Quantificazione del carico batterico tissutale in un modello murino di infezione intestinale cronica

Si inizia con un topo soppresso infettato da un ceppo batterico resistente agli antibiotici che modella un'infezione intestinale cronica.

Esponi la cavità addominale per accedere al ceco e alla milza.

Prelevare i tessuti cecali e splenici, che rappresentano i siti intestinali e sistemici di colonizzazione batterica.

Inserire ogni fazzoletto in un tubo separato contenente un tampone e una perla d'acciaio.

Omogeneizzare il tessuto agitando rapidamente i tubi, facendo sì che le perline d'acciaio colpiscano il tessuto, lo degradino e rilasciano batteri nella sospensione.

Eseguire diluizioni seriali degli omogeneati nel tampone per ridurre la concentrazione batterica.

Aliquote a piastra da ogni diluizione su agar nutritivo integrato con un antibiotico per recuperare selettivamente i batteri resistenti agli antibiotici.

Incubare le placche per permettere ai batteri vitali di crescere in colonie.

Contare le colonie per stimare il numero di batteri vitali per grammo di tessuto e confrontare i carichi batterici nel ceco e nella milza.

Per prima cosa, posiziona microtubi a fondo tondo da 2 millilitri con chiusura di sicurezza, aggiungi 1 millilitro di PBS sterile e una perla in acciaio inox autoclava