Name: Crescita di un biofilm polimicrobico rilevante per la fibrosi cistica per sondare i fenotipi della comunità (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 53 s
Description: Scopri la coltivazione di biofilm polimicrobici rilevanti per la fibrosi cistica per analizzare i fenotipi della comunità microbica. Questo metodo in vitro utilizza Pseudomonas aeruginosa e altri patogeni per studiare le interazioni microbiomiche.

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<meta charset="utf8"></head><body>Interazioni polimicrobiche in vitro nelle infezioni polmonari da fibrosi cistica

<ol><li>Cogen, J. D., Nichols, D. P., Goss, C. H., Somayaji, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugs%2C+drugs%2C+drugs%3A+Current+treatment+paradigms+in+cystic+fibrosis+airway+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatric+Infect+Dis+Soc%22%5BJournal%5D)">Drugs, drugs, drugs: Current treatment paradigms in cystic fibrosis airway infections.</a> J Pediatric Infect Dis Soc. 11 (2), S32-S39 (2022).</li>
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<li>Jean-Pierre, F., Vyas, A., Hampton, T. H., Henson, M. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One+versus+many%3A+Polymicrobial+communities+and+the+cystic+fibrosis+airway%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">One versus many: Polymicrobial communities and the cystic fibrosis airway.</a> mBio. 12 (2), e00006-e00021 (2021).</li>
<li>Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+microbial+and+molecular+dynamics+in+the+cystic+fibrosis+lung+after+elexacaftor-tezacaftor-ivacaftor+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Res%22%5BJournal%5D)">Longitudinal microbial and molecular dynamics in the cystic fibrosis lung after elexacaftor-tezacaftor-ivacaftor therapy.</a> Respir Res. 24 (1), 317(2023).</li>
<li>Sosinski, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+restructuring+of+microbiome+niche+space+is+associated+with+elexacaftor-tezacaftor-ivacaftor+therapy+in+the+cystic+fibrosis+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cystic+Fibros%22%5BJournal%5D)">A restructuring of microbiome niche space is associated with elexacaftor-tezacaftor-ivacaftor therapy in the cystic fibrosis lung.</a> J Cystic Fibros. 21 (6), 996(2022).</li>
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<li>Nichols, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+effectiveness+of+elexacaftor%2Ftezacaftor%2Fivacaftor+in+people+with+cystic+fibrosis%3A+A+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical effectiveness of elexacaftor/tezacaftor/ivacaftor in people with cystic fibrosis: A clinical trial.</a> Am J Respir Crit Care Med. 205 (5), 529-539 (2022).</li>
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<li>Limoli, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+and+Pseudomonas+aeruginosa+co-infection+is+associated+with+cystic+fibrosis-related+diabetes+and+poor+clinical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Clin+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa co-infection is associated with cystic fibrosis-related diabetes and poor clinical outcomes.</a> Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 35 (6), 947-953 (2016).</li>
<li>Jean-Pierre, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Community+composition+shapes+microbial-specific+phenotypes+in+a+cystic+fibrosis+polymicrobial+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Community composition shapes microbial-specific phenotypes in a cystic fibrosis polymicrobial model system.</a> Elife. 12 (12), e81604(2023).</li>
<li>Toole Orazi, G., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+alters+Staphylococcus+aureus+sensitivity+to+vancomycin+in+a+biofilm+model+of+cystic+fibrosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa alters Staphylococcus aureus sensitivity to vancomycin in a biofilm model of cystic fibrosis infection.</a> mBio. 8 (4), e00873-e00917 (2017).</li>
<li>Lipuma, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sense+and+nonsense+of+antimicrobial+susceptibility+testing+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatric+Infect+Dis+Soc%22%5BJournal%5D)">The sense and nonsense of antimicrobial susceptibility testing in cystic fibrosis.</a> J Pediatric Infect Dis Soc. 11 (2), S46-S52 (2022).</li>
<li>Coenye, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+antimicrobial+susceptibility+testing%3A+Where+are+we+and+where+could+we+be+going%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Biofilm antimicrobial susceptibility testing: Where are we and where could we be going.</a> Clin Microbiol Rev. 36 (4), e0002423(2023).</li>
<li>Waters, V. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconciling+antimicrobial+susceptibility+testing+and+clinical+response+in+antimicrobial+treatment+of+chronic+cystic+fibrosis+lung+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Reconciling antimicrobial susceptibility testing and clinical response in antimicrobial treatment of chronic cystic fibrosis lung infections.</a> Clin Infect Dis. 69 (10), 1812-1816 (2019).</li>
