Un gradiente di generazione del dispositivo Microfluidic di Biologia Cellulare

Mi chiamo Jiang. Sono un poster fellow ad Harvard e al MIT per la salute, la scienza e la tecnologia. E mi chiamo Amir Manchi e sono professore universitario presso il laboratorio SANE di Harvard, MIT, divisione di Scienze e Tecnologie della Salute.

Questa diapositiva mostra il processo di schema di come realizzare il dispositivo, quindi ho solo SUA 50 spin rivestimento sopra il vapore di silicone e poi mettere una maschera più in posizione sopra un vapore di silicone e poi l'esposizione uuv e sviluppare. Possiamo finalmente ottenere, mettere questi pad sul vapore di silicone. Dopo di che possiamo semplicemente lanciare il PDMS e poi strisciare e cuocere e a poco pugno e poi possiamo semplicemente legare il legame tra il dispositivo PDMS e il glace di dritto utilizzando il plasma di ossigeno.

Ok, ora siamo nella sala di microfabbricazione all'interno del laboratorio e inizieremo con la realizzazione di alcuni strati PDMS. Quello che intendo per PDMS, il vero termine scientifico è polimetilsuboxano ed è un polimero organico. È il polimero organico a base di silicio più utilizzato.

In realtà è una miscela di due cose diverse è una miscela di base di elastomero siliconico e anche agente indurente in elastomero siliconico. Quindi il rapporto è 10 tra la base e uno tra l'agente indurente. Abbiamo bisogno di circa 10 grammi di base e quindi di conseguenza abbiamo bisogno di circa un grammo di agente indurente elastomerico e cercherò di mescolare questa base e l'agente indurente indossabili l'uno con l'altro.

Userò le pipette. Quindi, ora che la miscela è pronta, la verserò sopra il wafer di silicone. Quindi l'idea è che questi wafer di silicio abbiano alcuni motivi sopra di loro.

In realtà aiutano questo polimero PDMS a ottenere il modello e usiamo quei modelli per avere canali e scanalature e/o qualsiasi altro modello di cui abbiamo bisogno su quei polimeri. Quindi il prossimo passo è dato che abbiamo molte bolle all'interno di questa miscela, proveremo a metterla all'interno di un vuoto per evitare quelle bolle all'interno del nostro polimero. Posizionerò i gel PDMS sul wafer di silicio all'interno della camera a vuoto.

Chiuderò la camera e aprirò il vuoto. Dopo che le bolle saranno sparite, forse circa un paio di minuti, lo metteremo all'interno del forno per una notte, che è di circa 70 gradi Celsius e questo le farà solidificare. Lo schema a cui voglio che prestiate attenzione sono queste tre diverse guerre di riserva per creare gradienti in modo da avere una concentrazione zero su un lato e abbiamo una quantità specifica di concentrazione su questo lato e ci muoveremmo uniformemente verso quello e faremo un piccolo pugno dall'altra parte, che sarebbe il nostro sbocco in questo caso.

Il passo successivo consiste nel tagliare uno di questi modelli e trasferirlo in un piatto patriottico, con le superfici del modello rivolte verso l'alto. Quindi spero che possiate vedere i tre ingressi e uno scarico che vi ho spiegato su questo schema. Useremo piccoli punzoni per il nostro ingresso per poter utilizzare tubi di polietilene e userò grandi punzoni per la mia uscita per avere una guerra di riserva.

Quindi inizieremo con la prima presa. Farò un pugno, stessa cosa con il secondo e anche un altro piccolo pugno per il terzo. L'ultimo passo è quello di fare un grande pugno all'uscita.

Quindi, una volta che abbiamo finito, abbiamo lo strato A-P-D-M-S, che è lo strato superiore e userò un altro strato di vetro nella parte inferiore. E questi micro vetrini saranno il mio strato inferiore nei dispositivi micro folici. Ora siamo nella sala di microfabbricazione e ho un vetro e uno strato PDMS e voglio attaccarli l'uno all'altro.

Quello che useremo ora è una macchina chiamata pulitore al plasma. Quello che accadrà all'interno della camera è che il plasma aiuta a rompere il debole equilibrio superficiale e a sostituirli con gruppi chimici altamente reattivi e anche la superficie risulterebbe essere idrofila. Quello che succederà in questo momento è che prenderò lo stampo PDMS, che era lo strato superiore e aveva alcuni canali all'interno e toglierò il nastro che ho messo prima per evitare che la polvere si attacchi al nostro stampo.

