi endogeni migrano verso i batteri e fagocitano singole cellule.

Tuttavia, alcuni batteri formano cordoni — aggregati extracellulari allungati che si replicano, si diffondono e resistono alla fagocitosi, causando morte delle cellule ospiti e infiltrazione immunitaria.

Nonostante ciò, le cellule immunitarie non riescono a eliminare i cordoni cornici, permettendo all'accumulo di batteri e cellule ospiti morte che formano un ascesso.

Questo rivela il cording come una chiave M. Strategia di evasione immunitaria per ascessi .

Per l'imaging live dell'infezione da M. ascesso , montare tricaine anestesia embrioni in agarosio a basso punto di fusione all'1% in una piastra di Petri da 35 millimetri con fondo di vetro per microscopio rovesciato o su un vetrino di depressione a cavità singola per microscopia confocale verticale. Orientare l'embrione nella posizione desiderata e coprire l'agarosio solidificato con acqua di pesce contenente tricaina. Infine, utilizzare un microscopio a fluorescenza con obiettivo 10X o un microscopio confocale a fluorescenza con obiettivi 40X o 63X per acquisizione e trasmissione sequenziale dell'embrione.