<li>Vandeplassche, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+susceptibility+of+cystic+fibrosis+lung+microbiome+members+in+a+multispecies+biofilm%5BTitle%5D)+AND+%22Biofilm%22%5BJournal%5D)">Antibiotic susceptibility of cystic fibrosis lung microbiome members in a multispecies biofilm.</a> Biofilm. 2, 100031(2020).</li>
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<li>Clay, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+lasR+mutant+fitness+in+microoxia+is+supported+by+an+anr-regulated+oxygen-binding+hemerythrin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa lasR mutant fitness in microoxia is supported by an anr-regulated oxygen-binding hemerythrin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (6), 3167-3173 (2020).</li>
<li>Hoffman, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+lasR+mutants+are+associated+with+cystic+fibrosis+lung+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa lasR mutants are associated with cystic fibrosis lung disease progression.</a> J Cyst Fibros. 8 (1), 66-70 (2009).</li>
<li>Heirali, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sputum+microbiota+in+adults+with+CF+associates+with+response+to+inhaled+tobramycin%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Sputum microbiota in adults with CF associates with response to inhaled tobramycin.</a> Thorax. 75 (12), 1058-1064 (2020).</li>
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<li>Kesthely, C. A., Rogers, R. R., El Hafi, B., Jean-Pierre, F., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+and+genetic+analysis+of+a+cystic+fibrosis+airway-relevant+model+shows+asymmetric+responses+to+growth+in+a+polymicrobial+community%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling and genetic analysis of a cystic fibrosis airway-relevant model shows asymmetric responses to growth in a polymicrobial community.</a> Microbiol Spectr. 11 (5), e0220123(2023).</li>
<li>Jean-Pierre, F., Henson, M. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+modeling+to+interrogate+microbial+disease%3A+A+tale+for+experimentalists%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Metabolic modeling to interrogate microbial disease: A tale for experimentalists.</a> Front Mol Biosci. 8, 634479(2021).</li>
<li>Hendricks, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+syncytial+virus+infection+enhances+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+growth+through+dysregulation+of+nutritional+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Respiratory syncytial virus infection enhances Pseudomonas aeruginosa biofilm growth through dysregulation of nutritional immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (6), 1642-1647 (2016).</li>
<li>Hogan, D. A., Vik, A., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Pseudomonas+aeruginosa+quorum-sensing+molecule+influences+Candida+albicans+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A Pseudomonas aeruginosa quorum-sensing molecule influences Candida albicans morphology.</a> Mol Microbiol. 54 (5), 1212-1223 (2004).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-assembling+living+material+as+an+in+vitro+lung+epithelial+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22Matter%22%5BJournal%5D)">Co-assembling living material as an in vitro lung epithelial infection model.</a> Matter. 7 (1), 216-236 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DOPC)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0387928</td><td>Preparare un brodo da 250 mg/mL in cloroformio direttamente nel flacone. Mantenere a -20°C. Concentrazione finale 200 &mu; g/mL in 2 basi ASM.</td></tr><tr><td>Acido 3-morfolinopropano-1-solfonico (MOPS)</td><td>Sigma</td><td>M1254</td><td>Concentrazione finale 200 mM in base 2X ASM.</td></tr><tr><td>Replicatore a 96 pin</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-450-9</td><td>Possono essere utilizzati anche replicatori monouso. Gatto #NC1567338.</td></tr><tr><td>Piastra standard sterile a 96 pozzetti con coperchio</td><td>Fisher Scientific</td><td>62406-081</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0</td><td></td></tr><tr><td>AnaeroPack Barattolo rettangolare da 2,5 L</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-246-385</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2*2H2O&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>C79-500</td><td>Preparare un brodo da 1 M in acqua e filtrare sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtro. Concentrazione finale 3,5 mM in 2x base ASM.</td></tr><tr>Sangue <td></td><td></td><td>di pecora defribrinato</td><td>Per preparare le placche di accrescimento per Streptococcus e Prevotella.</td></tr><tr><td>Acido desossiribonucleico da spermatozoo di aringa</td><td>Sigma</td><td>D7290</td><td>Concentrazione finale 1,2 mg/mL in 2x ASM base.</td></tr><tr><td>FeSO4*7H2O&nbsp;</td><td>Fisher Scientific AA1449830</td><td></td><td>Preparare un brodo da 1 mg/mL (3,6 mM) in acqua e filtrare sterilizzare con un valore di 0,22 &mu; m filtro. Conservare avvolto in un foglio di alluminio. Concentrazione finale 0,0072 mM in 2x base ASM.