Lo metterò all'interno della camera. La prossima cosa da fare è che ho uno strato di vetro, che è un vetrino da microscopio, e questo sarà il nostro strato inferiore all'interno del dispositivo. Quindi metterò anche questo all'interno della camera.

E chiudo completamente la camera una volta che è chiusa, prima l'alimentazione e poi pompiamo e poi dobbiamo tornare a questa macchina tra circa cinque minuti. Quello che farò è che voglio spegnere la macchina. Quindi spengo prima la pompa e poi l'alimentazione e apro la camera.

Questo suono è in realtà dovuto alla pressione negativa che è stata applicata durante il processo all'interno della camera. Quindi tolgo i diversi strati e voglio attaccarli insieme. Poiché il vetro è lo strato inferiore, lo prenderò con la mano sinistra e lo farò riparare e prenderò lo strato PDMS e lo posizionerò sopra il mio strato di vetro.

Ma dal momento che, in realtà, i modelli sono rivolti verso l'alto in questo momento, invertirò il livello PDMS. Lo metterò sul bicchiere dopo averli premuti insieme. Si attaccano molto facilmente e parte del vantaggio di questo processo di trattamento al plasma è la forza adesiva e la permanenza.

Ecco come appare alla fine. Quindi, ancora una volta, queste sono le nostre bocchette e questa è nel mio sbocco e siamo pronti per passare alla fase successiva. La cottura delle fibre all'interno del dispositivo e poi per l'incubatrice per un'ora e poi estrarre un campione SIM dall'incubatrice dopo un'ora e poi mettere il cibo per la coltura dei pesci e poi fare la soluzione.

Per realizzare la soluzione EGF, abbiamo semplicemente messo i due terreni di coltura mill come Azure, così come abbiamo appena messo i 15 nanogrammi per EGF e i 10 micromolari 50 D eseguire questa soluzione molto difficile per visualizzare il gradiente EGF attraverso il canale. Poi prendiamo due media da mulino, i media virtuali e ne mettiamo qui altri da due mulini. Queste due sedute sono solo colture normali, normale, normale infusione di colture nel dispositivo.

Quindi rimuovo la bolla, mi collego di nuovo, anche questa è una bolla mobile M che scende di nuovo. E poi uso solo 15 nanogrammi di EGF e 10 micromolari di fi dextra e due mil di terreno dal prelievo, il campione e metto la siringa e poi si conosce la bolla. E poi basta cambiare soluzione, tornare indietro.

La soluzione viene inserita nella siringa del tipo a gas e spinge SH per diverse volte per rimuovere la bolla, la soluzione della siringa di tutti gli interruttori sta arrivando prima qui e poi cambia la barra e la soluzione attraverso la barra a tre vie e né il tubo e la soluzione che esce dal tubo. E poi, dopo la miscela, la soluzione sta uscendo, possiamo semplicemente inserire il tubo nel dispositivo My Predict e poi tutte e tre le soluzioni sono le stesse. Puoi semplicemente collegare delicatamente, collegare la rete del canale di infusione.

Quindi, infine, due sono i normali media culturali. Uno è quello di utilizzare i media culturali con il FEG e di confermare il profilo di gradiente del FEG. Questa è la cella in net, cell in net.

Questo sarà l'uscita della cella, quindi la generazione del gradiente utilizzando i tre canali hub e quindi generare il grad all'interno dell'area della cella. Quindi, normalmente, quello che voglio fare, facciamo solo l'alloggiamento della cella, la sospensione della cella, l'ubicazione dell'uscita, e poi possiamo semplicemente aspirare delicatamente in rete e poi la cella è il flusso attraverso l'area della cella è automaticamente seduta e si sistemano lungo il rivestimento e quindi assicurarsi che la cella si diffonda completamente. E dopo aver fatto, dopo esserci assicurati che la cellula si diffonda completamente, possiamo solo, possiamo semplicemente iniziare a infondere e quindi studiare la migrazione cellulare utilizzando il dispositivo di generazione radio.