</td></tr><tr><td>GasPaks</td><td>Fisher Scientific</td><td>B260678</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Fisher Scientific</td><td>D16-3</td><td>Preparare in acqua con una quantità di brodo al 20% (1,1 M) e sterilizzare in autoclave. Concentrazione finale 6 mM in 2x ASM base.</td></tr><tr><td>Hemin</td><td>Sigma</td><td>51280</td><td>Sciogliere 100 mg di emina in 2 mL di 1 M NaOH e poi aumentare il volume a 200 mL con acqua. Conservare in una bottiglia ambrata o in una bottiglia normale avvolta con un foglio di alluminio a 4 &deg;C.</td></tr><tr><td>K2SO4</td><td>Fisher Scientific</td><td>P304-500</td><td>Preparare un impasto da 0,25 M in acqua e sterilizzare con un filtro da 0,22 &mu; m filtro. Concentrazione finale 0,54 mM in 2x base ASM.</td></tr><tr><td>Kanamicina</td><td></td><td></td><td>Preparare una soluzione madre da 50 mg/mL in acqua. Filtro sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtrare e conservare a 4 °C.</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217-500</td><td>Concentrazione finale 30,0 mM in base 2x ASM.</td></tr><tr><td>KNO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>P263-500</td><td>Preparare un ceppo da 1 M in acqua e sterilizzare con un filtro 0,22 &mu; m filtro. Concentrazione finale 0,70 mM in base 2x ASM.</td></tr><tr><td>L-cisteina cloridrato</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAA1038922</td><td></td></tr><tr><td>Acido L-lattico&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>L1750</td><td>Preparare un ceppo da 1 M in acqua e filtrare sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtro. Regolare il pH a 7,0. Concentrazione finale 18,6 mM in 2x basi ASM.</td></tr><tr><td>L-Triptofano</td><td>Sigma</td><td>T0254</td><td>Preparare un stock 0,1 M in 0,2 M NaOH e filtrare sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtro. Conservare in frigorifero a 4 gradi C avvolto in un foglio di alluminio. Concentrazione finale 0,132 mM in base 2x ASM.</td></tr><tr><td>Mannitolo Sale Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11407</td><td>Preparare seguendo le raccomandazioni del produttore.</td></tr><tr><td>Menadione</td><td>Sigma</td><td>M5625</td><td>Preparare una soluzione madre da 10 mg/mL disciolta in etanolo al 96-100%. Conservare a 4 gradi C avvolto in un foglio di alluminio. Vortice prima dell'uso.</td></tr><tr><td>MgCl2*6H2O&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA12288A9</td><td>Preparare un brodo da 1 M in acqua e filtrare sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtro. Concentrazione finale 1,21 mM in 2x basi ASM.</td></tr><tr><td>Mucina da stomaco suino - Tipo II</td><td>Sigma</td><td>M2378</td><td>Preparare un brodo da 10 mg/mL (2x) in acqua; mescolare accuratamente prima della sterilizzazione in autoclave. Mantenere a 4 °C.</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Fisher Scientific</td><td>S375-500</td><td>Preparare un stock da 0,2 M in acqua e sterilizzare con un filtro da 0,22 &mu; m filtro. Concentrazione finale 2,5 mM in 2x base ASM.</td></tr><tr><td>N-acetilglucosamina&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A8625</td><td>Preparare un stock da 0,25 M in acqua e sterilizzare con un filtro da 0,22 &mu; m filtro. Conservare il brodo in frigorifero a 4 °C. Concentrazione finale 0,6 mM in 2x ASM base.</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-500</td><td>Concentrazione finale 103,7 mM in base 2x ASM.</td></tr><tr><td>NaH2PO4*H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>S369-500</td><td>Preparare un stock da 0,2 M in acqua e sterilizzare con un filtro da 0,22 &mu; m filtro. Concentrazione finale 2,6 mM in 2x base ASM.</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-500</td><td>Preparare una soluzione madre da 5 M. Utilizzare per regolare il pH di 2x ASM base.</td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661-500</td><td>Concentrazione finale 4,6 mM in base 2x ASM.</td></tr><tr>Acido <td></td><td></td><td>ossolinico</td><td>Preparare una soluzione madre da 10 mg/mL 0,5 M NaOH. Filtro sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtrare e conservare a 4 °C.</td></tr><tr><td>Polimixina B</td><td></td><td></td><td>Preparare una soluzione madre da 10 mg/mL in acqua. Filtro sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtrare e conservare a 4 °C.</td></tr><tr><td>Pseudomonas Isolation Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0927-17-1</td><td>Preparare utilizzando le raccomandazioni del produttore.</td></tr><tr><td>Todd Hewitt Brodo</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0492-17-6</td><td>Preparare utilizzando le raccomandazioni del produttore.</td></tr><tr><td>Brodo di soia triptico</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0370-17-3</td><td>Preparare utilizzando le raccomandazioni del produttore.</td></tr><tr><td>Vancomicina</td><td></td><td></td><td>Preparare una soluzione madre da 50 mg/mL in acqua. Filtro sterilizzare con un 0,22 &mu; m filtrare e conservare a 4 °C.</td></tr><tr><td>Estratto di lievito</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11929</td><td></td></tr><tr><td>Forcellino sintetico di lievito senza triptofano</td><td>Sigma</td><td>Y1876</td><td>Concentrazione finale 8,0 mg/mL in 2x ASM base.</td></tr></tbody></table>

crescita di un biofilm polimicrobico rilevante per la fibrosi cistica per sondare i fenotipi della comunità

Growing a Cystic Fibrosis-Relevant Polymicrobial Biofilm to Probe Community Phenotypes

Come rappresentato nella Figura 2, sono stati riportati diversi fenotipi, tra cui (1) una riduzione del numero di cellule vitali di P. aeruginosa e S. aureus quando cresciute in comunità planctoniche miste rispetto alla monocoltura, (2) un aumento della crescita polimicrobica delle cellule di S. sanguinis e, (3) una crescita di comunità miste di P. melaninogenica come precedentemente riportato da Jean-Pierre e colleghi10.
Inoltre, come illustrato nella Figura 1 , il sistema in vitro può essere utilizzato anche per testare molecole di interesse (ad esempio, Abx, metaboliti, ecc.) una volta che le comunità di biofilm sono state stabilite. Cioè, i microbi cresciuti in co-coltura hanno mostrato (1) un aumento della suscettibilità (P. aeruginosa-Figura 3A), (2) una diminuzione della sensibilità (S. aureus e S. sanguinis-Figura 3B, C) o (3) nessun cambiamento (P. melaninogenica-Figura 3D) in presenza del farmaco FC tobramicina rispetto alla monocoltura.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66785/66785fig01v2.jpg"> 
Figura 1: Flusso di lavoro sperimentale. La coltivazione di biofilm monospecie e polimicrobici viene effettuata utilizzando una piastra di plastica a fondo piatto a 96 pozzetti in cui i microbi vengono coltivati in ASM per 24 ore a 37 °C in condizioni anossiche. Dopo la fase iniziale di incubazione, le cellule non attaccate vengono aspirate e i biofilm preformati vengono reintegrati con ASM fresco o trattati con molecole di interesse. Questo passaggio può essere ripetuto in molte iterazioni a seconda dell'ipotesi da testare. Alla fine dell'esperimento, le cellule vengono raccolte, diluite in serie e piastrate su terreni selettivi per conteggi vitali. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66785/66785fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66785/66785fig02.jpg"> 
Figura 2: Rilevamento di fenotipi polimicrobici specifici utilizzando la modellazione in vitro . Sono indicate le conta CFU/mL di P. aeruginosa (Pa), S. aureus (Sa), S. sanguinis (Strep) e P. melaninogenica (Prec) specie batteriche cresciute in monocoltura o in comunità mista (Mix) per le frazioni di biofilm (B) e planctonico (P). I dati presentati indicano la media di almeno tre repliche tecniche eseguite almeno in sei giorni diversi (n = 6) per ogni colonna a barre. L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando l'analisi ordinaria della varianza a una via (ANOVA) e i confronti multipli di Tukey posttest con *P &lt; 0,05; P &lt; 0,0001, ns = non significativo. Le barre di errore rappresentano la deviazione standard. BD = Rilevamento inferiore. Limite di rilevabilità = 102 CFU/mL. La figura è modificata da Jean-Pierre et al.10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66785/66785fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66785/66785fig03.jpg"> 
Figura 3: Le interazioni interspecie influiscono sulla suscettibilità Abx dei patogeni FC. Sono indicate le conta CFU/mL di (A) P. aeruginosa (Pa), (B) S. aureus (Sa), (C) S. sanguinis (Strep),(D) P. melaninogenica (Prev) cresciute in monocoltura o in polimicrobica (Mix) in assenza o presenza di tobramicina (+Tb) a una concentrazione di 100 μg/mL. I dati presentati indicano la media di almeno tre repliche tecniche eseguite almeno in tre giorni diversi (n = 3) per ogni colonna di barre. L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando l'analisi ordinaria della varianza a una via (ANOVA) e i confronti multipli di Tukey posttest con *P &lt; 0,05; **P &lt; 0,01 e ****P &lt; 0,0001. ns = non significativo. Le barre di errore rappresentano la deviazione standard. BD = Rilevamento inferiore. Limite di rilevabilità = 102 CFU/mL. La figura è modificata da Jean-Pierre et al.10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66785/66785fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Crescita di un biofilm polimicrobico rilevante per la fibrosi cistica per sondare i fenotipi della comunità

Most in vitro models lack the capacity to fully probe bacterial phenotypes emerging from the complex interactions observed in real-life environments. This ...

growing-cystic-fibrosis-relevant-polymicrobial-biofilm-to-probe

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Questo studio delinea un quadro per lo sviluppo di un modello di biofilm polimicrobico aggregato e l'ottimizzazione di un protocollo di estrazione dell'RNA per valutare l'espressione genica di Pseudomonas aeruginosa che riflette l'ambiente polmonare della fibrosi cistica. Le applicazioni includono la valutazione degli effetti antimicrobici e lo studio di alternative antibiotiche in condizioni rilevanti per la fibrosi cistica.

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La calotta di ghiaccio metodo permette di coltivare le piante in piastre con 96 pozzetti e non distruttivo dei tessuti radice raccolta da ogni piantina. DNA estratto da questo tessuto radice può essere utilizzata per le reazioni di genotipizzazione. Abbiamo scoperto che Ice-Cap funziona bene...

Ice-Cap: Un metodo per la Crescita Arabidopsis E piante di pomodoro in piastre con 96 pozzetti di High-Throughput Genotipizzazione

Descriviamo un metodo per identificare i regolatori sensibilizzati postembrionale di espressione proteica e la localizzazione...

RNAi di screening per identificare fenotipi postembrionale in C. elegans</em

Vi presentiamo un metodo per isolare rapido (microsecondi) eventi di calcio da più lenti flussi nelle cellule viventi mediante microscopia confocale a scansione laser. Il metodo di misura fluttuazioni di intensità di fluorescenza di indicatori di calcio da scansioni di registrazione linea di diverse centinaia di pixel in una cella. Analisi istogramma permette di isolare la scale temporali dei flussi di calcio diverse.

Misurare flussi di calcio veloce in cardiomiociti

Noi forniamo un semplice, semi-quantitativa metodo per studiare la formazione di...

Un approccio semi-quantitativo per valutare la formazione di biofilm mediante lo sviluppo spiegazzato Colony

È stato sviluppato un metodo per quantificare l'entità oro-facciale e la forma di Xenopus laevis embrioni. In questo protocollo, misurazioni tradizionali sono unite a morfometria geometrica per consentire analisi più sofisticate di sviluppo oro-facciale e difetti.

Quantificazione di orofacciale fenotipi in Xenopus

Descriviamo un metodo efficiente, robusto e redditizio per l'estrazione degli acidi nucleici da tamponi per la caratterizzazione delle comunità batteriche che utilizzano 16S rRNA gene amplicone sequenziamento. Il metodo consente un approccio di elaborazione comune per diversi tipi di campioni ed accoglie una serie di processi analitici valle.

Efficiente Nucleic Acid Estrazione e 16S rRNA sequenziamento del gene per batterica Comunità Caratterizzazione

Scopri la coltivazione di biofilm polimicrobici rilevanti per la fibrosi cistica per analizzare i fenotipi della comunità microbica. Questo metodo in vitro utilizza Pseudomonas aeruginosa e altri patogeni per studiare le interazioni microbiomiche.

Crescita di un biofilm polimicrobico rilevante per la fibrosi cistica per sondare i fenotipi della comunità

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